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利用红花油体系统表达人成纤维细胞生长因子10(FGF10)。将人源FGF10基因克隆至植物油体表达载体p CAMBIA1390Do(p1390Do)上,构建重组融合表达质粒p1390Do FGF10。通过农杆菌介导的叶盘法将FGF10转入红花,采用潮霉素(Hyg)筛选获得红花阳性苗。转基因红花经PCR、Southern和Western检测。PCR检测和Southern分析结果表明,Oleosin-FGF10基因已经成功转入红花中。Band Scand 5.0软件分析Western电泳图图谱结果显示,FGF10融合蛋白含量约占转基因红花种子可溶性蛋白的3.25%,并具有良好的反应原性。 相似文献
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【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)"中蔬6号",采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。 相似文献
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陕西省地灵花叶病害的鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
利用寄主鉴定、介体鉴定、电镜观察和生理性病害鉴定等方法,对陕西省地灵花叶病害进行了系统 研究。结果表明,陕西地灵花叶病害不是由病原微生物引起的,而是由环境条件的改变引起的。 相似文献
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【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)“中蔬6号”,采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。 相似文献
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目的筛选红花不定芽高效诱导条件,结合红花茎尖微嫁接技术,解决转基因红花再生效率低的问题。方法以新疆塔城裕民无刺红花的子叶作为外植体,子叶--愈伤组织--不定芽分化--伸长--生根/嫁接,分别对红花不定芽高效诱导培养基、伸长培养基和生根培养基进行筛选。结果确定了不定芽分化培养基:MS+1.0mg/L TDZ+0.5mg/L NAA,不定芽伸长培养基:MS+1%蔗糖,生根培养基:White+3mg/L IBA+Ag NO3 10mg/L+2%蔗糖+0.2g/L活性炭,生根率为12.5%;以14d红花实生苗做砧木,劈接法嫁接再生植株的成活率为53.3%。结论本研究采用不定芽高效诱导与茎尖微嫁接技术相结合的方法,成功的获得了再生植株。 相似文献
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【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的hFGF21-smGFP融合基因和hFGF21基因克隆进PVX表达载体,构建重组表达质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。采用冻融法将质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP、pgR107-smGFP和pgR107-His-hFGF21转入根瘤农杆菌GV3101中,通过农杆菌介导注射侵染接种本氏烟的叶片,采用SDS-PAGE、Western blotting和ELISA检测hFGF21-smGFP和hFGF21蛋白的表达情况。烟草叶片表达的融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,再用重组牛肠激酶(rbEK)裂解,获得纯度较高的重组hFGF21活性蛋白。hFGF21调节葡萄糖吸收活性用微量化的GOD-POD法检测。【结果】成功构建了植物病毒双元表达载体pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。表型观察发现,侵染第7天,烟草外源蛋白积累最高,smGFP和hFGF21-smGFP蛋白的积累主要在细胞质中。SDS-PAGE、Western blotting和ELISA分析表明,hFGF21重组蛋白可在烟草中有效表达,表达量高达500μg/g(鲜叶质量)。生物活性检测结果表明,纯化的hFGF21蛋白可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的吸收。【结论】利用PVX病毒载体,在本氏烟草中表达的重组hFGF21蛋白具备生物活性。 相似文献