蒙古羊骨髓间充质干细胞的分离培养及多向诱导分化

本研究旨在建立蒙古羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)体外分离、纯化、增殖方法,诱导其向脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞分化。穿刺法抽取蒙古羊骨髓组织,采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化BMSC,增殖,并测定其生长曲线及细胞倍增时间。对第3代蒙古羊BMSC进行成脂、成骨及成软骨诱导,观察诱导后的细胞形态。采用油红O、茜素红、HE等染色法在组织学水平对BMSC进行成脂、成骨和成软骨分化鉴定。结果显示,蒙古羊BMSC呈现均一梭形成纤维细胞样生长,生长曲线呈S型,生长增殖能力良好。在不同分化诱导之后,细胞呈现脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞的表型特征。表明获得的蒙古羊BMSC具有多向分化潜能,所分离细胞确为骨髓间充质干细胞。     

含水率和发酵时间对以全株玉米为基础的发酵全混合日粮养分的影响

本试验研究了含水率和发酵时间对全株玉米发酵全混合日粮(FTMR)发酵品质及养分含量的影响,旨在为FTMR的生产提供参考。试验选用腊熟期全株玉米为主要原料,在保持饲粮精粗比例约为3∶7(干物质基础)的前提下,与干花生秧、混合精料等饲料充分混合配制成含水率为35%的全混合日粮(TMR),然后加水调整TMR含水率分别为40%、45%、50%和55%,将这5种含水率的TMR快速装入塑料密封袋内,压实并抽去空气后密封保存制备FTMR。分别在发酵后的第0、10、20、30、40、50、60、70和80天,测定常规养分含量、发酵指标及霉菌毒素含量。结果表明:5种含水率的TMR在发酵至第80天时感官指标良好,均无发霉现象;发酵初期各组均有涨袋现象,随着发酵时间的增加,涨袋现象逐渐消失;含水率对FTMR常规养分含量影响较小;发酵前20天,pH随含水率的升高而升高,此后随含水率的升高而下降; 45%、50%和55%组具有较高的乳酸含量;乙酸、丙酸含量随发酵时间增加而增加,只在发酵的第10、20、30天检出微量的丁酸;各组均未检出玉米赤霉烯酮、呕吐毒素及黄曲霉毒素B1。综合分析认为,本试验条件下,全株玉米FTMR的含水率以45%和50%为宜,发酵时间不少于40 d。     

蒙古马骨髓间充质干细胞的分离培养及多向分化潜能的研究

旨在探索一个高效分离和扩增蒙古马骨髓间充质干细胞的方法,并通过形态学和多向分化能力进行鉴定.抽取蒙古马骨髓标本,利用密度梯度离心和差异贴壁法分离MSCs,体外扩增后传代,进行相差显微镜形态学观察.在地塞米松、IBMX、胰岛素及罗格列酮的作用下向脂肪细胞诱导分化,以及在地塞米松、VitC、β-磷酸甘油等作用下向成骨细胞诱导分化.结果显示原代和传代细胞呈梭形成纤维细胞样外观,生长增殖能力良好.经定向诱导分化后,细胞分别呈现脂肪细胞、成骨细胞的表型特征.证明所纯化的细胞为尚未分化的基质细胞,而不是组织的成体细胞,它具有多向分化潜能.     

蒙古马脂肪来源间充质干细胞体外成脂和成骨诱导分化

取蒙古马背臀部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养脂肪组织来源的间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs),经过原代培养和传代培养,分别加入成脂诱导剂和成骨诱导剂培养,采用倒置显微镜观察诱导后的细胞形态变化,并通过油红O染色和茜...     

端粒逆转录酶基因修饰对绵羊骨髓间充质干细胞端粒酶活性影响的研究

骨髓间充质干细胞(BMSC)具有多向分化的特性,但其生命周期有限,为进一步探讨端粒逆转录酶(TERT)对端粒酶活性的影响,本试验利用将外源性TERT导入间充质干细胞技术,构建重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TERT,将其转染BMSC,通过筛选及鉴定,结果显示成功构建了重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TERT.将TERT-BMSCs在体外进行传代培养及生长曲线的测定,利用PCR技术对其原有干细胞因子的表达情况进行了鉴定.结果显示,TERT-BMSC具有快速扩增的能力,细胞形态良好,且仍具有干细胞特性.本试验结果揭示了外源性TERT基因的表达能激活绵羊BMSC的端粒酶活性.     

立式粪肥发酵罐尾气废热回收利用及净化除臭嫁接改造技术

本文简述了立式粪肥发酵罐尾气废热高效回收循环利用的方案和冷凝肥水回收除臭嫁接技术,详细描述了热交换器的制作及安装工艺.在粪肥发酵过程中可为立式粪肥发酵罐提供不额外消耗能源,同时冷凝回收发酵尾气中的氨和臭气.     

一体化集装箱仔猪保育舍工艺设计

仔猪断奶后,因自身机能不健全和抗应激能力弱,饲养管理稍有不当将造成生长发育迟缓或死淘率增高,严重影响养殖效率和效益.以冷藏集装箱为猪舍框架,充分利用其良好的保温隔热和密闭性能,根据断奶仔猪的生理需求和生长需要,对饲养设备、饲喂设备、环控设施设备和粪污收集设备等进行一体化设计、建设和配套施工,可实现猪舍整体设计、科学配置和标准化建设,为断奶仔猪提供一个舒适的生长环境.本试验在冬春季应用一体化集装箱仔猪保育舍共饲养断奶仔猪3批,其昼夜温差不超过2℃,死淘率低于1％,日增重达600 g以上.     

崂山奶山羊永生化骨髓间充质干细胞的诱导分化研究

为研究崂山奶山羊永生化骨髓间充质干细胞(BMSCs)的诱导分化潜能,采用P3代BMSCs和P30代TERT-BMSCs进行体外成脂和成神经诱导分化。结果显示,当细胞传至P30代时,TERT-BMSCs生长旺盛;在成脂诱导后,P3代BMSCs和P30代TERT-BMSCs均能观察到细胞中透明脂滴的形成,油红O染料染色后可见脂滴被染成红色;在成神经诱导后,P3代BMSCs和P30代TERT-BMSCs均能形成树突样或三角形的形态,甲苯胺蓝染色后可观察到细胞中尼氏体的存在。综上提示,永生化的崂山奶山羊BMSCs在多次传代后仍具有较强的多向诱导分化能力,这为永生化MSCs的广泛应用提供了理论依据。     

猪源乳酸菌菌株的生物学特性研究

为了研究乳酸菌的生物学特性,为猪用微生态制剂的研发提供菌种资源及理论依据,试验选择从健康仔猪肠道及粪便中分离鉴定的4株乳酸菌(C1、C2、F1、F2),分别进行生长特性试验、药敏试验、抑菌试验和对酸、胆盐、温度的耐受情况以及模拟人工胃液、肠液的生存情况和安全性试验研究,从而评估各菌株的生物学特性。结果表明:4株乳酸菌对大肠杆菌均有一定的抑制作用;对酸、胆盐、温度均有一定的耐受力;在模拟肠道耐受性试验中,各菌株都保持一定的存活率,其中C2、F1、F2的各种耐受力都强于C1;安全性试验中,各菌株均未引起小鼠中毒和内脏出血等症状,证明这4株菌株均是安全的。说明C2、F1、F2可作为下一步猪用微生态制剂益生效果研究试验的优良菌株。     

骨髓间充质干细胞为核供体的克隆绵羊的生产与鉴定

本研究旨在采用骨髓间充质干细胞（BMSCs）为核供体进行体细胞核移植,以获得成体干细胞克隆绵羊。选择幼体绵羊BMSCs为核供体,构建重构胚进行克隆胚胎移植,克隆绵羊诞生后,选取IASG上公布的绵羊10个微卫星标记位点,PCR扩增克隆羊、供体细胞及代孕母羊微卫星DNA,利用Quantity One软件进行基因分型,计算供体细胞与克隆羊之间的父子关系相对机会（RCP）值。结果显示,以幼体绵羊BMSCs为核供体,与去核成熟卵母细胞进行核移植,构建重构胚进行电融合,其融合率达80.62%,重构胚发育至桑椹胚阶段,经手术植入20只代孕母羊,获得克隆绵羊5只,成活3只。克隆羊基因型与供体细胞一致,供体细胞与克隆羊之间的RCP≥99.999%,证明克隆羊来自幼体绵羊BMSCs。本试验最终成功获得了首例以BMSCs为核供体的克隆绵羊。