牦牛源BVDV非结构蛋白NS5A的原核表达及抗原表位分析

【目的】利用原核表达系统体外表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)NS5A基因,获得非结构蛋白NS5A,对其进行核苷酸、氨基酸序列分析,以解析BVDV非结构蛋白NS5A的功能。【方法】参考BVDV-1型毒株V006的NS5A基因序列(GenBank登录号:KX170647)设计并合成1对特异性引物,以分离到的牦牛BVDV GSTZ毒株cDNA为模板,PCR扩增NS5A基因片段,并克隆至表达载体pET-28a (+)中,构建重组原核表达载体pET28a-NS5A。经酶切初步鉴定及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,然后利用IPTG诱导表达。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting分析鉴定重组蛋白的表达,并根据NS5A基因的序列构建遗传发育进化树,利用DNAStar软件预测NS5A蛋白的亲水性、表面可塑性和抗原性等特性,并结合二级结构的预测对NS5A蛋白的B细胞抗原表位进行预测。【结果】PCR扩增NS5A目的基因片段为1 488 bp,双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET28a-NS5A构建成功。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定重组蛋白,表达出了大小为55 ku的目的蛋白,大小与预期结果相符。通过对不同BVDV毒株NS5A基因序列构建遗传发育进化树,显示GSTZ毒株NS5A在遗传进化特征上属于BVDV-1型。NS5A蛋白的亲水性主要位于12—21、32—69、75—113、120—135、143—147、152—163、165—180、215—230、265—274、296—340、348—378、389—447、455—463、469—495位氨基酸处,表面可塑性主要位于14—18、37—42、76—81、86—109、154—160、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373、414—442、430—437、454—460位氨基酸处,柔性区域较多,主要位于14—21、37—43、67—82、86—93、97—110、152—158、169—179、218—231、240—255、296—310、313—328、344—359、364—373、413—422和472—483位氨基酸处。NS5A蛋白的B细胞抗原表位主要位于15—18、76—81、154—158、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373和414—422位氨基酸处。【结论】成功表达并鉴定了牦牛源BVDV的非结构蛋白NS5A,系统发育进化树表明BVDV GSTZ株基因型属于BVDV-1型,NS5A蛋白具有良好的抗原性,为深入解析BVDV非结构蛋白NS5A的自身结构功能、免疫学特性以及进一步研究非结构蛋白对病毒复制的影响提供参考。     

弓形虫卵囊感染小鼠的急性期与慢性期的脑组织蛋白质组变化

弓形虫是一种呈世界性分布的机会性致病原虫,可引起致命性脑炎。人弓形虫病急性感染往往与弓形虫卵囊污染密切相关。探究弓形虫卵囊感染对宿主的致病机制和防控弓形虫病具有重要意义。因此,本研究利用iTRAQ技术,结合2D-LC-MS/MS分析弓形虫PRU虫株卵囊急、慢性感染小鼠后,其脑组织蛋白质的差异表达情况。结果表明,在急性感染期和慢性感染期小鼠脑组织中分别鉴定到85和51个差异表达的蛋白,而慢性感染期与急性感染期相比有114个蛋白差异表达。对差异表达蛋白进行功能分析发现其主要涉及到免疫、代谢过程等通路。本研究结果为进一步阐明弓形虫卵囊急慢性感染引起宿主脑组织损伤及致病机制提供了重要的数据。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对羊源多杀性巴氏杆菌的快速鉴定

本试验通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对临床分离的1株羊源多杀性巴氏杆菌进行了快速鉴定,取得了与VITEK2 Compact传统生化方法和16S rRNA测序方法一致的结果。MALDI-TOF MS对分离菌株的鉴定分数为2.371,达到了种水平的鉴定。从分离到纯菌落到获得有效的鉴定结果,MALDI-TOF MS仅需要约30 min,而VITEK2需要约4 h, 16S rRNA测序方法需要至少2 d。因此,MALDI-TOF MS可以实现对临床分离的多杀性巴氏杆菌菌株的快速、准确鉴定,对进一步改善动物巴氏杆菌病的临床诊治具有重要意义。     

橄榄鲜食新品系‘灵峰’和‘闽清2号’的主要性状综合评价

‘灵峰’和‘闽清2号’橄榄是从福州地区的‘长营’橄榄实生群体中筛选出的鲜食新品系。‘灵峰’橄榄果实椭圆形,平均单果重7.40 g,可食率81.00%,总糖4.10%,总酸1.16%,可溶性固形物11.40%,钙1230.00 mg.Kg-1;果皮黄绿色,果肉黄白色,果肉质地脆、化渣无涩味,回甘好,为晚熟类型。‘闽清2号’橄榄果实纺锤形,平均单果重7.60 g,可食率82.40%,总糖2.46%,总酸1.19%,可溶性固形物8.83%,钙627.33 mg.Kg-1;果皮绿色,果肉黄白色,果肉质地脆、化渣无涩味,风味清淡,并且表现出丰产和稳产特性,为中熟类型。‘灵峰’橄榄可作为鲜食品系,‘闽清2号’橄榄可作为鲜食兼加工品系。     

二级缓释熏蒸在六面密闭粮堆中的应用

通过对六面密闭麻袋包装小麦粮堆分别采用二级缓释熏蒸、常缓熏蒸和缓释熏蒸的施药方法进行对比试验。结果表明,采用二级缓释熏蒸保持PH3有效浓度时间最长、Ct值最大,熏蒸效果最理想。采用5.3 g/m剂量,全年只熏蒸1次即可保持粮堆全年无害虫。     

液体地膜育苗对棉花生育与产量的影响研究

研究了液体地膜育苗对棉花生长发育与产量的影响。试验表明 ,与塑料拱棚育苗相比 ,适量液体地膜( 5 0 0～ 75 0kg·hm 2 )育苗棉花增产显著。其增产机理是棉苗质量高 ,移栽后缓苗期短 ;叶面积大 ,生育前期增加快 ,后期下降幅度小 ;叶片光化学特性得到改善 ,棉铃蔗糖转化酶活性提高 ;成铃时空分布合理 ,优质铃数增加 ,铃重提高。在棉花生产中 ,采用液体地膜育苗是一项可行的技术     

温度、光周期和相对湿度对棉蚜茧蜂[Lysiphlebia japonica(Ashmead)]发育及繁殖的影响

室内条件下,22℃,L:D=16:8;RH:60％-80％,棉蚜茧蜂[Lysiphlebiajaponica(Ashmead)]个体发育历经卵、幼虫、蛹、成虫4个阶段,1个世代需12．5d,卵的发育起点温度为7．06℃,完成一个世代需有效积温为176．95日度。发育过程中,温度、光照、湿度三因子起决定性的作用。交配后的雌蜂产两性后代,未交配雌蜂营产雄孤雌生殖。     

“双碳”背景下白音华二号矿排土场生态修复探索

<正>《第四次气候变化国家评估报告》预测未来20年每10年全球平均增温0.2℃。气候变暖将导致水资源短缺,加剧土壤侵蚀和干旱,扰乱种植周期,破坏生态平衡,危害人类健康,不仅影响全球社会经济的可持续发展,而且直接威胁人类的生存。在气候变暖的客观现实驱动下,国际社会积极行动,我国作为《联合国气候变化框架公约》缔约国,     

瘿蚊类龙眼害虫的研究概况

本文简要概述了瘿蚊类龙眼害虫：龙眼叶瘿蚊（Asphondylia sp.）、龙眼叶球瘿蚊、Dimocarpomyia folicola Tokuda＆Yukawa和龙眼枝梢瘿蚊的分类地位、为害症状、形态特征以及发生为害情况,并提出了今后需加强瘿蚊类龙眼害虫的分类鉴定、生物学、生态学、综合治理、诱导产生虫瘿的细胞学与生理学特性等方向研究的建议。     

内蒙古大兴安岭林区森林公园建设中主体景观设计的思考

文章就森林公园设计中如何把握主体景观的特点,使森林公园设计独具特色进行探讨。旨在使林区森林公园各具千秋,步移景移,吸引更多的国内外游客。