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通过在猪鲜精和17℃保存精液中添加聚维酮碘(PVP-Ⅰ),探讨其杀灭精液有害细菌的效果和对精子质量的影响,从而达到阻断病原菌垂直传播的目的。保存后不同时间时取样精液接种和培养,用细菌菌落计数的方法检测精液中细菌菌落总数,并用MicroScanA/S4细菌鉴定仪鉴定细菌种类。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率、活力,低渗肿胀法(HOST)检测质膜完整性线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测线粒体活性和考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,用PVP-Ⅰ消毒猪精液时,在0~0.27g/L随着PVP-Ⅰ质量浓度的增加杀菌效果越好。精液中添加0.20g/L和0.27g/L PVP-Ⅰ能杀死棒状杆菌、大肠杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、链球菌(作用1h),但不能杀死变形杆菌。在猪精液稀释液中添加质量浓度0~0.20g/L的PVP-Ⅰ对17℃保存猪精子质量无影响。结果表明,聚维酮碘在质量浓度0.20g/L能杀死猪精液中的棒状杆菌、大肠杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、链球菌,并且对17℃保存猪精子质量常规指标(活率、活力、线粒体活性、质膜完整性和顶体完整性)无影响。 相似文献
92.
利用微量液体组织块贴壁法原代培养分离新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏;通过接触抑制和解除抑制研究该类细胞的增殖潜力,免疫荧光进行鉴定;并通过脂质体介导对分离到的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞分别进行EGFP-N1和DsRed-N1基因转染。结果成功分离到新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞,体外可以大量传代和冷冻,目前已经传至50代以上,生长良好;冷冻复苏和接触抑制解除后仍可以正常培养和传代;细胞免疫荧光检测,波形蛋白表达阳性,角形蛋白表达阴性;转染48h后荧光显微镜下可以观察到绿色荧光和红色荧光,表明瞬时转染新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞可以获得成功,其中转染DsRed-N1基因的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞已经传至60代以上。结果表明,本试验成功建立了新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞的体外培养体系,在体外能稳定培养和传代,并可以成功获得转基因的新生广西巴马小型猪肾成纤维细胞。 相似文献
93.
主要探讨猪手工克隆(HMC)胚胎和体外受精(IVF)胚胎及孤雌激活(PA)早期胚胎发育过程中6 h内的单细胞核全基因组DNA甲基化模式.运用抗5-甲基胞嘧啶抗体免疫荧光和激光共聚焦显微镜检测相对荧先强度的方法,检测猪手工克隆胚在融合后6 h内全基因组DNA甲基化模式,并与同时期猪体外受精胚及孤雌激活胚胎进行比较,从而探讨这3种胚胎变化模式的异同.结果显示:3种不同来源的胚胎在培养后不同时间点比较时,2、4、6 h均呈强甲基化状态,且均呈下降趋势;在同时间点比较时,2 h和6 h这两个时间点检测到3种胚胎的相对荧光强度均差异不显著(P>0.05),而在4 h时,HMC胚胎显著高于PA和IVF胚(P<0.05).结论:猪手工克隆胚在融合后6h内虽然也发生类似IVF胚的全基因组DNA去甲基化,但其去甲基化不充分,甲基化程度偏高,这可能是导致核移植胚胎核重编程不充分、发育能力低的一个原因. 相似文献
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