转基因甘蔗BtG-2的T-DNA侧翼序列分析及其转化事件特异性检测

转基因甘蔗BtG-2是利用农杆菌介导法把Cry1Ac-2A-gna融合抗虫基因导入‘新台糖22号’的转基因甘蔗株系,具有良好的抗虫特性和农艺性状。为了明确转基因甘蔗BtG-2的分子特征及其检测方法,推进其生物安全性评价工作,以BtG-2的T2代为研究材料,利用Southern杂交检测外源基因在转基因甘蔗基因组内的拷贝数;利用染色体步移技术分离外源基因在甘蔗基因组中插入位点的侧翼序列,并建立了该转化体高效灵敏的特异性PCR检测方法。结果表明：Southern杂交检测证明外源T-DNA以单拷贝方式插入BtG-2株系;经过3次的热不对称巢式PCR扩增,获得外源基因T-DNA左边侧翼序列984 bp和右边侧翼序列705 bp;以这2个序列和相应的T-DNA的左右端序列分别设计3对检测引物对,建立了BtG-2株系的转化事件特异性PCR检测方法,扩增效率最高的引物对LS011/LA451和RS160/RA588分别扩增到440 bp和428 bp的特异片段。其中T-DNA左侧设计的LS011/LA451检测引物对扩增的灵敏度高、特异性强,能够在甘蔗BtG-2基因组DNA相对含量为0.1%的模板中检测出转基因目的成分,相当于9个单倍体基因组拷贝数。本研究完成了转基因株系BtG-2的分子特征及其转化事件特异性检测,为该转基因甘蔗及其衍生产品的检测和身份识别提供技术依据。     

寒地珍品——‘丰后'梅

正品种特征:‘丰后'梅作为一个很有特色的品种入选2001年春"三北"地区抗寒梅花品种区域试验吉林区试。试验地处于松辽平原腹地,有严酷漫长的寒冬,因为"南梅北移"的关键问题就是解决冻害。‘丰后'梅从日本引入我国后,在吉林公主岭试验地已经过13个年头,风土适应性良好,无     

C区块葡萄花油层储层特征研究

C区块位于松辽盆地三肇凹陷南部,该区块葡萄花油层油水分布复杂,且断裂控制原油聚集。分析了该区块葡萄花油层构造演化和油源断层特征,详细探讨了其原油运聚成藏特征。研究表明,C区块葡萄花油层所在的松辽盆地构造演化经历了断陷期（火石岭组~营城组时期）、拗陷期（登娄库组~嫩江组时期）和构造反转期（四方台组~全新统时期）；主要油源断层为连接青山口组烃源岩与葡萄花油层且成藏关键时期活动的断层；原油从青山口组一段源岩沿油源断层垂向运移至葡萄花油层,原油在葡萄花油层内部短距离侧向运移聚集成藏。C区块葡萄花油层成藏模式为源内垂向运移成藏模式,其油藏类型为断块或断层岩性油藏。     

应用枇杷二代测序数据进行染色体步移研究

【目的】枇杷基因组数据尚未公布,限制了枇杷分子生物学的研究。当前很多研究集中在上游转录因子和下游基因启动子之间的调控关系上,所以获得目的基因的启动子显得尤为重要。传统方法使用PCR方式进行染色体步移来获得启动子区域,耗时且难出结果。【方法】对‘火炬’枇杷进行二代测序,二代测序为双端测序,片段含盖200到500bp的序列。根据下游基因序列通过测序片段来实现染色体步移。使用现有程序Magicblast和新开发的Promoter_Scan脚本程序来快速获取目的基因启动子区域。Promoter_Scan对每对Reads构建10 bp的索引序列,先使用索引匹配目的基因,匹配后使用目的基因前30 bp序列再次匹配目标Reads,最后完成拼接。【结果】通过二代测序共获得61.77 GB的‘火炬’枇杷基因组数据,测序深度约为85倍。使用Magicblast检索匹配Reads耗时长,难以二次开发,需要手动拼接延伸,每个基因启动子挖掘需要9.5 h。新开发Promoter_Scan脚本程序通过两次匹配,能够更快更准确地找到启动子序列。对枇杷中8个基因进行启动子查找,向上延长2 000 bp序列平均需要拼接11.7次,耗时21.3 min。根据步移后的序列设计引物进行验证,结果显示:Sanger测序结果和预测的序列高度一致。【结论】使用Magicblast检索方式能够达到实验要求,不需要编程技能,但是耗时长。Promoter_Scan能够实现自动延伸,显著缩短启动子挖掘时间。本研究中的两种方法不仅可以用于枇杷分子生物学的研究,对其他未公布基因组数据的物种同样适用。     

"大智移云"时代下财务共享服务中心若干问题探讨

随着信息技术的高速发展,以大数据、人工智能、移动互联网、云计算为代表的新一轮产业革命推动着大企业财务模式转型与财务共享服务中心的建立。同时,财务共享服务中心在发展的过程中也面临着诸多风险和挑战。通过研究分析财务共享服务中心的功能定位、系统架构、人员管理等三方面因素,为财务共享服务中心提出针对性应对措施,帮助财务共享服务中心持续高效发展。     

巧用巢框丝制作育王移虫针

对于业余养蜂和初次养蜂者来说,看到经验老到的养蜂人育王换王,总是羡慕不已。但由于相关技术的缺乏,在使用网购的专业移虫针移虫育王时,不是铲破巢脾,就是弄死了幼虫。笔者现向大家介绍一种简易的移虫针,不仅取材容易、制作简单,而且操作十分方便。     

河南省长葛市正兴蜂业价格表

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益精集团 百优·益精

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2014年中国生猪市场回顾及2015年展望

2014年,中国养猪业开创近15年来多项之"最":产能过剩程度最大、亏损深度最深、亏损时间最长、抗风险能力最强、近10年淘汰过剩产能速度最慢、近10年亏损期疫情最平稳等。2014年中国生猪养殖业的变化可形象比喻为"温水煮生猪"。预计,2015年能繁母猪存栏或再压缩,能繁母猪存栏4 000万头是一大关;第一季度生猪出栏量同比或将下降1%左右,第二季度下跌4%,全年下降2%左右;2015年第二季度猪价增幅或较大,年度均价15~15.5元/kg,仔猪价格和母猪价格将随猪价上涨而回暖;年度生猪平均盈利或在百元左右;仔猪出售第一季度仍将亏损,第二季度后或将恢复盈利。     

基于PLC的立体车库控制系统设计

本设计以两层七位的升降横移式立体车库为例,采用西门子PLC实现立体车库的控制.文章介绍了立体车库的结构,对升降横移式进行分析,在此基础上提出了基于PLC的立体车库的控制方案,根据升降横移式立体车库的工作原理,编写存取车辆的流程及程序,实现了立体车库存取车辆的自动化.车库托盘、限位开关、车辆传感器等均由PLC实现自动控制,所以具有智能化程度高、安全可靠、方便灵活等特点.