沼泽型水牛ALK3基因克隆分析与表达模式研究

试验旨在对沼泽型水牛ALK3基因进行克隆、生物信息学分析,并对其在水牛组织中的表达规律进行系统研究。根据GenBank中已公布的牛ALK3基因序列设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增、克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法分析和预测了水牛ALK3的遗传进化及蛋白质的理化性质、二级和三级结构;并应用QRT-PCR技术对ALK3基因在水牛组织中的表达进行了差异分析。结果表明,水牛ALK3基因编码区全长1 599bp,共编码532个氨基酸。多重序列比较分析显示,水牛ALK3核苷酸序列与牛、绵羊、猪、马、人和小鼠相应序列的同源性分别为98%、96%、95%、93%、94%和91%。系统进化树分析显示,ALK3基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。对ALK3蛋白质的分析表明该蛋白呈弱碱性,有信号肽,细胞亚定位于胞膜上,存在丝氨酸/苏氨酸激酶和GS等结构。定量分析结果显示,ALK3在水牛生殖脊、心脏、肝脏、颗粒细胞、肺脏、卵丘细胞、肾脏、下丘脑、垂体、大脑等15种组织或细胞中有不同程度的表达,其中卵巢中表达量最高,垂体、肺脏和睾丸次之,卵丘细胞表达量最低。本研究成功克隆了沼泽型水牛ALK3基因,并研究了其在不同水牛组织细胞中的表达规律,为阐明其在水牛繁殖过程中的功能及转基因载体构建中的应用研究奠定了理论基础。     

水牛Sox2基因原核表达载体的构建与诱导表达

水牛Sox2基因对体内胚胎的早期发育至关重要,它是重要的多能性干细胞(iPS细胞)标记基因之一,试验通过双酶切重组质粒pMD18-T-Sox2,将水牛Sox2基因定向克隆入原核载体pET-32a(+),成功构建了原核表达载体pET-Sox2,然后利用IPTG诱导,获得诱导表达蛋白,并经过SDS-PAGE电泳分析和Wes...     

三峡库区耕地利用变化及保护开发途径--以重庆市忠县为例

根据忠县1996—2003年土地详查与变更数据及有关调查、统计资料,分析了三峡库区的忠县耕地利用变化的基本态势及其主要原因。研究表明,忠县近8a来耕地数量变化总体呈减少之势;土地垦殖率高,中低产田面积大,后备资源贫乏;耕地流失强度大,质量下降;生态退耕、耕地改园地和水域淹没在耕地减少中占有较大比重。并对此提出了严格控制非农建设占用耕地,提高耕地比较经济效益,加强耕地的整理和复垦工作,搞好以农田水利基本建设为重点的综合整治和严格控制人口数量等保护开发途径。     

猪卵母细胞电激活方法初探

本实验比较了已报道的4组常用的猪卵母细胞电激活方法,并对电激活参数进行系统探索。结果表明:电激活参数(125 V/mm,80μs,1 DC),激活液0.3 mol/L甘露醇+0.1 mmol/L MgSO4+0.1 mmmol/L CaCl2+0.01%PVA的激活方案,囊胚发育率显著优于其他3组方案(25.6%vs 12.6%vs 21.5%vs 15.2,P<0.05);脉冲电压100 V/mm时3次脉冲激活组囊胚发育率优于2次和1次脉冲组(27.3%vs 16.2%vs 21.7%,P<0.05);激活液中Ca2+浓度(0.1%,0.05%)对激活效果无显著影响,囊胚发育率分别为36.5%和40.9%;本实验结果中电激活效果明显优于化学激活(46.3%vs 29.4%,P<0.05)。通过上述实验本研究建立了一种优化的猪卵母细胞电激活方法,为生产单精子显微注射与体细胞核移植猪奠定了基础。     

大鼠OSP-1启动子克隆与表达检测

[目的]克隆大鼠卵巢特异性启动子（OSP-1）片段，并在细胞水平检测该启动子调控标记基因的组织特异性表达。[方法]参考已知大鼠OSP-1序列设计特异性引物，PcR扩增大鼠OSP-1启动子片段并与已公布的大鼠OSP—1序列进行比较。将OSP-1启动子定向克隆到去除CMV的pEGFP—N1载体，构建真核表达载体pOSP—1—EGFP．N1；重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下，分别转染水牛的颗粒细胞、乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞，并于转染后12，24和48h在荧光显微镜下观察EGFP表达情况。【结果lOSP—l启动子扩增片段长480bp，与已公布的大鼠OSP-1序列的相似性达96％；应用启动子预测软件对所得序列分析表明，该扩增片段含有类似于TA—TAbox和CAATbox的核心启动顺式元件，并含有多个C／EBPbeta转录因子的结合位点；在颗粒细胞转染后12h可观测到绿色荧光表达，转染后24h荧光细胞增多，细胞形态均呈圆形、体积较大，48h荧光细胞数量骤减，且死细胞增多；在乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞均未检测到EGFP基因表达。[结论]大鼠OSP-1启动子控制下的EGFP基因可在水牛颗粒细胞中特异表达，为构建水牛卵巢特并性表达转基因载体奠定了基础。     

山毛豆草粉颗粒料对肉兔的饲用价值评定

为探讨山毛豆(Tephrosia candida)草粉对肉兔的饲用价值,将60只新西兰青年肉兔分为5组,分别添加0％(对照),10％,20％,30％和40％的山毛豆草粉制成全价颗粒饲料,饲喂90 d后测定各组饲料的营养成分及肉兔采食量、日增重、料重比和屠宰性能.结果表明:山毛豆营养生长期粗蛋白含量为17.77％,肉兔对山毛豆中粗蛋白的消化率为78.09％,山毛豆的可消化总养分为56.18％.与对照组相比,添加20％草粉日增重达到20.80 g·d-1(P＜0.01);料重比为4.45∶ 1(P＜0.05)；屠宰率为57.78％(P＜0.01)；单位kg增重平均最低饲料成本差异显著(P＜0.05).因此,添加20％山毛豆草粉制成全价颗粒饲料可显著提高肉兔的生产性能和养殖效益.     

31%三拂ME防治稻纵卷叶螟及褐飞虱试验总结

为进一步筛选防治稻纵卷叶螟、稻飞虱的有效药剂,霍邱县于2007年8月开展31%三拂ME防治稻纵卷叶螟及褐飞虱试验,取得了良好的防治效果。     

从审美心理角度解读农业旅游示范区旅游设施建设

农业旅游设施建设是将农业资源地转化为城市休闲旅游地的重要途径与前提条件,是旅游发展的核心要素.合理的旅游设施建设能亮化旅游景区,提高旅游者的满意度.以苏南地区开发较为成熟的农业旅游示范区为例,通过分析农业旅游者的审美偏好及对设施的满意度,阐述存在的问题并提出相关建议,以期推动农业旅游与新农村建设的全面发展.     

水牛胎儿成纤维细胞转染外源基因的初步研究

研究了水牛胎儿成纤维细胞（buffalo fetal fibroblasts，BFF）转染外源基因后的细胞生物学特性。纯化含有绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）和新霉素抗性基因的线性化载体，用脂质体法转染体外培养3代的BFF细胞，应用抗生素G418筛选2周后挑取转基因抗性细胞集落扩大培养。结果发现：经过G418筛选后细胞增殖活力下降，胰蛋白酶消化法共分离获得162个转基因水牛阳性细胞集落，转移到24孔板扩大培养后，132个（85．2％）细胞集落可以存活，转移到4孔板中后仅有52个（32．1％）细胞集落能继续生长，最终能在35mm培养皿中大量培养的只有15个（〈9．3％）。抗性细胞由梭形、成簇生长变为多角形、不规则形弥漫生长，立体感减弱，细胞生长速度减慢，活力下降。染色体核型异常率增加，10个抗性细胞集落核型正常率平均为61％，显著低于对照组86．7％（P〈0．01）。研究结果为建立和优化BFF细胞转染外源基因平台奠定了工作基础。