华山松SSR-PCR反应体系优化

[目的]建立华山松SSR-PCR最佳反应体系,为华山松种质资源的分子标记辅助育种、遗传多样性分析及遗传图谱构建研究提供理论参考.[方法]以华山松幼嫩针叶为材料,分别采用试剂盒法、SDS法和改良CTAB法提取华山松基因组DNA,确定华山松DNA最佳的提取方法.通过L16(44)正交试验设计对华山松SSR-PCR反应体系中引物用量(A)、dNTP用量(B)、Taq DNA聚合酶用量(C)和DNA模板用量(D)进行优化,获得华山松SSR-PCR最佳反应体系.[结果]改良CTAB法提取的基因组DNA浓度为92.1~1786.3 ng/μL,OD260/OD280为1.80~2.07,OD260/OD230比值约2.0,条带明亮且清晰,无弥散现象,表明该方法提取效果最佳.正交试验极差分析结果显示,4个因素影响华山松SSR-PCR反应体系扩增效果的主次顺序为A>D>B>C,最优水平组合为A4B2C2D2.正交试验方差分析结果显示,4个因素影响华山松SSR-PCR反应体系扩增效果的主次顺序为A>D>C>B,最优水平组合为A4D2C2B2.结合正交试验16个组合的评分结果,最终确定华山松SSR-PCR最佳反应体系(20.00μL):10μmol/L引物0.35μL,50 ng/μL DNA模板1.00μL,10 mmol/L dNTP 2.00μL,5 U/μL Taq DNA聚合酶1.20μL,10×PCR Buffer(含Mg2+15 mmol/L)2.00μL,用ddH2O补足至20.00μL.[结论]优化获得的华山松SSR-PCR最佳反应体系可应用于华山松种质资源评价及分子标记辅助育种等研究.     

甘肃华山松溃疡病病原真菌类群的初步鉴定

近年来甘肃陇南地区华山松溃疡病发生严重，导致华山松大面积死亡，但有关病害发生的原因等尚不清楚。采用组织分离法从感病华山松的健康部位、病健交界处、子实体及病组织处分离获得97个真菌菌株，结合形态学及系统学对分离到的菌株进行初步分析。结果显示，所得菌株分为9个种，其中Neocosmospora silvicola占14.17%，Fusicolla violacea占1.67%，Microcera sp.占8.33%，Neonectria neomacrospora占11.67%，Dermea pinicola占8.33%，Nematogonum ferrugineum占9.17%，Pezicula sporulosa占4.17%，Phaeoacremonium fraxinopennsylvanicum占14.17%，Sarea resinae占9.17%。以丛赤壳科为优势菌群，占总菌株数量的44.33%；初步推断Neocosmospora silvicola为疑似病原菌。     

不同种源华山松花粉形态变异与生活力分析

【目的】研究不同种源和不同无性系华山松花粉形态的区别,以及不同贮藏条件下花粉生活力的差异。【方法】以6个种源18个无性系的华山松花粉为试材,对其花粉全长、体长、体高及气囊的长、宽、高等形态指标进行测量与分析,同时利用染色法对室温及4,-20℃下贮藏0,10,20,30和90 d的华山松花粉生活力进行测定。【结果】花粉形态大小在不同种源和无性系间均存在极显著差异(P0.01),对于不同种源,花粉全长、体高、体长均以楚雄紫溪山种源最高,昆明宜良种源最低;气囊长、宽、高均以大理巍山种源最高,保山腾冲种源最低。对于不同无性系,花粉全长以楚雄紫溪山93号无性系最大((63.09±10.95)μm);花粉体高以昆明宜良96号无性系最大((45.06±7.06)μm);花粉体长以楚雄紫溪山74号无性系最大((49.73±8.98)μm);花粉气囊的长度以大理巍山46号无性系最大((50.34±7.34)μm),气囊的宽度、高度均以大理巍山50号无性系最大((26.02±4.93)和(30.07±5.13)μm)。不同种源间,以楚雄紫溪山种源花粉形态各指标的平均变异系数最大(17.32%),昆明宜良的变异系数最小(14.65%);在花粉各形态指标中,以气囊高变异系数最大(19.15%),花粉全长变异系数最小(13.70%)。当贮藏时间为0 d时,不同种源和无性系华山松鲜花粉生活力均保持在90%以上,贮藏温度为-20℃时花粉能保持较高的生活力,贮藏90 d时花粉活力明显低于贮藏10 d时,但仍均保持在50%以上。【结论】种源及无性系的不同对华山松花粉的形态变异存在一定程度影响;-20℃为华山松花粉最适贮藏温度,花粉生活力随贮藏时间的增加而下降,但其耐贮藏性较好。     

秦岭西部林区华山松大小蠹调查与防治分析

采用野外定点调查的方法,观察研究了不同海拔地区华山松大小蠹生活史和生活习性。结果表明,秦岭西部华山松大小蠹以幼虫越冬,华山松大小蠹存在世代重叠现象,在同一样地也可能存在第2代成虫与越冬代幼虫羽化的成虫同时扬飞的现象,但大部分华山松大小蠹也能完成2个世代。宝鸡市马头滩林业局在多年来各种防治方法经验累积的基础上,采取综合防治方法控制华山松大小蠹的危害。     

华山松大小蠹2个甲羟戊酸路径基因的克隆与表达

香叶基二磷酸合酶/法尼基焦磷酸（G/FPPS）和异戊二烯焦磷酸异构酶（IDI）是单萜和倍半萜生物合成途径分支点的关键酶。通过克隆华山松大小蠹DaG/FPPS和DaIDI基因的全长序列，预测基因和编码蛋白的性质、结构和功能，并对序列特征和不同发育时期（幼虫、蛹、初羽化期成虫和扩散期成虫）以及不同组织（头、前中肠、后中肠、后肠和剩余躯体）DaG/FPPS和DaIDI表达的研究，旨在揭示DaG/FPPS和DaIDI在华山松大小蠹信息化学物质合成中的分子调控机制。采用RT-PCR和RACE克隆华山松大小蠹DaG/FPPS和DaIDI基因，DNAStar、Blast、ExpasyProtscale、SignalP 4.1、PSORT和TargetP等多种生物信息学方法对基因全长cDNA序列、基本理化性质、系统进化关系、信号肽和蛋白亚细胞定位等进行分析。用Real-time PCR检测DaG/FPPS和DaIDI在华山松大小蠹不同发育时期和不同组织中的表达。结果表明，克隆获得华山松大小蠹香叶基二磷酸合酶/法尼基焦磷酸DaG/FPPS和异戊二烯焦磷酸异构酶DaIDI全长cDNA序列，分别命名为DaG/FPPS和DaIDI，DaG/FPPS编码的氨基酸序列与山松大小蠹DpF/GPPS相似度最高达95%，氨基酸序列含有一个RALS 四肽基序、7 个异戊烯基转移酶保守区（Ⅰ-Ⅶ）和2个典型的DD**D的天冬氨酸富含区；DaIDI编码的氨基酸序列与山松大小蠹IDI相似度最高，达到92%。Expasy Protscale结果表明DaG/FPPS蛋白疏水性氨基酸明显多于亲水性氨基酸，推测其为疏水性蛋白，而DaIDI蛋白亲水性氨基酸数量大于疏水性氨基酸，故推测DaIDI为亲水性蛋白，有较好的水溶性。信号肽预测结果表明，DaG/FPPS和DaIDI均不含信号肽，TargetP结果表明，DaG/FPPS和DaIDI蛋白含线粒体靶向肽，结合PSORT结果推测DaG/FPPS和DaIDI均定位于线粒体。华山松大小蠹DaG/FPPS和DaIDI在不同发育时期和不同组织中均有表达，其中完全羽化期与扩散期成虫保持一致，该阶段表达量最高，不同组织中前中肠表达量最高。     

华山松大小蠹虫的防治方法

湖北省2008年首次发现华山松大小蠹虫危害,近几年,以神龙架为中心,逐渐向鄂西北地区扩散。由于防治难度大,致死率高,已成为仅次于松材线虫的林业有害生物。为了了解防治此虫的方法,湖北省森防总站派技术人员摸清鄂西北的地区的华山松大小蠹发生面积,并对此种进行科学研究,了解其虫体特征、发生规律,并研究防治方法。     

论华山松的育苗及病虫害防治技术

华山松原产于中国,是松科中最著名的常绿品种之一。华山松喜温凉湿润,耐干燥贫瘠,是家具建筑中经常使用到的原木材,其树皮可提取栲胶、树叶可提炼芳香油、种子也可用来榨油等。本文将介绍华山松种子的处理、育苗、播种等培育技术的管理,并赘述华山松病虫害的防治工作。     

洮坪林场华山松培育规划

华山松高大挺拔,针叶苍翠,冠形优美,生长迅速,是优良的绿化树种,可用作园景树、庭荫树、行道树及林带树,市场上苗木供不应求。本文介绍了亦洮坪林场华山松大苗培育规划。     

大面积华山松低产林改造综合技术

随着我国华山松低产林的增加,研究其改造综合技术凸显出重要意义。首先对华山松做了概述,分析了大面积华山松低产林改造的必要性。在探讨华山松林的造林技术及其育苗及播种技术的同时,研究了华山松低产改造综合技术。