蜜蜂球囊菌几种胞外蛋白酶的特性

 【目的】研究由蜜蜂球囊菌引起的真菌性疾病白垩病的侵染机制,以及蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶的种类及其特性。【方法】利用人工合成的培养基,在体外诱导蜜蜂球囊菌分泌胞外蛋白酶,用硫酸铵沉淀和透析,获得初酶液,利用相应的底物对酪蛋白酶、偶氮酪蛋白酶、胶原蛋白酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶的活力进行测定。【结果】蜜蜂球囊菌分泌的胞外酶主要有酪蛋白酶、偶氮酪蛋白酶、胶原蛋白酶3种,无弹性蛋白酶和胰蛋白酶。对这3种酶的最适温度、pH值以及热稳定性和酸碱稳定性进行了测定。这3种胞外酶的最适反应温度都在40℃左右,最适pH为7左右,均不耐高温,热稳定性差,在中性的pH环境下比较稳定。【结论】蜜蜂球囊菌可以分泌多种胞外蛋白酶,它们的最适pH和温度与蜜蜂消化道内的环境一致。     

1株蛋白酶产生菌的分离及生理特征研究

采用平板透明圈法,经初筛和复筛从高黎贡山土样中分离出1株产蛋白酶活性较高的菌株CM8,并对其形态和生理生化特征进行研究。结果表明,CM8菌株的菌落呈不规则形,乳白色,表面湿润,边缘整齐;在光学显微镜下,菌株呈杆状,具运动性,革兰氏染色阳性。经测定,其最适生长温度为32℃,最适生长pH值为7.5,菌株可在酪素平板上产生清晰可见的透明圈,透明圈直径和菌落直径的比值为3.71。菌株产高温蛋白酶的酶活力可达34.24 U/m l。     

大豆、荞麦多肽复合营养饮料的研制

以荞麦、大豆分离蛋白为主要原料,采用酶解工艺将碱法浸提得到的复合蛋白水解为多肽液进行复合营养饮料的调配。研究结果表明:荞麦蛋白提取工艺参数为固液比1∶9,pH 10,浸提时间1 h,以碱性蛋白酶的水解能力最强,荞麦蛋白浸提得率可达到32.28%。采用四因素三水平的正交试验确定出饮料的最佳配方:荞麦多肽1.75%,大豆多肽1.0%,酸味剂0.35%,甜味剂8%。     

纳豆芽孢杆菌配伍发酵产中性蛋白酶的性质研究

为研究纳豆芽孢杆菌SH和B1配伍发酵产物中中性蛋白酶的性质,通过Folin-酚法测定中性蛋白酶的最适作用温度、最适作用pH值、pH稳定性、热稳定性和金属离子、表面活性剂、抑制剂、模拟胃肠道环境对酶活力的影响,绘制相对酶活力变化图。结果表明:该酶的最适作用温度为70℃,最适作用pH为11.0,其次是pH为7.0,40℃时热稳定性较好,在pH6～7时比较稳定,属中性蛋白酶。金属离子、抑制剂和模拟胃环境对酶有抑制作用,而10g/LTween-80和模拟肠道环境对酶有激活作用。     

饲料中添加植酸酶对大口黑鲈生长和消化酶活性的影响

用添加不同水平植酸酶（0、500、1 000、1 500 U/kg）的饲料喂养初始体重为23 g左右的大口黑鲈Micropterus salmoides56 d,研究植酸酶对大口黑鲈生长和消化酶活性的影响。结果显示：饲料中添加1 000U/kg植酸酶能显著促进大口黑鲈的生长,降低饲料系数（P〈0.05）。1 000、1 500 U/kg组大口黑鲈胃蛋白酶活性较对照组分别提高了28.14%和20.09%,差异显著（P〈0.05）;各处理组鱼幽门盲囊中蛋白酶活力与对照组相比差异显著（P〈0.05）,而肠道中蛋白酶活性差异不显著（P〉0.05）。与对照组相比,各处理组鱼肝胰脏和肠淀粉酶活性有所提高,但差异不显著（P〉0.05）;1 000、1 500 U/kg组大口黑鲈的胃淀粉酶活性有所降低,但差异不显著（P〉0.05）。     

不同浓度金属离子对酸性蛋白酶活性的影响

[目的]探寻不同浓度金属离子对黑根霉产酸性蛋白酶活性的影响,为酸性蛋白酶的应用提供理论依据。[方法]以黑根霉作为研究菌株,研究了Cu2＋,Mn2＋,K＋,Ca2＋,Li＋,Zn2＋,Fe2＋和Na＋对酸性蛋白酶活性的影响。[结果]Cu2＋,Mn2＋,K＋,Ca2＋和Na＋5种离子在一定浓度范围内对酸性蛋白酶活性起激活作用;Li＋,Zn2＋和Fe2＋3种离子对酸性蛋白酶活性起抑制作用。[结论]不同浓度金属离子对酸性蛋白酶活性影响不同,可优先选择激活作用强的金属离子来促进酸性蛋白酶活性。     

长期施肥对黄棕壤性水稻土生物学特性的影响

【目的】土壤生物肥力是土壤质量的直接反映,研究长期施肥对土壤生物学特性的影响可以为提高土壤质量及农田可持续利用提供理论依据。【方法】本文以长期不施肥(CK)为对照,研究长期单施氮肥(N)、氮、磷配施(NP)、氮、磷、钾配施(NPK)、单施有机肥(M)、有机肥+氮磷钾(MNPK)配施对黄棕壤性水稻土磷脂脂肪酸含量(PLFA)、微生物量碳、微生物量氮和微生物量磷(SMBC、SMBN、SMBP)、及与氮磷转化有关的水解酶活性的影响。【结果】长期施用有机肥显著提高了土壤总PLFA含量、真菌/细菌比值、真菌PLFA相对含量、SMBC、SMBN、SMBP含量,及土壤碱性磷酸酶、蛋白酶和脲酶活性,促进AM菌根的生长;而长期单施氮肥处理抑制了磷酸酶活性及大多数菌群生长。通过对PLFA进行主成分分析,配施有机肥的处理与单施化肥及CK处理微生物群落结构显著不同;PLFA载荷值分析表明,真菌特征脂肪酸及不饱和脂肪酸易受有机肥施用的影响,而放线菌特征脂肪酸更易受施用化肥的影响。【结论】化肥与有机肥长期配施提高了PLFA总含量、真菌PLFA含量、真菌PLFA/细菌PLFA比值,显著改善了土壤生物肥力状况,有利于土壤健康。     

烘烤变黄环境对上部叶蛋白酶活性的影响

运用二因素最优回归设计,研究烤烟品种K326烘烤变黄期温度和相对湿度对上部叶蛋白酶活性的影响。结果表明,在烤烟上部叶烘烤变黄过程中蛋白酶活性均呈先升后降的变化趋势,在变黄温度和相对湿度范围内低温和中湿有利于维持上部叶蛋白酶活性在较高水平。从提高上部叶蛋白酶活性的角度考虑,上部叶烘烤的变黄恒定温度为34.0℃左右、相对湿度88.0%(即干湿差1.5℃)左右为宜。     

响应曲面法研究白果蛋白的酶解工艺

[目的]确定白果蛋白的最佳酶解条件。[方法]分别采用木瓜蛋白酶,2709碱性蛋白酶,中性蛋白酶对白果蛋白进行酶解,并对酶解效果较好的碱性蛋白酶进行单因素试验,考察各因素对酶解效果的影响;采用Designexpert软件设计试验、创建模型,采用响应曲面法分析试验结果。[结果]碱性蛋白酶对白果蛋白的水解度最大（50.50%）;酶解温度为50℃时蛋白水解度最大,酶用量为3g和酶解时间为6h时蛋白水解度达到稳定点;据模型分析,各因素对酶解效果的影响依次为：pH值〉温度〉底物浓度,最佳酶解条件为：时间6h,酶用量2g,pH值9.0,温度47℃,底物浓度2.17%。[结论]最佳酶解条件下白果蛋白的水解度可达67.75%,水解液过膜后干燥可得粗多肽1.3g（占干燥白果粉的6.51%）。     

甘蓝型油菜Kunitz蛋白酶抑制剂的异源表达与理化特征分析

利用毕赤酵母表达系统首次克隆表达了一个油菜籽来源的Kunitz蛋白酶抑制剂基因(RTI;rti),分离纯化后对该抑制剂进行了理化特征分析.结果显示:在摇瓶发酵水平,重组RTI诱导表达水平达到628 mg·L-1,抑制剂比活性达到69.6 TIU·mg-1蛋白;重组RTI在30～90℃可保持70％以上抑制活性,在pH 2...