军曹鱼dnd基因cDNA克隆及其在性腺周年发育过程中的表达

本研究通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆了军曹鱼(Rachycentron canadum)dnd基因(Rcdnd)的cDNA序列,全长1339bp,其中,5'非编码区59bp,3'非编码区173bp,开放阅读框(ORF)1107 bp,共编码368个氨基酸.Rcdnd氨基酸序列含有1段RNA识别保守基序(R...     

长毛明对虾核转录因子NF-κB家族基因的克隆及在细菌侵染过程中的表达变化

核转录因子 NF-κB 家族在无脊椎动物抵抗病原刺激中起着重要作用。本研究通过 RACE 技术克隆了长毛明对虾(Fenneropenaeus penicillatus) NF-κB 家族基因, 分别命名为 FpRelish 和 FpDorsal。FpRelish cDNA 全长为 5373 bp, 其中 5?UTR 88 bp, 3?UTR 1667 bp, 编码区 3618 bp, 编码 1205 个氨基酸; FpDorsal cDNA 全长为 4816 bp, 其中 5?UTR 611 bp, 3?UTR 2147 bp, 编码区 2058 bp, 编码 685 个氨基酸, 两者均具有 RHD 结构域。同源性和系统进化分析表明, FpRelish 和 FpDorsal 都分别与甲壳动物首先聚为一支。qPCR 分析表明, 两基因在检测的血液、心脏、肝胰脏、鳃、肠道、性腺、肌肉、神经和胃组织中均有表达, 且均在肝胰脏中最低, 在血细胞中最高, 相差 8~ 10.7 倍。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激后, FpRelish 和 FpDorsal 基因在鳃和肝胰脏中均有先上升再下降的表达变化模式, 鳃中 FpRelish 基因 6 h 表达最高, 为对照组 2.7 倍, FpDorsal 基因 9 h 表达最高, 为对照组 2.1 倍; 肝胰脏中 FpRelish 基因在 9 h 高表达, 最高表达量在 48 h, 为对照组的 4.5 倍, FpDorsal 基因 9 h 表达最高, 为对照组 22 倍。溶藻弧菌(Vibrio aliginolyticus)刺激后, 鳃中 FpRelish 基因 24 h 表达最高, 为对照组 1.9 倍, FpDorsal 基因 24 h 表达最高, 为对照组 1.5 倍; 肝胰脏中 FpRelish 基因 3 h 达最高表达量, FpDorsal 基因 6 h 表达最高, 均为对照组的 1.5 倍。本研究表明 FpRelish 和 FpDorsal 在长毛明对虾免疫调控中发挥了重要作用。     

肌醇对凡纳滨对虾幼虾生长、非特异性免疫力及肠道菌群组成的影响

本试验旨在研究饲料中添加肌醇对凡纳滨对虾幼虾生长、非特异性免疫力及肠道菌群组成的影响。本试验共挑选1 120尾、均重(0.65±0.01) g、健康且均匀的幼虾，随机平均分为7组，分别饲喂添加0(对照组)、150、300、600、900、1 200、2 000 mg/kg肌醇的7种等氮等脂饲料，每组4个重复，每个重复40尾虾。养殖时长为56 d。结果表明：1)与对照组相比，饲料中添加肌醇后，凡纳滨对虾幼虾蛋白质效率(PER)和特定生长率(SGR)显著提高(P<0.05),1 200 mg/kg组增重率(WGR)显著提高(P<0.05);饲料系数(FCR)显著降低(P<0.05);当肌醇添加量为150 mg/kg时，饲料系数达到最低值1.46,其他各添加组均显著低于对照组(P<0.05)。2)随着饲料中肌醇添加水平上升，凡纳滨对虾幼虾全虾粗脂肪(EE)含量整体呈现先下降后上升的趋势，600、900、1 200和2 000 mg/kg组显著低于对照组(P<0.05),添加量为1 200 mg/kg时达到最低值。3)随着饲料中肌醇添加水平上升，血清中甘油三酯(T...     

饲料添加L-精氨酸或N-氨甲酰谷氨酸对杂交鳢肠道黏膜形态和肠道菌群的影响

[目的]本实验旨在研究饲料添加精氨酸或NCG对杂交鳢（Channa maculata ♀×Channa argus ♂）肠道黏膜形态和肠道菌群的影响。[方法]选用初始体重（22.02±0.02） g的杂交鳢450尾。随机分为3个组，每组3个重复，每个重复50尾，分别饲喂基础饲料以及在基础饲料中添加0.60% L-精氨酸（Arginine, Arg）、0.03% N-氨甲酰谷氨酸（N-Carbamylglutamate, NCG）三种实验饲料，饲养周期为56天。[结果]结果显示：与对照组相比，饲料中添加0.60% Arg显著提高了杂交鳢终末重、特定生长率（P＜0.05），添加0.60% Arg或0.03% NCG显著提高了杂交鳢的蛋白质沉积率（P＜0.05），显著降低了饲料系数（P＜0.05）。与对照组相比，饲料添加Arg或NCG可显著提高杂交鳢肠道中肠、后肠肌层厚度，中肠绒毛宽度，NCG组后肠肌层厚度显著高于对照组与Arg组（P＜0.05）。各实验组肠道黏膜层、肌层结构清晰紧密、黏膜层绒毛丰富，对照组与Arg组出现少量绒毛顶部上皮与固有层间隙增宽，NCG组却未见明显异常。饲料添加精氨酸可显著提高杂交鳢肠道菌群物种丰富度，Chao指数与Ace指数显著高于对照组与NCG组（P＜0.05）。与对照组相比，NCG组显著提高厚壁菌门及变形菌门的丰度，但NCG组梭杆菌门丰度显著降低，与Arg组具有显著差异性（P＜0.05）。[结论]由此得知，饲料中添加Arg在生长性能方面优于添加NCG，但饲料添加NCG可以显著增加肠道厚壁菌门等有益菌门丰度，维持肠道内环境稳定，其作用效果优于补充Arg。     

水解单宁对凡纳滨对虾生长性能和肠道微生物的影响

为分析水解单宁对凡纳滨对虾生长及其肠道微生物菌群结构的影响,以基础饲料为空白组,在基础饲料中分别添加0.1%、0.2%和0.3%的水解单宁作为实验组,进行为期60 d的养殖实验后,统计生长性能,并取其肠道内容物提取DNA,用Illumina MiSeq测序平台进行16S rDNA基因V3～V4区高通量测序,检测对虾肠道内菌群结构及变化情况。结果表明:(1) 3个水解单宁添加组的增重率、特定生长率和肥满度与对照组相比均显著升高(P0.05),肝体比均显著降低(P0.05)。(2)4组样品中共获得206192条优化序列,操作分类单元(OUT)总数达542个。对照组凡纳滨对虾肠道微生物以变形菌门和蓝细菌门为主,其次是放线菌门和拟杆菌门;试验组肠道主要菌群为变形菌门、软壁菌门。试验组与对照组相比,蓝细菌门、放线菌门和拟杆菌门的比例降低,变形菌门、软壁菌门和厚壁菌门比例增加。(3)Rank-Abundance曲线和多样性指数结果可见,实验组的物种丰度和均匀度大体上均高于对照组。PCoA分析发现, 0.1%和0.3%添加组的微生物群落较为接近,而与0.2%添加组差别较大,结合生长性能指标可知,饲料中水解单宁的最适添加量为0.1%。以上研究表明,饲料添加水解单宁可显著改变对虾肠道的微生物组成,提高对虾生长速度,影响凡纳滨对虾的生长性能。     

RNA干扰PhCatC1/2基因对波纹龙虾相关免疫基因表达的影响

初步研究RNA干扰PhCatC1/2基因对波纹龙虾(Panulirus homarus)相关免疫基因表达的影响，采用qPCR技术检测PhCatC1/2、PhTlr13、PhLys和Phβ-G基因的表达，并观察肝胰腺组织的变化情况。结果表明：注射PhCatC1-dsRNA后，PhCatC2表达量比对照组显著下降(P<0.05),与对照组相比PhTlr13基因表达量在前期呈现显著升高，后下降的趋势，PhLys和Phβ-G基因的表达量均随dsRNA干扰时效的增加而增加；沉默PhCatC2基因后PhTlr13和Phβ-G基因的表达量随dsRNA干扰时效的增加而增加，PhCatC1基因表达量呈现下上调交替的趋势，PhLys基因表达量表现出先下调后上调的趋势。通过PhCatC1/2基因沉默后的分析初步推测，波纹龙虾可能通过促进Toll样受体和溶酶体通路来参与免疫应答，得出PhCatC1/2基因具有免疫功能。     

重金属对罗氏沼虾血细胞活性和酯酶活力的影响

为探讨不同重金属对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)血细胞的细胞毒性,取罗氏沼虾血淋巴,离体状态下分别暴露于不同浓度(10~(-9)~10~(-3) mol/L)的Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)环境中6 h,设置不添加重金属的对照组,应用流式细胞术测定细胞活性和胞内非特异性酯酶活力。结果显示,10~(-9)~10~(-6) mol/L的Cd~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Cd~(2+)浓度达到10~(-5) mol/L时,酯酶活力受到了显著的抑制,Cd~(2+)浓度达到10~(-4)和10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降;10~(-9)~10~(-6) mol/L的Hg~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Hg~(2+)浓度为10~(-5)~10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降;10~(-9)~10~(-5) mol/L的Cu~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Cu~(2+)浓度为10~(-4)~10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降;10~(-9)~10~(-5) mol/L的Zn~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Zn~(2+)浓度为10~(-4) mol/L时,酯酶活力显著下降,Zn~(2+)浓度为10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降。Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)对细胞活性的毒性临界浓度分别为10~(-4) mol/L、10~(-5) mol/L、10~(-4) mol/L和10~(-3) mol/L,毒性强度由高到低依次为Hg~(2+)、Cd~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)。Cd、Hg、Cu和Zn这4种重金属对罗氏沼虾血细胞活性和酯酶活力均具有明显的剂量效应;酯酶活力对重金属胁迫较细胞活性更为敏感,可作为虾类细胞毒理学研究的重要指标。     

不同盐度条件下氨氮对斑节对虾仔虾的毒性研究

开展了不同盐度条件下氨氮对斑节对虾仔虾毒性影响试验。结果表明，盐度为3.0%时，氨氮24,48,72和96 h半致死浓度(LC₅₀)分别为91.32,53.92,40.70和25.77 mg/L；盐度为2.5%时，分别为91.95,50.05,35.76和33.71 mg/L；盐度为2.0%的条件下，分别为164.46,98.56,71.05和44.13 mg/L；盐度为1.5%时，分别为97.19,63.97,31.83和26.04 mg/L；盐度为1.0%时，分别为74.79,21.89,13.55和10.81 mg/L；盐度为0.5%时，分别为58.17,12.98,10.46和6.01 mg/L；在盐度3.0%,2.5%,2.0%,1.5%,1.0%和0.5%时，氨氮的安全浓度(SC)分别为2.577,3.371,4.413,2.604,1.081和0.601 mg/L。指出，盐度对氨氮的毒性有较大的影响，盐度过高或者过低，都会增强氨氮对斑节对虾的毒性。提出，斑节对虾仔虾育苗应在盐度2.0%、氨氮对斑节对虾仔虾的毒性最小时进行生产。     

酶解肠膜蛋白粉在珍珠龙胆石斑鱼饲料中的应用

为探究酶解肠膜蛋白粉替代鱼粉对珍珠龙胆石斑鱼的生长性能、营养物质表观消化率及养殖水体水质的影响，随机选取450尾初始体质量(7.50±0.02) g珍珠龙胆石斑鱼，分为5组，每组3个平行，每个平行30尾鱼，分别投喂以酶解肠膜蛋白粉替代0%、9%、18%、27%和36%鱼粉的5种等氮等脂饲料，进行8周的养殖试验。试验结果表明，酶解肠膜蛋白粉替代9%组鱼体质量增加率和特定生长率与替代0%组相比差异不显著(P>0.05),但是显著高于其他各组(P<0.05)。酶解肠膜蛋白粉替代0%组的珍珠龙胆石斑鱼对饲料干物质、粗蛋白质、钙和磷的表观消化率显著高于其他各组(P<0.05)。在摄食后1～21 h内，酶解肠膜蛋白粉替代0%组和替代9%组之间的养殖水体氨氮含量差异不显著(P>0.05),在摄食后21 h时，各组间养殖水体亚硝态氮含量差异不显著(P>0.05)。综上所述，在不影响珍珠龙胆石斑鱼生长性能的前提下，酶解肠膜蛋白粉替代饲料中9%的鱼粉不会对水体产生负面影响。     

南海黄鳍金枪鱼(Thunnus albacores)摄食习性及其随生长发育的变化及其随生长发育的变化

基于2012-2013年在我国南海水域调查获得的黄鳍金枪鱼(Thunnus albacores)生物学基础性数据,利用传统胃含物分析方法并结合碳、氮稳定同位素技术对黄鳍金枪鱼摄食习性进行了研究.结果显示,南海黄鳍金枪鱼食物组成包括鸢乌贼(Sthenoteuth is oualaniensis)、枪乌贼属(Uroteuthis)、乌贼属(Sepia)、圆鲹属(Decapterus)、蛇鲭属(Gempylus)、帆蜥鱼(Alepisaurus ferox)、日本乌鲂(Bramajaponica)、燕鳐属(Cypselurus)、甲壳类动物及不可辨别鱼类等饵料类群,其中,鸢乌贼(IRI=51.07％)、圆鲹属(IRI=39.81％)及不可辨别鱼类(IRI=6.62％)为主要饵料食物.黄鳍金枪鱼的空胃率、平均饱满指数和食物组成都有明显的月变化(P＜0.05).空胃率随叉长组变化呈较明显的上升趋势,各叉长组之间空胃率变化显著(P＜0.05);平均饱满指数随叉长变化较大.当叉长组为130-160 cm时,Shannon-Weiner多样性指数H在0.50-1.18之间变化,Pielou均匀度指数J在0.10-0.32之间.基于氮稳定同位素计算的黄鳍金枪鱼各叉长组的平均营养级为3.54.