蓝莓鲨烯合酶基因的克隆与表达分析

鲨烯合酶基因(SQS)在植物三萜类化合物合成途径中起着重要作用,是上游代谢通路中的关键基因。本研究采用RT-PCR技术从‘喜来’蓝莓根中克隆得到VcSQS基因,序列全长1 489 bp,序列分析结果表明,其含有1 242 bp的开放阅读框,编码413个氨基酸。氨基酸同源序列分析表明,蓝莓与其它物种SQS蛋白氨基酸序列相似性很高,与山茶科的茶相似性最高,达90.58%,与葡萄相似性达87.92%。荧光定量试验结果表明,SQS基因在蓝莓叶中的表达量最高,芽中的最低。     

生物活性物质角鲨烯的资源及其应用研究进展

通过查阅大量的文献资料，综述了生物活性物质角鲨烯的来源和应用。角鲨烯广泛存在于动植物体内，在动物中以深海鱼类，特别是鲨鱼的肝脏中含量最为丰富，在鲨鱼肝油中的最高含量可达69％；而在植物中则以苋属植物的种子油中含量最高，达5％～8％，在橄榄油中检测到的最高含量为1．16％。角鲨烯有较强的生物活性，被广泛应用在医疗保健品和化妆品等方面。角鲨烯易于氧化，贮存时需要加入适当的抗氧剂。     

气相色谱法测定蝉花中角鲨烯的含量

[目的]建立毛细管气相色谱(GC)测定蝉花中角鲨烯含量的方法。[方法]采用气相色谱法测定蝉花中角鲨烯,并对不同部位天然蝉花的角鲨烯含量进行比较,确定蝉花中角鲨烯含量测定的最佳条件。[结果]1 g蝉花经超声波提取后,经1 m L 0.5 mol/L的氢氧化钠-甲醇溶液40℃皂化5 min,再经正已烷萃取净化,采用GC法测定角鲨烯含量。该方法在角鲨烯质量浓度为21.43~214.30μg/m L(r=0.999 2)范围内线性关系良好,方法精密度良好(RSD=3.71%),加标回收率为77.80%~97.32%,平均加标回收率(n=9)为88.10%。[结论]气相色谱法简单快速,污染小,检测灵敏度高,可用于蝉花中角鲨烯含量的测定。     

气相色谱质谱联用测定深海鱼油中角鲨烯含量

本文以正二十六烷为内标物,建立深海鱼油中角鲨烯含量测定的气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析方法。采用50g/L的氢氧化钾甲醇溶液在80℃水浴锅中对油样皂化0.5h,正己烷氯仿混合溶剂萃取出不皂化物,气相色谱质谱联用法测定深海鱼油中角鲨烯,讨论并确定了样品皂化的最佳条件。结果表明:利用该方法,角鲨烯与杂质可以得到较好的分离和准确的定量。该内标法标准曲线的相关系数为0.9983,在0.01～0.2μg/mL范围内线性关系良好,角鲨烯最低检出限为0.93ng,方法的回收率为91.46%～100.37%,相对标准偏差小于5%(n=6)。该方法灵敏度高,分离效果好,定量准确,适用于深海鱼油中角鲨烯的含量测定。     

气相色谱氢火焰离子化检测器测定鱼油中的角鲨烯

建立一种测定鱼油中角鲨烯含量的气相色谱法，样品经氢氧化钠甲醇溶液甲酯化后，转移至分液漏斗中利用石油醚提取，最后通过氮浓缩后，利用气相色谱，采用Varian CP-7489毛细色谱柱进行定量分析。检测器为氢火焰离子化检测器，标准曲线R=0．9998，最低检出限为0．13毫克／100克，回收率为97．5％。     

苋菜培养细胞中角鲨烯的提取与含量测定

[目的]建立苋菜培养细胞中角鲨烯提取与含量测定的方法。[方法]以苋菜叶片为外植体诱导愈伤组织,用皂化和不同有机溶剂浸泡的方法提取苋菜愈伤细胞中角鲨烯,并用HLPC测定其含量。[结果]用皂化法提取苋菜愈伤细胞的角鲨烯含量高于用有机溶剂浸泡方法提取的含量。苋菜愈伤细胞提取的角鲨烯在HLPC上与标准品出峰时间一致,而且该峰与其他峰有很好的分离。[结论]皂化法是提取苋菜愈伤细胞中角鲨烯较好的方法。用HLPC测定苋菜愈伤细胞中角鲨烯含量可行。     

金合欢基溴合成角鲨烯反应及异构体形成机理的研究

通过自制高效偶联试剂三三苯基膦氯化亚钴和自制金合欢基溴的还原偶联反应，成功地合成了角鲨烯。初步探索了主要反应条件如反应时间等对偶联反应中产物角鲨烯得率的影响。结果表明，在常温、偶联试剂过量10％、反应4h及充分搅拌的条件下，角鲨烯得率45．6％。用GC和GC-MS分析了合成产物角鲨烯，探讨了角鲨烯6个异构体的形成机理和可能的化学结构以及在GC图谱中的出峰顺序。另外，还探讨了合成三三苯基膦氯化亚钴中硼氢化钠滴加速度和搅拌速率对反应的影响。     

橄榄油脂肪醇、角鲨烯、α—生育酚和甾醇的测定：不可皂化部分硅烷化处理后气相色谱分析

一般来说，植物油中脂肪醇、甾醇和生育酚的分析是独立进行的。本文提出一种简便可靠的操作方法来对橄榄油中的烷醇、角鲨烯、α－生育酚和甾醇进行定量测定，不可皂化部分硅烷化处理后进行气相色谱分析，该法省去了气相色谱（GC）上机前的薄层色谱（TLC）前处理步骤。采用标准物外标曲线校正法对角鲨烯、α－生育酚和甾醇定量，内标校正法对脂肪醇定量，分析回收率和定量 结果的重现性都很好，且适用于常规的分析测试。     

不同品种及成熟度橄榄油中角鲨烯的检测分析

以云南引种的13个不同品种及8个不同成熟度的油橄榄果为原料,通过索氏抽提法提取其粗脂肪,再以气-质联用法定性定量分析该粗脂肪中角鲨烯的含量差异.结果表明,13个不同品种橄榄油中,城固32角鲨烯含量最高,莱星含量最低;不同成熟度的3个品种(城固32、佛奥和阿斯),橄榄油随成熟度提高,角鲨烯含量越高.     

Detection and Analysis of Squalene in Oil from Olive Fruits of Different Varieties and of Different Degrees of Maturity

[Objective] This study aimed to identify the difference in squalene content among different olive varieties and the law of squalene content change in the same olive variety of different degrees of maturity, with the objective to provide technical support for the harvest and processing of olive fruits. [Method] Taking 13 introduced olive varieties including three varieties of eight different grades of maturity, fat acid w3s first extracted by Soxhlet extraction and then squalene was quantitatively and qualitatively analyzed by gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS） method. [Result] The results showed that squalene content was the highest in CG-32, and the lowest in Leccino among the 13 olive varieties. And squalene content increased with the degree of maturity in the three olive varieties including CG-32, Frantoio and Ascolana Tenera. [Conclusion] A more simple and rapid method for the determina- tion of squatene content was established.