村民心里有杆秤

我担任了30多年村干部，接触过8位乡党委书记（人民公社时期称公社党委书记），4位乡长（人民公社时期称公社管委主任）。其中，范石渠、员红薯、郭毁坝三位乡领导给洪池乡人民留下了最深的印象。虽然时隔40多年，三位乡领导也相继去世，但在洪池乡，人们提及现任乡干部工作情况，总爱将他们作为参照对象。这印证了那句俗话：“村民心里有杆秤，孰轻孰重分得清。”     

关于五龙洞国家森林公园进一步发展的思考

五龙洞森林公园地处秦岭南坡,位于陕甘两省交界地带的略阳县北部34公里处（景区大门距十天高速仅28公里）,是在国有金池院林场基础上建立的。公园由五龙洞、青龙谷、白龙谷、三怫寺、氐羌民俗村五大景区组成，有景点200余处，海拔1500—2214米，年均气温12摄氏度，     

猪博卡病毒VP1蛋白抗原表位分析及其克隆表达

为研究猪博卡病毒(PBo V)VP1蛋白在血清学诊断中的作用,用DNAStar软件预测了PBo V NP08株(Gen Bank登录号KR014255.1)VP1蛋白的主要抗原表位,确定1-334个氨基酸为优势抗原表位区,构建重组质粒p ET32a-VP1,将其转化感受态细胞BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为56.7 ku的重组蛋白VP1,主要以包涵体形式存在。纯化后蛋白的Western blot结果表明,表达的VP1蛋白与临床阳性血清具有良好的反应性。用该蛋白包被ELISA板,检测10份临床感染PBo V的猪血清样品和3份未感染猪的血清,结果表明其具有很好的特异性,不与未感染猪的血清发生反应,为建立PBo V感染血清学诊断方法奠定了基础。     

园林工程坡面绿化的作用与施工技术分析

对园林工程坡面进行绿化,对环境及交通有重要作用,为保证园林工程坡面绿化质量,需要使用到坡面绿化技术。本文阐述了园林工程坡面绿化施工的作用,并对具体的施工技术进行了分析。     

宣城市近10年冬季大到暴雪天气分析

运用常规天气资料、NCEP资料，对近10年宣城市冬季大到暴雪天气过程进行分析。结果表明，宣城市冬季有两类大到暴雪天气过程．Ⅰ类过程由于贝湖到巴湖之间横槽转竖，引导强冷空气南下抬升暖湿空气形成，主要影响系统有500hPa北支槽、中低层冷槽切、700hPa西南风低空急流；Ⅱ类过程由于强盛的南支锋区上，有波动东移，西南暖湿气流增强，在冷垫上辐合上升形成，主要影响系统有500hPa南支槽、700hPa西南风低空急流、850hPa低涡暖切。Ⅰ、Ⅱ类大到暴雪天气过程温度层结、水汽输送、动力条件、温度平流均有各自的特征。计算Ⅰ类、Ⅱ类大到暴雪过程湿位涡，腻Pn均大于0，均为对流稳定性降水，MPV2虽然均小于0，但有各自的变化特征，反映出Ⅰ类、Ⅱ类过程的形成机制。Ⅰ类过程是由于中低层楔状冷空气的增强，本地大气水平风垂直切变和湿斜压性增加，从而导致垂直涡度的显著性发展；Ⅱ类过程是由于暖湿空气的增强，本地大气水平风垂直切变和湿斜压性增加，从而导致垂直涡度的显著性发展。     

贵州省银杏大蚕蛾潜在分布区预测研究

通过实地调查和采集标本,结合室内饲养观察分析,对银杏大蚕蛾与寄主发育的关系进行了研究,目的是为了弄清银杏大蚕蛾在贵州省潜在的分布区,科学评估该物种的危害,为及时采取有效应对措施提供依据。根据银杏大蚕蛾在贵州省内的分布点数据以及环境数据,建立Maxent生态位模型,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析法,对Maxent生态位模型预测的银杏大蚕蛾潜在分布区结果进行准确性验证。     

1株抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

为鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳(N)蛋白的抗原表位,本研究通过原核表达N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合和亚克隆技术,筛选出1株稳定分泌抗PEDV N蛋白抗体的杂交瘤细胞9B4。经鉴定单克隆抗体9B4的亚型为IgG1型,轻链为Kappa链。腹水抗体ELISA效价为10~6以上。ELISA、Western blot和免疫荧光鉴定结果显示该单克隆抗体反应原性和特异性良好。利用噬菌体展示技术对单克隆抗体9B4进行抗原表位鉴定,获得4个N蛋白的模拟抗原表位(C11、C12、C14和C26)。随后分别以噬菌体阳性克隆为模拟抗原,对临床PEDV血清样品进行检测,发现其均能与猪PEDV阳性血清发生特异性结合,而与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)阳性血清不反应,说明本研究获得的N蛋白模拟表位可用于PEDV抗体的检测,有助于PED流行病学调查和PEDV疫苗免疫效果的评价。     

草地补播对甘南草原高寒草甸高原鼢鼠食性的影响

本研究阐明草地补播对高原鼢鼠(Eospalax baileyi)食性的影响,能为其防控和草地管理提供重要参考.利用胃容物显微分析法,研究高原鼢鼠在甘南高寒草甸补播草地和退化草地的食性与生态位差异.结果发现,草地补播显著改变了高原鼢鼠的食物资源,退化草地下优势植物主要是菊科(Asteraceae,45.30％)、唇形科(Lamiaceae,26.40％)和蔷薇科(Rosaceae,18.72％),而补播后则变为禾本科(Poaceae,37.00％)、蔷薇科(25.68％)和莎草科(Cyperaceae,16.54％).退化草地中高原鼢鼠采食15科27属27种植物,食物比例中蔷薇科(45.72％)、禾本科(19.68％)和廖科(Polygonaceae,17.11％)最高.而在补播草地高原鼢鼠采食15科25属28种植物,主要采食蔷薇科(40.71％)、禾本科(25.32％)、廖科(11.70％)和莎草科(11.45％).草地补播影响了高原鼢鼠采食植物的比例,且食性的生态位宽度、食物的多样性指数和均匀度有所提高.综上所述,补播可以通过减少杂类草的比例来减少高原鼢鼠的食物来源,喜食植物的减少可能会增加高原鼢鼠的觅食时间从而增加高原鼢鼠的觅食代价.通过补播影响高原鼢鼠食性是其生态防控的一个有效途径.     

鸡Toll样受体15单克隆抗体的制备及其初步应用

旨在制备鸡Toll样受体15（ChTLR15）的特异性单克隆抗体（mAb）,并初步应用。利用PCR技术扩增ChTLR15第162-386位氨基酸,克隆于载体pET-30a中进行诱导表达,获得高纯度的重组ChTLR15（162-386 aa）蛋白。然后采用皮下多点注射方式将ChTLR15免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,常规获得针对ChTLR15蛋白的单克隆抗体。运用原核表达系统对ChTLR15基因进行截短表达,对单克隆抗体针对的ChTLR15抗原表位进行鉴定。利用6C7株单克隆抗体以激光共聚焦显微技术对鸡HD11细胞进行定位,同时,利用免疫组化技术确定ChTLR15在鸡部分组织中的分布情况。结果表明：成功构建重组质粒pET-30a-ChTLR15（162-386 aa）,经IPTG诱导表达后,获得以包涵体形式存在的约26 ku的重组蛋白ChTLR15（162-386 aa）。方阵试验表明,最适血清稀释度为1：6 400,最适抗原包被浓度为0.35 μg·mL^-1。采用有限稀释法进行4轮筛选,最终获得4株针对ChTLR15蛋白的单克隆抗体,将其以2G4、6C7、6D10、7C4进行命名。2G4与6C7的亚类为IgG2a,6D10与7C4的亚类为IgG1。Western blot结果显示,4株单抗均能与ChTLR15发生特异性反应,而不与其他受检蛋白反应。运用原核表达系统对ChTLR15（162-386 aa）进行截短表达,对ChTLR15单克隆抗体的抗原表位进行鉴定。结果显示,单抗2G4与7C4识别的抗原表位为²³⁰QLGTVLEF²³⁷,6C7与6D10识别的抗原表位为²⁴⁵EMDLLS²⁵⁰。细胞定位结果显示,ChTLR15蛋白位于细胞表面。免疫组化结果显示,健康对照鸡肝、脾、肺、肾均有微弱阳性染色,禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC）感染鸡肝、脾、肺、肾阳性染色有所增强。本研究通过淋巴细胞杂交瘤技术成功获得4株抗ChTLR15蛋白的单克隆抗体,通过截短免疫原蛋白法对其识别的线性表位进行鉴定,可用于进一步研究ChTLR15的结构与功能,为后续信号通路、免疫机理、疫苗研发等相关领域的研究提供了有力工具。     

猪流行性腹泻病毒S2基因B细胞表位的筛选及其单克隆抗体的制备与鉴定

目的 应用生物学软件与单克隆抗体技术相结合的方法鉴定PEDV S2基因B细胞表位肽。方法 利用CLC Sequence viewer 6.8软件及在线数据库IEDB筛选出PEDV S2基因B细胞表位,并人工合成表位肽。将表位肽与钥孔血蓝蛋白（KLH）耦联后作为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,通过ELISA法筛选出抗体效价较高的小鼠进行1次加强免疫,3 d后取脾脏制备脾细胞悬液进行细胞融合。经HAT选择培养基培养筛选有效杂交瘤细胞,采用ELISA法筛选阳性克隆继续进行扩大培养。将部分阳性杂交瘤细胞进行小鼠腹腔注射,并收集腹水。通过ELISA方法分别检测小鼠腹水和单克隆细胞株培养上清液抗体效价,确定最高效价作为后备细胞株。结果 筛选出B细胞表位肽序列为:MQYVYTPTYYML;免疫多肽抗原后融合前血清抗体效价达到1:2 000;BALB/c小鼠腹水及单克隆细胞株培养物上清液ELISA检测结果显示抗体效价达到1:4 000。结论 筛选出了PEDV S2基因B细胞表位,为PEDV表位肽疫苗载体构建研究提供参考。