应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测Ⅰ.JEV、PPV、PRRSV、PRV多联PCR引物设计

首先在ＧinＢank查出日本乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）、伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）、猪繁殖与 呼吸系统综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）和猪细小病毒（ＰＰＶ）基因组的所有已知序列,对各病毒基因区域进行同源性分析,结果各病毒基因组的结构特点,发现并确定了ＰＲＶ的gＨ基因区、ＪＥＶ的多聚蛋白基因区、ＰＲＲＳＶ的结构蛋白区和ＰＰＶ的ＶＰ２基因区为各自病毒保守序列。利用Ｇoldkey软件对上述保守的特殊序列进行引物设计,要求Ｇ＋Ｃ含量     

内蒙古动物狂犬病流行病学研究

狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)引起的几乎所有温血动物都易感的人兽共患病。近年来,内蒙古地区发生了多起家养动物和野生动物疑似狂犬病疫情,给当地养殖业造成巨大损失。利用直接荧光抗体试验对2014-2016年内蒙古自治区发生的5起野生狐狸、牛、骆驼和犬的疑似狂犬病疫情进行诊断。经确诊,上述疫情均为RABV引起的。通过RT-PCR和核苷酸序列测定,获得6株病毒全长N基因序列,使用DNAStar和MEGA等软件将上述序列与周边省份和临近国家的流行毒株进行同源性比较和系统进化分析。研究结果显示,6株毒株核苷酸同源性为98.8%~99.9%,6株毒株均属于世界群草原型RABV,该型毒株在俄罗斯、蒙古、哈萨克斯坦的野生狐狸、狼群中广泛传播,本研究首次发现该型毒株已经由野生狐狸传播至犬群。进一步研究发现,内蒙古动物狂犬病传播来源包括野生狐狸、貉、犬等,流行的毒株类型包括亚洲1群、世界群和北极相关群,这些使得内蒙古成为我国狂犬病疫情最为复杂的地区之一,增加了该地区狂犬病防控难度。本研究通过对近年来内蒙古动物狂犬病进行流行病学分析,针对性地提出了内蒙古动物狂犬病防控措施。     

广西一个黑髯墓蝠群落的病毒组研究

蝙蝠是许多重要人兽共患病毒的自然宿主.对广西壮族自治区的一个蝙蝠群落进行了病毒监测,共采集了95只黑髯墓蝠(Taphozous melanopogon),对其肺脏和肠道及其内容物进行了病毒宏基因组学分析.结果 表明:测得的病毒序列分属于17个病毒科,其中包括哺乳动物、节肢动物和植物等来源的病毒及噬菌体.进一步对发现的环状病毒(Orbivirus)和Pegivirus进行了特异性PCR检测,其中环状病毒在肺脏中阳性率为10.5％(10/95),肠道阳性率为36.8％ (35/95),其中8只蝙蝠2种脏器均为阳性;进一步扩增得到了环状病毒的4个节段的部分序列,对RdRP的多序列比较和系统进化显示,该环状病毒在库蠓和白蛉来源环状病毒群和蚊类来源环状病毒群之间形成了一个独特的进化分支,与已知环状病毒的氨基酸相似度仅为45％～ 55％,是一种新型的环状病毒.另外,通过qRT-PCR对Pegivirus进行检测,发现其阳性率为78.9％ (75/95),其中病毒滴度最高的为每毫克8.56× 104个病毒拷贝,并在5个肺脏阳性样品中扩增得到了5株Pegivirus,它们之间的核苷酸相似度为98％～99％,而与非洲喀麦隆发现的墓蝠Pegivirus的核苷酸相似度为76％,进化树显示其在Pegivirus G进化群中形成了一个新的进化分支.此研究增加了对黑髯墓蝠病毒组的认识,其中发现的环状病毒和Pegivirus揭示了相关病毒的遗传多样性.     

我国猪瘟病毒2.1c亚型优势流行株的全基因组序列分析

为了揭示我国猪瘟病毒2.1c流行株的基因组特征,对从1998年和2011—2018年收集的8个2.1c流行株进行全基因组序列测定和比较分析。结果表明：基因2.1c流行株之间的基因组序列同源性为96.3%～99.1%,多聚蛋白的氨基酸同源性为98.2%～99.3%,这些毒株与疫苗C株的基因组和多聚蛋白同源性分别为83.9%～84.7%和91.7%～92.4%。多聚蛋白氨基酸比对发现,2.1c流行株相比于疫苗株至少有260个氨基酸替换位点,其中E^rns蛋白的替换比例最高,其次为NS5A,Core和E2。选择压力分析显示,猪瘟病毒2.1c流行株多聚蛋白的选择压力测度参数ω<1,表明其正承受着纯化选择压力,同时发现14个正向选择位点分布于7个病毒蛋白上。基于E2基因的进化分析显示,2.1c流行株的E2基因平均进化速率为1.862×10^-3个替换/位点/年,高于所有基因型毒株E2基因的进化速率(9.547×10^-4个替换/位点/年)。研究系统地分析了基因2.1c亚型流行株的进化特点及其与C株的遗传差异,结果有助于进一步研究猪...     

猪瘟国际流行态势、我国现状及防制对策

 猪瘟 (classicalswinefever,CSF)仍然是严重危害全球养猪业的重要传染病 ,是我国主要的畜禽疫病之一。目前该病流行于除北美和大洋洲外的世界上各大洲和地区。笔者分析了当前国际上猪瘟的流行态势与流行原因 ,并在此基础上结合我国养猪业的发展现状 ,根据自身多年的研究结果 ,用可靠的试验数据 ,着重阐述了我国猪瘟的流行现状与分子流行病学本底 ,就此提出了一些新的防制对策 ,供同行商榷。     

猪瘟病毒E2抗原在不同酶标板上包被效果的比较

为比较杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)E2抗原在不同酶标板上的包被效果,本研究应用2 Rg/mL的CSFV E2分别包被Nunc Maxisorp,Cosar StripWell和JET FEP-101-896 3种酶标板,以Flyer Liquid Plate Sealer(FLPS)进行封闭,通过比较猪瘟阳性血清的OD_450值,筛选包被性能最佳的酶标板.对FLPS、含10%FCS的PBST和含1 % BSA的PBST的封闭效果进行比较.并比较 FLPS在相同抗原条件下重复使用2次和3次对于CSFV阳性血清检测结果的影响.结果显示,在CSFV E_2抗原包被的3种酶标板上,CSFV阳性血清的OD_450nm,值均存在显著差异(p<0.05),其中以Cosar酶标板OD41,值最高;在Costar板上,3种封闭液间及FLPS重复使用对于CSFV阳性血清的检测结果无显著差异(p>0.05).     

猪瘟的临床与流行病学研究进展

猪瘟（Hog cholera,HC 或Classical Swine Fever,CSF）是对养猪业威胁最大的烈性传染病［1,2］，我国每年因猪瘟死亡的猪占病死猪的1/3以上；1993年后，一些已宣布消灭了猪瘟的国家和地区，如荷兰、瑞士、比利时、瑞典、德国、西班牙、英国等，又先后出现了猪瘟的复发。然而由于各种原因，自20世纪60年代以来，猪瘟在临床与流行病学特点上均已发生了很大的变化，而且这种变化是世界性的，并不局限于一时一地。此外，迄今为止虽然猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus,CSFV；或Hog Cholera Virus,HCV）还只有一个血清型，但用单克隆抗体（MAb）可以将CSFV区分为不同的毒株，而应用基因分析方法可将CSFV分为2个基因群5个亚群。     

分子生物学技术在感染性疾病诊断中的应用进展

近年来，随着分子生物学技术的发展，利用分子生物学技术诊断感染性疾病的病原日益受到瞩目，发展迅速。现从核苷酸、蛋白质和抗体三个方面论述分子生物学运用于诊断感染性疾病的研究进展。