基于实时荧光定量PCR技术检测桑丁香假单胞菌

由桑丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae pv.mori,以下简称Psm)引起的桑疫病是一种毁灭性的桑树细菌性病害,建立对病原菌的早期检测技术,有利于及时制定病害的防控技术措施。依据致病性相关基因hrp Z的片段设计的一对引物能够在Psm中特异性地扩增出195 bp大小的条带,而用于对其他致病变种的丁香假单胞菌和其他种属病原菌的扩增则没有此条带。利用Psm14-7菌株基因组DNA为模板进行实时荧光定量PCR(q PCR)扩增,模板DNA质量浓度在6×10~(-5)~6 ng/μL范围内与扩增所得Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-3.224 69x+14.034 45(R~2=0.997 09),检测的最低限为(60±0.001 2)fg/μL;以Psm14-7菌液为模板进行q PCR,菌液浓度在1×10~2~1×10~8CFU/m L范围内与Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-4.562 15x+46.911 67(R~2=0.988 72),最低检测限为(10~2±0.008 3)CFU/m L。于桑树植株人工接种Psm后不同时间,对出现各种症状植株中的菌群数量进行q PCR检测,结果显示:接种后的第4~8天可能为病原菌诱导桑树的过敏性反应和系统获得性抗性关键时期,影响到了Psm的增殖速度;能引起健康桑树暴发桑疫病的致病菌最低浓度为(1.5×10~8±0.076 8)CFU/g。建立的q PCR检测方法,对由Psm引起的桑疫病的田间早期诊断和及时防控具有一定指导意义。     

油菜原料蜜与成品蜜主要质量指标比较

加工后油菜成品蜜与原料蜜基本指标存在差异,送检样品检测结果表明,成品油菜蜜中蔗糖和水分含量分别比原料中低2.61%、10.87%,差异极显著(P0.01);成品蜜中葡萄糖、还原糖、羟甲基糠醛含量以及酶值分别比原料高7.16%、9.3%、7.24 mg/100g和6.11,且差异极显著(P0.01);成品中果糖含量比原料中高2.05%。加工后油菜成品蜜中还原糖、葡萄糖含量都极显著高于原料蜜,而水分含量则极显著低于原料蜜,蜂蜜基本指标成品蜜明显优于原料蜜。     

灵山土鸡暴发传染性喉气管炎的快速诊断

2016年3月,广西某鸡场一群10 000只115日龄的灵山土鸡群出现鸡冠发绀、抬头伸颈、呼吸极度困难等症状,至送检时已累计死亡600余只。根据病鸡临床症状,初步怀疑感染了呼吸系统病原。剖检病死鸡,见患鸡喉头内有黏液,气管严重充血、出血,气管内壁附有黄色豆腐渣样物;脾脏肿大,表面有细小灰白色坏死点等病变。无菌取病死鸡的喉头、气管、脾脏等病变组织,1/2用于提取样品总DNA进行传染性喉气管炎病毒的PCR检测,1/2用于提取样品总RNA,经RT-PCR检测传染性支气管炎病毒和新城疫病毒。结果显示:传染性喉气管炎病毒的检测呈阳性、传染性支气管炎病毒和新城疫病毒的检测呈阴性,确定该鸡群患了传染性喉气管炎。     

猪捷申病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

参考Gen Bank中猪捷申病毒(PTV)基因序列,通过比对分析,设计引物和Taq Man探针,建立荧光定量RT-PCR检测方法。该方法的最低检测灵敏限度为12.6拷贝/μL,组内组间重复试验的变异系数均小于2%,具有较好的特异性,对猪常见病原如猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒和伪狂犬病病毒等均没有特异性扩增。用本研究建立的荧光定量RT-PCR方法检测来自猪场的156份猪粪便,阳性检出率为38.5%,与套式RT-PCR符合率达100%,表明本试验建立的荧光定量RT-PCR方法适用于PTV的快速批量筛检,为PTV感染的流行病学调查提供了必要的技术手段。     

检测新城疫病毒的纳米PCR技术建立与初步应用

根据Gen Bank登录的新城疫病毒(NDV)M基因核苷酸序列设计引物,建立了NDV纳米PCR检测方法。敏感性和特异性试验结果表明,该方法对NDV的最低核酸检出量分别为27 pg,比传统PCR敏感10倍,可扩增出297 bp的特异性核酸片段,而对禽流感病毒、传染性法氏囊病毒与传染性支气管炎病毒的检测结果均为阴性。该方法可用于新城疫病毒的临床快速检测与流行病学调查。     

胸膜肺炎放线杆菌2,3,6血清型三重PCR检测方法的建立与应用

根据Gen Bank中胸膜肺炎放线杆菌(APP)荚膜多糖基因序列,设计3对引物,成功建立了检测APP 2型、3型和6型的三重PCR检测方法。该三重PCR的最低核酸检测量分别为0.25、0.5和0.25 ng/μL,对猪肺炎支原体、猪传染性萎缩性鼻炎病毒、副猪嗜血杆菌的扩增结果均为阴性。对112份自然感染病猪样品的检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明,该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床APP 2型、3型和6型的检测。     

光质和光强对红树莓组培苗叶绿素荧光参数的影响

为了确立红树莓组培苗生长的适宜光质和光强,以红树莓"海尔特兹"组培苗为试材,研究了不同光质和光强处理下红树莓生根组培苗的叶绿素含量及叶绿素荧光参数。结果表明:光质处理中,除R/B(红光∶蓝光=1∶1)处理外,Chl a(叶绿素a)、Chl b(叶绿素b)和Ct(叶绿素总含量)均随着R/B比率的增加呈现先增加后减小的趋势,Chl a和Ct均在2R/B(红光∶蓝光=2∶1)处理下呈现最大值,分别为1.344、1.716mg·g~(-1),Chl b则在R/2B(红光∶蓝光=1∶2)处理最高,为0.423mg·g~(-1),Chl a、Chl b和Ct均以10R/B(红光∶蓝光=10∶1)处理最低,分别为0.130、0.033、0.163mg·g~(-1),均显著低于其它光质;Chl a/b(叶绿素a/b)在10R/B、2R/B和R/B处理下较高,分别为3.942、3.709、3.653,呈现阳生植物的特性,而在6R/B(红光∶蓝光=6∶1)、W(白光)、4R/B(红光∶蓝光=4∶1)等处理下较低,分别为2.729、2.730、2.747,呈现阴生植物的特性;在R/2B处理下,红树莓组培苗叶片的叶绿素荧光参数值表现极优,Fv/Fm(PSⅡ最大光化学效率)值达到0.881,而10R/B处理下,Fv/Fm值降低到0.355,且显著低于其它光质处理;光强处理中,随着光强的增加,Chl a、Chl b和Ct呈现递减的趋势,最大值由1.218、0.503、1.720mg·g~(-1)分别降低到0.907、0.302、1.209mg·g~(-1),均形成显著差异,Chl a/b则表现为随着光强的增加而增加,在2 000lx处理达到最大值,为3.042,且3种光强处理差异显著;叶片的Fo(初始荧光)随着光强的增加而增加,在2 000lx处理下达到最大值,为180.000,Fm(最大荧光值)则在1 500lx处理下达到最大值,为907.000,而叶片的Fv/Fm、Fv/Fo(PSⅡ的潜在活性)、ΦPSⅡ(PSⅡ实际光化学效率)、Rfd(可变荧光下降比值)则均随着光强的增加呈现递减的趋势,均在1 000lx处理下呈现最大值,分别为0.847、5.573、0.815、4.200。     

高温胁迫对丹参光合生理指标及叶绿素荧光特性的影响

以丹参为试材,采用土培盆栽法,于第1茬花开前进行高温胁迫处理,研究了高温胁迫对丹参生理指标、光合及叶绿素荧光特性的影响。结果表明:随着高温胁迫时间的延长,丹参叶片超氧化物歧化酶(SOD)活性呈上升趋势,而过氧化氢酶(CAT)活性呈下降趋势;丙二醛(MDA)、游离脯氨酸(Pro)含量均呈上升趋势,且与胁迫时间呈极显著多项式关系。净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、胞间二氧化碳浓度(Ci)和蒸腾速率(Tr)均呈下降趋势,且各指标均与胁迫时间呈负相关。最大光化学量子产量(Fv/Fm)、PSⅡ潜在光化学活性(Fv/Fo)、有效光化学量子产量(Fv′/Fm′)、光化学淬灭系数(qP)和表观光合电子传递速率(ETR)均呈下降趋势,且各指标均与胁迫时间呈负相关,非光化学淬灭系数(NPQ)呈先上升后下降趋势。研究表明,高温(40℃)对丹参生理指标、光合及叶绿素荧光特性有较大的影响,且各功能指标共同作用,以减轻植株所受伤害。     

持续盐胁迫对制干辣椒光合作用的影响

以"日本金塔"、"赤峰板椒"、"改良佳线"3种制干辣椒为试材,从辣椒现蕾期开始,利用碳酸氢钠进行持续盐胁迫,分析3个品种的光合参数变化,探讨不同品种辣椒对持续盐胁迫的抗性反应。结果表明:持续盐胁迫下"改良佳线"的耐盐性较好,并且耐盐特征在处理早期即有表现;"日本金塔"的耐盐性次于"改良佳线",光合系统受到的胁迫程度较小;"赤峰板椒"的耐盐性较弱,长期盐胁迫下"赤峰板椒"光合系统受到较大的损伤;不同浓度盐处理结果表明,30mmol/L的盐浓度对3种辣椒的光合作用有一定的促进作用,60mmol/L的盐浓度对光合作用及荧光参数影响不显著,较高的盐浓度90mmol/L对3种辣椒的光合作用有明显的抑制作用。     

外源硫化氢对康乃馨切花叶绿素荧光参数和抗氧化酶活性的影响

以康乃馨(Dianthus caryophyllus L.)切花为试材,瓶插液中加入不同浓度的硫化氢(H_2S)供体硫氢化钠(NaHS),以蒸馏水处理为对照,研究H2S对康乃馨叶片叶绿素荧光参数和抗氧化酶活性的影响,以期探讨外源硫化氢(H_2S)对康乃馨切花保鲜的调控机理。结果表明:在康乃馨切花衰老过程中,叶片叶绿素含量、可溶性糖含量降低,暗下光系统Ⅱ最大光化学效率(Fv/Fm)、潜在活性(Fv/Fo)、光下实际光化学效率ΦPSⅡ降低。与对照相比,适宜浓度的NaHS溶液能延长切花寿命,增大花径,增加叶片可溶性糖、叶绿素含量,Fv/Fm、Fv/Fo、ΦPSⅡ明显升高。其中,以600μmol·L~(-1) NaHS溶液处理的效果最好。瓶插第4天600μmol·L~(-1) NaHS溶液处理的丙二醛(MDA)含量显著低于对照,而超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于对照。可见,外源H2S可增强康乃馨切花衰老时活性氧清除能力,减轻叶片光合结构的伤害,延长花期,提升观赏价值。