边鸡MSTN基因C.234位点对生长性状的遗传效应分析

采用PCR-RFLP技术检测连续2个世代边鸡群体肌肉生长抑制素基因外显子1的多态性,分析了多态位点对边鸡生长性状的遗传效应。结果表明,边鸡MSTN基因的C.234位点存在多态性,在外显子1编码区的234bp处发生G→A的碱基突变,产生了GG、GA和AA 3种基因型。关联分析表明,无论是一世代还是二世代的边鸡群体,在6~16周龄时,AA和GA基因型边鸡的体质量均显著或极显著的高于GG基因型（P〈0.05或P〈0.01）。结果提示,MSTN基因外显子1的C.234位点突变对边鸡的生长性状具有显著的遗传效应,初步推断该位点可用于边鸡生长性状的标记辅助选择。     

京海黄鸡IL-6基因启动子区多态性的生物信息学分析

前炎性细胞因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)在许多慢性炎症和自身免疫性疾病的发病机制中起着至关重要的作用,尤其是炎症性肠病。为了从分子水平上探讨IL-6基因的表达调控,本研究以京海黄鸡(Gallus gallus)为素材,通过基因组DNA测序技术,检测IL-6基因上游-2 200 bp至下游500 bp区域中的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP),同时运用生物信息学软件预测IL-6基因核心启动子区转录因子以及CpG岛(CpG islands),分析所测SNPs以及该基因启动子区SNP突变前后转录因子和CpG岛的变化。测序结果表明,京海黄鸡中共检测到28个SNPs位点,其中位于5'调控区有19个,外显子区2个(均为同义突变),内含子区2个,3'区5个;在28个突变位点中,发现有4个为Gen Bank中未标注的SNPs,其中3个(G-357 A、C-447 G和A-663 G)位于5'调控区,1个位于3'区(C3177T)。生物信息学分析表明,有11个SNPs位于IL-6基因核心启动子区,并导致转录因子发生了改变;同时由于启动子区C-939G的突变,导致CpG岛区域由原来的3个变为2个,由此推测上述SNPs可能通过影响IL-6基因的启动子区转录因子以及甲基化区域的改变影响IL-6基因的表达调控。研究结果对进一步探讨IL-6基因的功能和作用,以及这些SNPs与鸡肠道炎症的抗性及生产性能的关系具有十分重要的意义。     

IGF-I与IGFBP-1基因对京海黄鸡生长性状的遗传效应分析

旨在对IGF-I和IGFBP-1基因部分SNPs与鸡生长性状进行关联分析。试验以京海黄鸡为材料,采用PCR-SSCP方法检测2个候选基因的单核苷酸多态性(SNPs),采用一般线性模型(GLM)分析基因型与生长性状的遗传效应。结果表明,IGF-I基因外显子3序列的60bp处有A→G的点突变,在京海黄鸡中检测到AA、AB、BB 3种基因型,A等位基因频率为0.613,B等位基因的频率为0.387;IGFBP-1基因外显子2序列的21bp处有A→T的点突变,104bp处有T→C的突变,在京海黄鸡中检测到CC、CD和DD 3种基因型,C等位基因频率为0.558,D等位基因频率为0.442。IGF-I基因BB基因型个体4周龄体质量显著高于AA和AB型个体(P<0.05);IGFBP-1基因DD基因型个体8周龄体质量显著高于CC基因型个体(P<0.05),4、12和16周龄体质量差异极显著(P<0.01)。因此,推测这些SNPs对京海黄鸡生长性状具有一定的影响,应用于鸡育种过程中的标记辅助选择可以加快育种进程。     

肌肉生长抑制素基因外显子3的多态性及其与边鸡繁殖性状的关联分析

本研究采用PCR-SSCP技术检测边鸡肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子3的单核苷酸多态性,并与边鸡的繁殖性状进行关联分析。结果表明:在外显子3检测到3个突变(C7 552T,C7 638T,T7 661A)。对于MYOE3-2引物,FG基因型的开产日龄极显著的早于FF基因型(P<0.01),FG基因型的300日龄产蛋数极显著高于FF基因型(P<0.01)。对于MYOE3-3引物,HI基因型的开产日龄显著早于HH基因型(P<0.05)。HI基因型的300日龄产蛋数极显著高于HH基因型(P<0.01)。3个SNPs位点共形成4种单倍型组合,单倍型组合分析表明,h1h4型的开产日龄显著早于h1h1型(P<0.05),h1h4型的产蛋数显著高于h1h1型(P<0.05)。研究结果提示,MSTN基因可能是影响边鸡繁殖性状的一个主效基因或是与之存在紧密遗传连锁的一个标记。     

氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在鸡肌肉中的残留消除规律

本试验旨在研究氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在鸡肌肉中的残留消除规律。鸡肌肉样品经丙酮、二氯甲烷提取,饱和正己烷脱脂,氮吹仪吹干浓缩后,以乙腈-磷酸二氢钠溶液(0.01mol.L-1,含0.005mol.L-1十二烷基硫酸钠和0.1%三乙胺)(体积比35∶65)为流动相,流速为1.0mL.min-1,在激发波长225nm、发射波长285nm处用高效液相色谱荧光检测器检测。结果:测得鸡肌肉中氟苯尼考、氟苯尼考胺的检测限分别为1.5和0.5μg.kg-1(S/N=3)、定量限分别为5和2μg.kg-1(S/N=10)。各试验组京海黄鸡分别按体质量以25.0、50.0和100.0mg.kg-1.d-1剂量给药,每天1次,连续5d内服给药后,休药第1天时,鸡肌肉中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的残留量均达到峰值,且残留量随给药剂量的增大而增大,随休药期的延长而降低。休药第7天时,鸡肌肉中氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺的总残留量均低于MRLs(100μg.kg-1);休药第11天时,鸡肌肉中氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺的总残留量均低于检测限;氟苯尼考、氟苯尼考胺在鸡肌肉中的残留量及其总残留量均与给药剂量呈正相关。     

边鸡IGF-ⅠR基因AluⅠ位点多态性及其对生长性状和繁殖性状的遗传效应分析

为了寻找与边鸡生长性状和繁殖性状相关的遗传标记,本试验采用PCR-RFLP技术检测边鸡类胰岛素生长因子Ⅰ受体（insulin-like growth factor Ⅰreceptor,IGF-ⅠR）基因Alu Ⅰ位点的多态性,并分析该多态位点对边鸡生长性状和繁殖性状的遗传效应。结果显示,边鸡IGF-ⅠR基因Alu Ⅰ位点存在多态性,在外显子2的376 bp处有1个G→A突变,产生了GG、GA和AA 3种基因型,基因型频率分别为0.687、0.296和0.017,GG为优势基因型;G等位基因频率为0.835,为优势等位基因。卡方适合性检验结果表明,该基因座位在边鸡群体中处于哈代-温伯格平衡状态（P>0.05）。相关分析结果表明,在8、14、16和18周龄时,GG基因型个体的体重显著高于GA基因型（P<0.05）,GG基因型个体的开产体重极显著高于GA基因型个体（P<0.01）,但并不能说明该位点可以作为影响边鸡繁殖性状的遗传标记。IGF-ⅠR基因外显子2的Alu Ⅰ位点（G→A）可能是影响边鸡生长性状的一个遗传标记。     

基于RNA-Seq技术的京海黄鸡卵巢组织转录本预测及新基因挖掘

鸡及许多物种的全基因组测序及相关基因图谱都已宣告完成,但由于注释方法的局限性,还存在许多遗漏的新基因及对现有基因的误差注释。RNA-Seq技术是基于第2代测序技术的转录组学研究方法,该研究利用高通量测序技术对8只（高产组4只、低产组4只）300日龄体重一致、饲养条件相同、产蛋数存在差异的京海黄鸡的卵巢组织所有RNA反转录而成的cDNA文库进行测序,通过分析RNA-Seq获得的京海黄鸡卵巢组织转录组数据,共发现4 431个新转录本,并将所有新转录本与GO、NR、Swiss-Prot、KEGG数据库进行比对和分析,发现了很多潜在的新基因并进行功能注释,为鸡基因组的进一步完善及功能基因的挖掘提供了数据基础。     

京海黄鸡Smad3基因多态性与生长性状的相关性研究

为探讨Smad3基因作为京海黄鸡生长性状遗传标记的可能性,本研究以京海黄鸡为研究对象,采用PCR-SSCP方法对Smad3基因的第6和第7外显子进行SNPs检测,并分析其对京海黄鸡生长性状的影响。结果表明:京海黄鸡Smad3基因中有2个位点存在多态性,即第6外显子第53424碱基的T/C转换和第7外显子第54959碱基的C/G颠换,分别命名为g.TC53424和g.CG54959;在g.TC53424位点形成AA和AB2种基因型,在g.CG54959位点形成TT、TM和MM 3种基因型;AB基因型个体8周龄体重显著高于AA基因型个体(P0.05),且AB型为优势基因型,基因型频率为0.533;而TT、TM和MM 3种基因型个体的各周龄体重差异均不显著(P0.05)。结果提示,检测到的Smad3基因单核苷酸突变对京海黄鸡生长性状有一定影响,但不适合作为京海黄鸡生长性状的有效遗传标记。     

京海黄鸡二系、三系杂交效果研究

为了提高京海黄鸡种质资源利用率,试验以京海黄鸡(JJ)为第一母本,与AA、FF系进行二系和三系杂交,测定后代AJ、FJ、F(AJ)和A(FJ)的1~9周龄体重、饲料报酬和成活率。结果表明:在所有杂交后代中,F(AJ)表现出了较好的生产性能,9周龄体重为1 724.75 g,成活率为97.02%,料重比为2.28。     

白羽王鸽胚胎期胸肌肌纤维发育规律及相关基因表达分析

实验旨在研究白羽王鸽胚胎期胸肌肌纤维发育规律，并分析肌纤维发育相关基因在胸肌发育过程中的表达变化规律。采集鸽不同孵化时间胸肌组织，利用石蜡切片技术研究胸肌肌纤维发育规律，利用RT-qPCR技术检测肌纤维发育相关基因在胸肌发育过程中的表达变化规律。结果显示，鸽肌纤维在12胚龄时仍处于成肌细胞增殖和分化的混合期，14胚龄时肌细胞融合程度进一步上升，16胚龄时肌细胞增殖和分化基本完成，至出雏时肌纤维已基本发育成熟。在鸽胚胎发育过程中，胸肌肌纤维直径逐渐增加，肌纤维密度呈现先增加后降低的趋势。基因表达结果显示，Myf6表达量随着胚龄的增加不断上升，至出雏达到最大表达量；MyoD呈现先下降后上升的趋势；MyoG表达呈现持续下降的表达趋势，至出雏达到最低表达量；MSTN 12～14胚龄表达量下降，14胚龄后显著回升，至出雏达到最大表达量。综上所述，本研究结果有助于深入理解鸽骨骼肌发育规律，为进一步研究白羽王鸽骨骼肌生长发育调控机理提供理论参考。