鸡树突状细胞的间接免疫荧光制片方法比较

【目的】比较分析骨髓源鸡树突状细胞两种间接免疫荧光制片方法（细胞爬片法和细胞滴片法），以进一步提高研究树突状细胞生物学的实验技术和方法。【方法】以鸡胚为试验素材，分离原代细胞，定向诱导分化获得未成熟的树突状细胞，并利用新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）lasota 株激活细胞。监测内源性蛋白 ROBO2（Roundabout）和外源性蛋白 NDV 表达情况，鸡源 NDV 抗体与小鼠源 ROBO2 单克隆抗体混合孵育，结合荧光素二抗进行标记。应用激光共聚焦扫描显微镜（laser scanning confocal microscopy, LSCM）对树突状细胞进行荧光成像并捕抓图像数据，多方位分析对比细胞爬片法和细胞滴片法。【结果】细胞滴片制作过程繁琐且耗时长；细胞爬片则操作简单可缩短实验时间。两种制片方法的 NDV 和 ROBO2 单阳性和阴性分别存在极显著差异，双阳性存在荧光反应性显著差异。【结论】滴片法蛋白免疫反应性更优，适合标记目的蛋白进行亚细胞定位。爬片法始终维持细胞形态学特征和保持蛋白特性，利于两抗体荧光重叠，综合显色性更强。     

规模化猪场不同季节的饲养管理及疫病防治

阐述了规模化猪场在不同季节常见的疫病及其防治方法及相应的饲养管理措施,以期对规模化猪场的管理提供参考。     

22～42日龄黄羽肉鸡钙需要量研究

本试验旨在研究不同饲粮钙水平对22～42日龄黄羽肉鸡生长性能、胫骨性能和血清生化指标的影响,探讨22～42日龄黄羽肉鸡的钙需要量。试验选用22日龄岭南黄羽肉公鸡1 200只,分为6个处理,每个处理5个重复,每个重复40只鸡。处理1(对照组)肉鸡饲喂玉米-豆粕型基础饲粮(钙水平为0.45%),处理2～6(试验组)肉鸡饲喂在基础饲粮中添加不同水平石粉的试验饲粮,饲粮钙水平分别为0.60%、0.75%、0.90%、1.05%和1.20%,其他营养水平各处理基本一致。试鸡自由采食与饮水。试验期21 d。结果表明:1)在基础饲粮中添加钙显著提高了试鸡42日龄体重和平均日增重(P<0.05),显著降低了料重比(P<0.05),0.75%、0.90%、1.05%和1.20%钙水平组平均日采食量显著低于对照组和0.60%钙水平组(P<0.05)。2)不同饲粮钙水平对试鸡胫骨鲜重无显著影响(P>0.05),而对胫骨折断力、脱脂胫骨干重、胫骨灰分含量、脱脂胫骨灰分含量、脱脂胫骨中钙和磷含量、胫骨灰分中钙和磷含量影响显著(P<0.05),0.90%和1.05%钙水平组胫骨性能指标均显著优于对照组(P<0.05)。3)不同饲粮钙水平对试鸡血清钙、磷含量无显著影响(P>0.05)。综合得出,以生长性能和胫骨性能为评定指标,22～42日龄黄羽肉鸡钙需要量分别为0.60%和0.90%。     

纳米铜、灵芝孢子粉与大豆异黄酮对1~30日龄清远麻鸡生长、免疫及抗氧化性能的影响

本研究对比分析了饲粮中添加纳米铜、灵芝孢子粉与大豆异黄酮对育雏阶段清远麻鸡生长性能、免疫功能及抗氧化性能的影响，旨在为肉鸡生产中添加剂的开发及应用提供参考。采用单因素随机分组设计，选用1 200只1日龄清远麻鸡母鸡分成4组，对照组（CON）饲喂基础饲粮，3个处理组（NC、GLS及SI）分别在基础饲粮中添加2 500 mg/kg纳米铜、600 mg/kg灵芝孢子粉和300 mg/kg大豆异黄酮预混剂。每个处理10个重复，每个重复30只鸡，试验期30天。试验结束后，采集试验鸡血浆、空肠黏膜样品，测定血液抗氧化相关生化指标及肠道免疫因子。结果表明：与对照组相比，①饲粮添加纳米铜、灵芝孢子粉与大豆异黄酮对清远麻鸡肉仔鸡的生长性能均无显著影响（P>0.05）。②灵芝孢子粉显著提高了30日龄清远麻鸡的胸腺比例（P<0.05）。③纳米铜显著提高了清远麻鸡的空肠绒毛隐窝比（P<0.05）。④纳米铜、灵芝孢子粉与大豆异黄酮均显著增加了清远麻鸡血浆和空肠中总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性（P<0.05）；纳米铜显著增加了血浆谷胱甘肽过氧化氢酶（GSH-Px）活性（P<0.05）、降低了空肠黏膜丙二醛（MDA）含量（P<0.05）；大豆异黄酮显著降低血浆与空肠MDA含量（P<0.05）。⑤纳米铜组清远麻鸡空肠中免疫球蛋白A（IgA）含量显著增加（P<0.05），灵芝孢子粉组清远麻鸡血浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、空肠中干扰素-γ（IFN-γ）含量显著降低（P<0.05）。在本试验条件下，纳米铜、灵芝孢子粉与大豆异黄酮对清远麻鸡肉仔鸡生长性能没有显著影响，但均可改善抗氧化性能指标；纳米铜可提高空肠绒毛隐窝比，纳米铜与灵芝孢子粉可调节免疫因子分泌。其中纳米铜对抗氧化性能的调节作用最优，灵芝孢子粉对免疫功能调节作用最优。     

低钙磷饲粮添加高剂量植酸酶对1～21日龄黄羽肉鸡生长性能、胫骨性能、血清生化指标的影响

本试验旨在研究低钙磷饲粮中添加高剂量植酸酶对1～21日龄黄羽肉鸡生长性能、胫骨性能、血清生化指标和钙磷代谢关键基因表达量的影响。试验选用1 080只1日龄岭南黄羽肉公雏,根据体重一致原则,分为6个组(每组6个重复,每个重复30只肉鸡):对照(PC)组(正常的磷酸氢钙添加水平,非植酸磷水平达到标准要求)、中非植酸磷(MP)组(PC组降低50%磷酸氢钙添加水平,非植酸磷水平减少1/3)、MP+2 000组(MP组+2 000 FTU/kg植酸酶)、MP+4 000组(M P组+4 000 FTU/kg植酸酶)、低非植酸磷(LP)+2 000组[PC组不添加磷酸氢钙,非植酸磷水平减少2/3+2 000 FTU/kg植酸酶)、LP+4 000组(PC组不添加磷酸氢钙,非植酸磷水平减少2/3+4 000 FTU/kg植酸酶),各组饲粮钙磷比保持在1.4∶1.0左右。试验期21 d。结果表明:1)与PC组相比,MP+4 000、LP+4 000组肉鸡终末体重、平均日增重显著提高(P0.05);各植酸酶添加组肉鸡平均日采食量显著提高(P0.05)。与MP组相比,各植酸酶添加组肉鸡终末体重、平均日增重、平均日采食量均显著提高(P0.05),料重比有降低的趋势(P=0.088)。2)与PC组相比,M P+4 000、LP+4 000组胫骨折断力显著提高(P0.05); M P组胫骨脱水脱脂重、灰分和磷含量显著降低(P0.05)。与MP组相比,各植酸酶添加组胫骨折断力显著提高(P0.05); MP+4 000组胫骨脱水脱脂重显著提高(P0.05); MP+4 000、LP+4 000组胫骨灰分、磷含量显著提高(P0.05);植酸酶的添加有升高胫骨钙含量的趋势(P=0.055)。3)与PC组相比,MP组血清磷含量显著降低(P0.05)。与MP组相比,MP+2000、MP+4 000、LP+4 000组血清磷含量显著升高(P0.05);各植酸酶添加组血清钙含量有升高的趋势(P=0.054),血清碱性磷酸酶活性有降低的趋势(P=0.089)。4)与PC组相比,MP组肾脏克洛索蛋白、成纤维生长因子受体1(Fgfr1)基因表达量显著下调(P0.05)。与MP组相比,MP+4 000组肾脏克洛索蛋白、Fgfr1基因表达量显著上调(P0.05);添加植酸酶对肾脏1α-羟化酶基因表达量影响不显著(P0.05)。综上,低钙磷饲粮添加高剂量植酸酶可提高1～21日龄黄羽肉鸡生长性能,促进矿物元素在胫骨的沉积,改善胫骨性能,调节血液和肾脏钙磷代谢,维持机体钙磷平衡。     

基于转录组分析不同硒源调节黄颡鱼适应低温应激的信号通路及关键基因

本试验基于转录组测序和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术研究亚硒酸钠和酵母硒对低温(13℃)应激下黄颡鱼肝脏转录组和关键基因表达的影响,以期探讨不同硒源调节黄颡鱼适应低温应激的信号通路及关键基因。以5.7 g左右的黄颡鱼为研究对象,分别投喂添加亚硒酸钠(T1组)和酵母硒(T2组)的试验饲料,于养殖42 d后开展低温应激试验。结果显示:T2组黄颡鱼的增重率和存活率高于T1组,但差异不显著(P0.05)。与亚硒酸钠相比,酵母硒显著提高了低温应激后黄颡鱼血清甘油三酯含量及抑制与产生超氧阴离子自由基能力(P0.05),并显著降低了血清丙二醛含量(P0.05)。肝脏转录组分析显示,T1组和T2组分别产生了140 574 638和139 455 508个高质量reads(clean reads),共筛选到147个差异表达基因,其中76个基因表达量上调,71个基因表达量下调,表达上调基因显著富集到蛋白质水解作用、水解酶活性、肽酶活性、肽链内切酶活性、羧肽酶活性、蛋白质代谢过程以及胰腺分泌、蛋白质消化与吸收、脂肪消化与吸收、花生四烯酸代谢、醚脂代谢等通路。这些通路中的硒蛋白M、磷脂酶A2、羧肽酶A1、类胰蛋白酶-1、胰凝乳蛋白酶样弹性蛋白酶家族成员2A等关键基因的表达量显著上调。通过RT-qPCR对上述差异表达基因进行验证,证实了转录组测序结果的可靠性。综上所述,摄食酵母硒为硒源饲料的黄颡鱼的生长性能、抗低温能力优于摄食亚硒酸钠为硒源饲料的黄颡鱼,酵母硒可能通过上调胰腺分泌、蛋白质消化与吸收、脂肪消化与吸收、花生四烯酸代谢、醚脂代谢等通路关键基因的表达提高黄颡鱼的抗低温应激的能力。