vvi-miR160s介导VvARF18应答赤霉素调控葡萄种子的发育

【目的】研究vvi-miR160家族（vvi-miR160s）及其靶基因在‘魏可’葡萄种子发育过程中的作用,探究其应答赤霉素（GA）调控葡萄果实无核的潜在机理。【方法】采用miR-RACE、生物信息学分析、RT-qPCR、RLM-RACE等方法,鉴定vvi-miR160家族成员及其靶基因,分析vvi-miR160s及其靶基因应答GA的时空表达模式及其潜在功能。【结果】花前GA处理强烈抑制‘魏可’葡萄胚珠及种子发育,高效诱导其无核,且无核率达99.8%。克隆鉴定了VvMIR160s前体基因序列（501 bp）及成熟体序列,且它们在不同物种间具有较高的保守性;基于vvi-miR160s序列,预测到靶基因VvARF18,利用RLM-RACE技术检测到vvi-miR160s对VvARF18的裂解位点在第10和第11位之间,裂解频度9/17,证明VvARF18是vvi-miR160s的真实靶基因。该靶基因编码683个氨基酸,在398—411位存在核定位信号,且该蛋白亚细胞定位于细胞核上。VvARF18与其他物种间序列的同源保守性较高,基因结构相似,其中VvARF18蛋白与茶、烟草、梅花等物种亲缘关系较近。VvARF18启动子中包含4种作用元件,且含有较多激素相关元件。RT-qPCR结果显示,随着葡萄果实的发育,vvi-miR160c/d/e呈现‘V’形表达趋势,在硬核种子发育期表达较低,而VvARF18表现出与前者相反的表达趋势,在硬核种子发育期呈现高表达,表明vvi-miR160c/d/e对VvARF18负调控,但vvi-miR160a/b与VvARF18表达水平却不存在明显负相关。GA处理极显著地上调了vvi-miR160a/b在葡萄硬核种子发育期的表达,同时也显著抑制了VvARF18在同时期的表达,且它们的表达水平呈负相关,表明GA处理促进了vvi-miR160a/b对VvARF18的负调控作用;相反,GA减弱了vvi-miR160c/d/e对VvARF18的负调控作用。【结论】在vvi-miR160家族中,vvi-miR160c/d/e可能介导VvARF18在葡萄种子发育的特定阶段调控种子的发育形成,而vvi-miR160a/b可能主要介导VvARF18参与调控GA诱导葡萄种子败育的过程。     

葡萄籽原花青素的提取工艺优化及其抗氧化活性研究

以新疆地产赤霞珠葡萄籽为原料，采用响应面法对微波辅助提取葡萄籽原花青素的工艺进行优化，并对其体外抗氧化活性进行评价。结果表明，最优提取工艺条件为：液料比25∶1（mL/g），乙醇浓度60%，微波功率427 W，微波时间3 min，在该条件下葡萄籽原花青素得率为8.66%±0.25%；抗氧化试验结果表明：葡萄籽原花青素具有较强的清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、羟基及2,2-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（ABTS）自由基的能力，其在三种体系中的IC50值分别为3.71、4.05和3.78 μg/mL，是一种极具开发潜力的天然抗氧化剂。     

11个葡萄品种在乐山地区的花芽分化规律

研究了11个葡萄品种3年生树在四川乐山地区避雨栽培条件下的花芽分化表现。结果表明,结果母枝的花芽分化率,魏可、维多利亚、黑芭拉多、金手指、金优2号和巨玫瑰6个品种的都高于50%,较易形成花芽;户太8号、巨峰、夏黑的在43%~48%;美人指和红指较难形成花芽。结果母枝不同节位的花芽分化率,多数品种在第3节位≥50%;结果枝上花穗着生节位在第3.8~4.9节,其中双花率以巨玫瑰、巨峰和户太8号较高,分别为83.45%、73.61%和73.06%。以结果母枝的花芽分化率≥50%节位作为冬剪的最低节位,则金优2号、户太8号、巨玫瑰、金手指、维多利亚5个品种在第3~4节,黑芭拉多和巨峰2个品种在第2~3节,魏可在1~2节。夏黑表现花芽分化率较低,为43.33%,可能与夏黑不耐弱光有关,设施栽培时应加强透光性。     

酿酒山葡萄新品种‘紫晶甘露’

‘紫晶甘露’是以优质酿酒山葡萄酒品种‘左山二’为母本，‘哈桑’为父本杂交选育而成的能够单品种酿造干红酒的山葡萄新品种。果穗圆锥形，有岐肩或副穗。果实圆球形，果皮黑色，果肉绿色，无肉囊，种子2 ~ 4粒。生长势强，抗寒、抗病性极强，4年丰产，4 ~ 6年平均产量1 876 kg • km-2。果实可溶性固形物含量达到21.0%，总酸11.6 g • L-1，出汁率65.5%。     

利用天敌防治葡萄园害虫研究进展

葡萄是一种重要的经济水果,除鲜食外还可用于酿酒、制干、制汁等。在葡萄挂果到收获期间采用化学药剂来防治园内害虫极有可能造成农药残留,危害人体健康。利用天敌防治葡萄园内害虫是确保葡萄及其制品质量安全的重要途径。总结了国内外葡萄园常见害虫的主要捕食性和寄生性天敌,以及利用天敌防治葡萄园重要虫害的策略,并探讨了该领域目前存在的问题及未来的研究方向。     

凉州灌区酿酒葡萄氮肥施用研究

[目的]通过田间试验,研究酿酒葡萄对不同氮肥施用量及施用深度的响应,为甘肃省凉州灌区酿酒葡萄氮肥合理施用提供依据。[方法]在凉州区设置酿酒葡萄氮肥施用量及施用深度试验,研究不同氮肥施用量及施用深度对酿酒葡萄产量、收获期果实、叶片和叶柄含氮量及收获期和第2a萌芽期0—200cm土层硝态氮含量的影响。[结果]10和30cm施肥深度之间酿酒葡萄产量、收获期果实、叶片和叶柄含氮量及收获期和第2a萌芽期0—200cm土层硝态氮含量差异不显著。氮肥施用量对酿酒葡萄产量和叶柄含氮量的影响达到显著水平,对果实和叶片含氮量的影响不明显,其中高氮(300kg/hm~2)和中氮(240kg/hm~2)处理之间酿酒葡萄产量、果实含氮量、叶片含氮量、叶柄含氮量差异不明显,但是高氮和中氮处理与低氮(180kg/hm~2)处理相比,产量增加28.6%和24.1%,叶片含氮量增加17.4%和11.3%,叶柄含氮量增加了40.7%和33.0%,而对于收获期和第2a萌芽期0—200cm土层硝态氮含量,高氮处理相对于中氮和低氮处理增加了53.8%,94.4%和41.8%,76.1%,氮肥施用量和施用深度的交互效应,仅叶片含氮量达到显著水平。[结论]受土壤质地和传统沟灌影响,氮肥施用深度对酿酒葡萄影响效果不明显,240kg/hm~2为酿酒葡萄较为合适的氮肥施用量,但氮素也存在损失风险。所以,凉州灌区酿酒葡萄合理施肥应该和灌水方式进行结合来确定合理的施肥量和施肥方式。     

栽培中赤霉酸处理对葡萄品质和耐藏力的影响

通过对比试验研究了栽培中不同赤霉酸(GA3)处理次数对葡萄品质和耐藏力的影响。结果表明:随着赤霉酸处理次数的增多,葡萄的果梗直径、果形指数、单果粒质量、脱粒率、脱粒指数、空腔率、空腔直径、褐变率和腐烂率升高,果刷长度、可溶性固形物含量和VC含量降低,且外观色泽变淡。综合考虑栽培中赤霉酸处理对葡萄品质和耐藏力的影响,建议用10 mg/kg赤霉酸花前10 d处理1次或花前10 d和花后10 d各处理1次来提高葡萄的单果粒质量,保持果实较低的褐变率和腐烂率。     

不同处理对刺葡萄愈伤组织花青素和原花青素生物合成的影响

以刺葡萄 2 个同质不同型的愈伤组织细胞系为材料，研究不同处理因子对其花青素和原花青素合成能力的影响。试验结果表明，刺葡萄 DLR 细胞系具有高产花青素和原花青素的能力，在培养至 45 d 时，其花青素与原花青素的含量均达到最高值，分别为 113.85 μg/g（FW）和 3 562.95 μg/g（FW）；低温、高温、肉桂酸、壳聚糖、紫外线、黑暗和 KT 等因子，对 DLR 细胞系花青素和原花青素的累积表现出不同的效应；其中，4 ℃低温处理下，DLR 细胞花青素的积累效果最佳，比对照提高了 2.14 倍；壳聚糖处理下，原花青素积累效果最佳，是对照的 2.84 倍。刺葡萄 DLW 细胞系不具有或极低的花青素和原花青素合成能力，处理因子调控对其作用效果不明显。本研究的结论为进一步进行刺葡萄细胞花青素和原花青素合成调控奠定了础。     

无核葡萄种质亲缘关系的SRAP研究

为充分了解及更合理地利用无核葡萄的种质资源,辅助无核葡萄育种,本研究采用SRAP分子标记技术,对23个国内外主流无核葡萄品种的种质亲缘关系进行分析。结果表明:从45对SRAP引物中筛选出38对多态性引物,共扩增出236条谱带,其中171条为多态性谱带,多态性谱带百分率为72.4%。遗传相似分析显示,供试材料间遗传相似系数的变化范围为0.58~0.90,遗传距离在1.0313~4.9643范围内变化。在遗传相似系数为0.61处,可将供试材料分为2个大类群,在相似系数为0.66处,Ⅰ类群和Ⅱ类群均可分为2个亚群。说明23个品种总体来讲亲缘关系较远,特别欧美杂种具有较高的遗传多样性,部分欧亚种品种间亲缘关系较近,杂交育种时应注意亲本选择。     

施氮时期对干旱荒漠区‘蛇龙珠’葡萄叶片糖代谢及果实品质的影响

为探索不同生育期施入定量氮肥对葡萄叶片糖代谢及采收期果实品质的影响,以酿酒葡萄‘蛇龙珠’为材料,在萌芽期(A)、新梢生长期(B)、开花期(C)、果实第一次膨大期(D)、副梢生长旺期(E)和果实第二次膨大期(F)分别施入尿素300 kg·hm-2,不施氮肥(G)为对照,测定不同时期叶片糖水平、糖代谢酶活性和采收期果实的品质指标。结果表明:各时期施入氮肥对叶片比叶重无影响,显著增加了DBF5(花前5 d)和DAF85(花后85 d)叶绿素相对含量。F不利于叶片葡萄糖和果糖的积累,C在DAF116(花后116 d)时叶片(干重)蔗糖含量最高,达到3.33 mg·g-1;与DAF85相比,A和B在DAF116时叶片果糖含量增加约13.0%,C、D、E和F分别下降了33.1%、36.3%、48.5%和27.5%; A、B、C、D和E之间淀粉含量在DAF85和DAF116均无显著差异,但均高于相应时期对照。E在DAF85和DAF116时叶片SS显著高于其它处理; C在DAF25、DAF55、DAF85和DAF116时,NI活性(萄萄糖浓度·鲜重-1)最高,分别为0.22、0.25、0.33 mmol·h-1·g-1和0.30 mmol·h-1·g-1。C在采收期果实可溶性固形物和Vc含量较高,可滴定酸含量最低,B葡萄产量最高,达到17 178.66 kg·hm-2,较对照提高了31.74%。