胰蛋白酶处理不影响牛体外受精胚胎的活力

本研究按国际通用的方法用０．２５％胰蛋白酶溶液清洗牛体外受精胚胎，然后冷冻或在室温下短期保存胚胎，检查胚胎在体外和体内的发育率，结果表明胰蛋白酶处理的胚胎与未处理胎的发育相似，说明这样的处理对胚胎活力无不良影响。     

脱防冻剂方法对牛体外受精胚胎冷冻后成活率的影响

为了观察脱防冻剂方法对牛体外受精冷冻胚胎在体内、外发育率的影响,应用常规冷冻法在０．７５ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．５ｍｏｌ／Ｌ丙二醇溶液中冷冻受精后７、８ｄ的囊胚,解冻后在０．２５、０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步或在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂的胚胎孵化率（分别为６８．６％、６２．２％、６８．７％）与用ＰＢＳ／ＦＣＳ六步脱防冻剂的差异不显著（７０．４％,Ｐ＞０．０５）,但在０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂后,孵化率显著降低（４７．６％,Ｐ＜０．０１）。用０．２５ｍｏｌ／Ｌ或０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或海藻糖预先使胚胎脱水后冷冻,解冻后可使胚胎直接在ＰＢＳ中一步脱掉防冻剂,胚胎孵化率（４５．０％～４９．５％）与在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂的相似（５１．５％,Ｐ＞０．０５）。移植试验表明,在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂获得的妊娠率与六步脱防冻剂相似,与在ＰＢＳ中一步脱防冻剂的亦无明显差异,但妊娠率均偏低（２１．４％～３７．５％）。     

现行牛IVF程序在水牛体外受精的应用研究

本研究对我所现行的牛体外受精程序 ( IVF)应用于水牛体外受精的可行性进行了探讨。结果表明 ,水牛卵巢生长卵泡少 ,平均仅可回收 5枚卵母细胞 ,只相当于黄牛 ( 14.3个 )的1/ 3。水牛卵母细胞的体外成熟率为 51.7% ,体外受精卵裂率为 58.7% ,均极显著地低于黄牛(分别为 87.3%和 69.6% ,P<0 .0 1)。水牛卵母细胞经体外受精后 ,早期胚胎的体外发育速度较黄牛快 ,体外受精后的第 6d囊胚发育率占 36.4 % ,累计到第 7d时占 80 .7% ,极显著地高于黄牛 ( 57.6% ,P<0 .0 0 1)。水牛早期胚胎的体外囊胚发育率为 31.5% ,与黄牛的 ( 39.2 % )差异不显著 ;孵化囊胚率为 73.8% ,也与黄牛的相仿。实验结果表明 ,我所现行的牛 IVF程序应用于水牛的体外受精研究是有效、可行的 ,特别是早期胚胎的体外培养系统 ,已接近于黄牛的水平。但尚需设法提高水牛卵母细胞的体外成熟培养效果 ,以提高水牛体外受精的整体效率     

牛体外受精胚胎的玻璃化冷冻及一步脱防冻剂的研究

在过去的１０年中,体外受精技术进展很快,目前已可以利用该技术在实验室内大批量生产牛胚胎。研究简单、有效的冷冻方法无疑会加速体外受精胚胎在生产中的推广应用。玻璃化冷冻法由于操作简便,可以快速冷冻胚胎而日益受到重视。过去的研究已证实,用２５％乙二醇＋２５...     

玻璃化法冷冻保存牛体外受精胚胎

本研究探讨了玻璃化冷冻保存对牛体外受精胚胎冷冻后存活的影响。7日龄的胚胎在10％甘油＋20％丙二醇的玻璃化冷冻液中，室温下停温10min，其孵化率为86．6％，与对照的83．2％相比，无明显影响（P＞0．05）。然10％甘油＋20％乙二醇，25％甘油＋25％乙二醇及25％甘油＋25％丙二醇均明显降低胚胎的孵化率（P＜0．01）。7日龄胚胎经10％甘油及10％甘油＋20％乙二醇依次平衡5min后,再置于25％甘油＋25％乙二醇的冷冻液中，20s内投液氮玻璃化冷漠，冻后孵化率达80．8％，明显高于其它平衡方法。冷冻液为25％甘油＋25％乙二醇的胚胎冻后总孵化率为72．1％，明显高于25％甘油＋25％丙二醇的60．9％。这些结果表明：牛胚胎玻璃化冷冻保存的成功率在很大程度上取决于防冻剂的种类、浓度及平衡方法。     

牛体外受精胚胎移植后的怀孕率及双胎率

为了测定牛体外受精胚胎移植到受体母牛后的怀孕率和双胎率，本研究共进行了３个胚胎移植试验。试验１，测定新鲜胚胎移植后的怀孕效果。将１６０枚新鲜胚胎移植到８０头受体母牛（每头受体接受２枚胚胎），移植后６０～９０ｄ的怀孕率为６５％（５２／８０），其中双胎率为５０％（２／５２）。试验２，测定经室温保存４～１８ｈ的胚胎移植后的怀孕效果。供试验用的６８头受体母牛均于移植前７ｄ（即发情当天）进行人工授精。移植时每头受体牛接受１枚胚胎。移植后４０～６５ｄ的怀孕率为７６．５％（５２／６８），其中双胎率为６５．４％（３４／５２）。试验３，测定冷冻胚胎移植后的怀孕效果。将４５４枚冷冻胚胎移植到２２７头受体母牛，每头接受２枚冻胚。移植后５０～６０ｄ的怀孕率为６１．７％（１４０／２２７），其中双胎率为２５％（３５／１４０）。本研究结果表明，用完全体外化技术生产的牛胚胎移植到受体母牛后可获得满意的怀孕率和双胎率，这一技术将为加速向用牛生产的发展开辟一条崭新的途径。     

体外受精后不同时间收集的牛胚胎的冷冻效果

比较了体外受精后不同时间收集的牛囊胚期胚胎冷冻后的存活率。试验一收集受精后第６，７，８和９天出现的胚胎，分３步加入０．７５ｍｏｌ／Ｌ甘油和０．５ｍｏｌ／Ｌ丙二醇，将胚胎装入０．２５ｍＬ细管后，放入已降温至５℃的冷冻机内，立即以２℃／ｍｉｎ的速率降温至－７℃，停留５ｍｉｎ后植冰。植冰后５ｍｉｎ，以０．３℃／ｍｉｎ的速率降温至－２５℃，取出胚胎，并立即投入液氮中保存。解冻时，先让细管在空气中暴露１０ｓ     

玻璃化冷冻体外成熟牛卵母细胞的尝试

通过两个试验对体外培养成熟的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻。试验１用１０％丙二醇（ＰＧ）加上不同浓度（０％～２０％）的乙二醇（ＥＧ）作为细胞内玻璃化溶液（ＶＳ１），２５％ＰＧ＋２５％ＥＧ作为细胞外玻璃化溶液（ＶＳ２）对卵母细胞进行冷冻。结果卵母细胞的体外受精分裂率（０．９％～２３．４％）均显著低于对照组（７５．０％）。在处理组中，以１０％ＰＧ＋５％ＥＧ和１０％ＰＧ＋１０％ＥＧ作为ＶＳ１的效果较好，分裂率分别为２３．４％和２２．２％，均显著高于其他处理组。试验２以１０％ＰＧ＋５％ＥＧ作为ＶＳ１，２５％ＰＧ＋２５％ＥＧ作为ＶＳ２进行冷冻。解冻后在０．５ｍｏｌ／Ｌ或０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中１～２步或在含防冻剂的溶液中经２～３步稀释防冻剂。卵母细胞经体外受精后，分裂率在１８．２％～３０．６％之间。在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中一步脱防冻剂的卵母细胞经体外受精、体外培养后，２５个早期胚胎中有３个发育成囊胚，其它组均未发现囊胚。这些结果表明玻璃化过程对卵母细胞造成了损伤。引起损伤的原因可能是玻璃化溶液的化学毒性作用及脱防冻剂过程中卵母细胞受到的渗透压损伤。