多位点基因打靶技术的鳜鱼体内实验研究

在转基因动物的研究中,一般采用随机插入的方法。基因在受体动物的基因组中随机整合,严重制约了转基因动物外源基因的稳定遗传,是转基因动物研究亟待解决的问题。转基因定点整合技术,即基因打靶技术是解决上述问题的重要途径,但是基因打靶存在打靶效率太低的问题。本研究小组已建立了体外动物细胞的多位点基因打靶技术,并构建了用于鳜鱼的体内多位点基因打靶的打靶载体,本文开展多位点基因打靶技术的鳜鱼体内实验研究。以鳜鱼rDNA基因(编码rRNA的基因)及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含干扰素基因的打靶载体,以其间隔序列为靶位点,针对鱼类胚胎发育特点,采用精子介导技术进行多位点基因打靶,最终获得定点整合干扰素基因的鳜鱼,并建立一套适用于动物的基因定点敲入的体内基因打靶技术。主要研究内容如下:(1)采用组织培养方法,获得鳜鱼头肾淋巴细胞和脾淋巴细胞,采用脂质体介导法使多位点基因打靶载体在鳜鱼的细胞上实行基因转移。采用正负筛选方法,利用筛选药物G418和GCV(更昔洛韦)筛选转染后的细胞两周后,对存活细胞进行DNA水平和RNA水平鉴定。结果证明了干扰素基因在鳜鱼细胞上实现了定点整合和稳定表达。(2)利用精子介导法将经线性化处理后的多位点基因打靶载体在鳜鱼的胚胎上实行基因转移。(3)根据靶位点定点整合的正负筛选原理,利用筛选药物G418和GCV筛选与富集定点整合后的阳性鱼胚或鱼苗,结果成功孵化出106尾转基因鳜鱼鱼苗。(4)培育6个月后,取20尾转基因鳜鱼进行鉴定。采用PCR、RT-PCR、测序等方法进行定点整合的鉴定。结果表明:6尾检测到已转入的基因——干扰素基因,其中有3尾实现了定点整合并表达。本研究率先将多位点基因打靶技术应用到转基因鱼的研究中,建立一套适用于鱼类的高效、安全的多位点基因打靶技术,并获得外源基因定点整合并表达的鳜鱼。     

速生型刺槐遗传转化体系的建立

为获得稳定的转基因刺槐植株,以速生型刺槐叶轴为转化受体,对转化过程中的一些影响因素进行了探究,建立了较为完善的遗传转化体系。结果表明:继代20~35d之间刺槐叶轴最适宜转化;卡那霉素的筛选浓度为30mg/L;头孢霉素的抑菌浓度为200mg/L;合适的侵染时间是20min;30mg/L的乙酰丁香酮有利于抗性芽的发生;共培养2d对转化适宜;抑菌7d后再加选择压有利于抗性芽的产生。最后得到的抗性植株经PCR检测,初步证明外源目的基因OsDREB1已整合到刺槐基因组中。     

山东金乡60万亩“大蒜经济”富民强县

国家有关部委、国内外知名大蒜深加工专家、部分驻华大使和商务参赞,以及世界各地大蒜经销商等160余人,今天聚集北京人民大会堂,出席由中国蔬菜流通协会和素有全国最大的大蒜之乡美誉的山东省金乡县联合举办的“中国金乡一有机大蒜暨大蒜产业论坛”。专家指出,发展有机大蒜是富     

二色胡枝子组织培养的研究

为探索建立植株再生系统技术,以二色胡枝子种子为材料,对该树种组织培养进行了研究.结果表明,以0.1%升汞对种子灭菌2 min,发芽率较高,污染率仅为5%;基础培养基为1/2 MS,直立苗比例达到80%以上,显著高于MS和B5培养基;在增殖培养中,BA对分化系数影响最大,NAA其次,ZT的作用不明显,适宜的增殖培养基为1/2 MS BA 1.0 mg/L NAA 0.01 mg/L,分化系数可达3.15;随着NAA浓度提高,对生根抑制作用加强,其浓度不宜超过0.5 mg/L, IBA对生根有促进作用,浓度以IBA 1.5 mg/L 为宜.     

茶道插花

茶与花兼性相宜,心性相融,教人崇幽尚静,清心寡欲,进而修身养性,达到心灵的升华。纯真、质朴、清灵、脱俗、清简,为茶道插花追求之精神。茶道插花一词起源于日本,是在茶室这一特定的场所作为花卉装饰品而出现的。现代茶道插花可谓是东方式插花的一朵奇葩,     

矮生文竹的组织培养

<正> 矮生文竹是从中科院植物所引进,由普通文竹经组织培养取得的新变异类型。具有植株矮小,颜色嫩绿,冠平顶或伞形,枝叶短小而紧凑,姿态优雅等许多优点。形状似古松。株高一般不超过10厘米,是一种很有发展前途的珍稀微型室内盆景。矮生文竹目前尚未见到过结实植株。自1986年开始进行组织培养,最初采用的是O号培养基(MS+ZT0.1+6—BA0.5+蔗糖5％)但矮生文竹在此培养基上生长不良。主要表现在分化率太高,芽丛生密集、簇挤在培养基表面,高生长不明显。随继代培养代数的增多,芽变黄、变褐、甚至有的枯死。为解决上述问题,快速繁殖矮生文竹,对原培养基进行了改进试验,并设计了生根培养基,摸索出矮生文竹移栽管理的适当措施介绍如下:     

蜜源——科教电影文学剧本(续)

(接上期)长白山,绵延起伏;茫茫林海,树干挺直交错.镜头从一巨粗的树干摇上,一棵挺拔的椴树参天而起.再仰摇,旋转的树冠开满淡黄色的小花.椴树花,蜂在采蜜.<解说>森林,蜜蜂的祖籍.这里有建设高楼大厦的林木,又有许多能够泌造花蜜的树种.椴树,是我国东北地区的主要蜜源,它的一朵花能泌     

大豆田间植株分布匀度的初步研究

<正> 大豆是我省淮北地区主要作物之一,播种面积约900万亩。影响大豆产量不高的原因,除土壤瘠薄、旱涝频繁外,从栽培技术来看,主要是耕作粗放,播种质量差,田间管理不及时,密度不合理,田间植株分布不匀等。匀度是衡量田间植株实际分布的数值,表示在一定密度条件下田间植株的均匀程度。标准匀度包含群体内密度相同和单株之间距离相等两个方面;如果密度和植株间的营养面积参差不齐,势必影响产     

珠美海棠试管苗玻璃化发生机理的初步研究

该文研究了试验因子与珠美海棠（Ｍａｌｕｓｚｕｍｉ）玻璃苗发生的关系，并利用呼吸抑制剂探索了玻璃苗产生的机理．结果表明：玻璃苗产生与多种因子有关．当光呼吸途径和磷酸戍糖呼吸途径（ＨＭＰ）被抑制时，玻璃苗显著增加，初步认为是植物体内的呼吸代谢途径受阻所致