绵羊肺炎支原体P6058aa-928aa蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

【目的】 建立基于绵羊肺炎支原体表面脂蛋白P60的间接ELISA方法。【方法】 利用生物信息学软件对P60蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性最佳的区域,扩增目的基因后构建重组表达载体并进行基因测序,将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导抗原性最佳蛋白表达并进行诱导时间优化;利用SDS-PAGE分析该蛋白分子质量大小及其表达形式。以重组蛋白作为抗原,绵羊肺炎支原体阳性血清作为抗体,通过Western blotting方法分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立抗原性最佳蛋白的间接ELISA抗体检测方法,用该方法对20份阴性血清进行检测,计算阴阳临界值;检测该方法的特异性、敏感性和重复性,并用建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份绵羊临床血清样本进行检测。【结果】 经DNAStar分析,P60蛋白第58－928位氨基酸区域的平均抗原指数在0.8~1.7之间,亲水指数为0~2.0,证明该区域(P60_58aa-928aa)抗原性和亲水性较强;通过PCR扩增得到P60_58aa-928aa基因,并构建重组表达载体,通过基因测序证明该重组表达载体与预期结果一致。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导浓度为1 mmol/L,诱导10 h时蛋白表达量较高,蛋白分子质量为42 ku,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达;Western blotting结果表明,构建的重组蛋白具有良好的反应原性。对ELISA各条件进行优化结果显示:抗原包被浓度为0.5 μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶100,最佳孵育时间为1.5 h,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4 000,判定阴阳性血清的临界值为0.36。对口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、牛支原体(Mb)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)的标准阳性血清的检测均为阴性,证明该方法特异性较强;敏感性试验结果表明,血清稀释度为1∶2 048时仍为阳性;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均<10%,证明该方法具有较好的重复性。利用所建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份羊血清检测结果表明,二者的阳性符合率为81.6%,阴性符合率为92.6%,总符合率为88.0%。【结论】 本研究建立的间接ELISA方法可用于临床样本的检测,为绵羊肺炎支原体的疫苗免疫效果评价和疾病诊断提供了较为可靠的方法。     

养鸡场病毒性传染病的流行特点其防制措施

随着养鸡场工厂化、集约化的高速发展,以及愈来愈激烈的市场竞争,鸡病种类不断增多,流行特征及病理变化也发生了较大的变异,出现了鸡越养病越多、病越防越复杂的局面,给养鸡业造成了巨大的经济损失。目前,传染病仍然是危害养鸡业发展的大敌,约占鸡病发生总数的75％左右,其中病毒性传染病尤为突出。从资料上看,研究的重点主要集中在新     

口蹄疫O型灭活疫苗对不同母源抗体仔猪血清中抗体及细胞因子水平的影响

为了解不同母源抗体水平对仔猪免疫后抗体消长的影响,以及免疫后细胞因子的变化,使用口蹄疫O型灭活疫苗对40头初生仔猪进行免疫,并于初次免疫后28 d二次免疫,采用液相阻断ELISA方法检测血清中抗体滴度,双抗体夹心ELISA法检测血清IL-8和IL-12水平。结果显示,母源抗体水平越高对于初次免疫后仔猪抗体影响越大;二次免疫后抗体水平可长时间维持较高水平。初次免疫后14 d~28 d,血清中IL-8和IL-12水平上升极显著(P0.01);二次免疫后14~28 d,IL-8水平上升极显著(P0.01),IL-12水平上升不显著(P0.01)。试验表明,母源抗体水平是影响仔猪免疫后抗体消长的因素之一;口蹄疫O型灭活疫苗能有效提高血清中IL-8和IL-12水平。     

内蒙古部分牧区乳及乳制品中乳链球菌的分离及鉴定

本实验从内蒙古半荒漠草原带达茂联合旗和苏尼特右旗的牧民家庭中采集乳样，进行乳酸菌的分离和生物学特性的研究。从乳样中共分出４４株乳酸菌，其中乳链球菌２株，占分离总数的４．４％，乳脂链球菌１株，占分离总数的２．３％。所测试的菌株符合相应菌属和种的形态、染色特性和生化反应标准，同一种的不同菌株间的糖发酵试验有一定的差异。     

都尔伯特半荒漠草原牧区绵山羊乳及乳制品中乳杆菌的生物学特性的研究

本研究从都尔伯特半荒漠草原牧区牧民家庭采集62份样品中分离到34株乳杆菌对其中27株进行了种的鉴定。结果：干酪乳杆菌植物亚种（L.casei subsp.Plantarum)13株，格氏乳杆菌（L.gasseri)1株，植物乳杆菌（L.plantarum)10株，棒状乳杆菌棒状亚种（L.coryniformis subsp.coryniformis)1株，面包乳杆菌（L.panis)1株，弯曲乳杆菌（L.curvatus)1株。其中高温菌1株。     

清代文人绘画中的广府园林花事生活研究*

岭南地区独特的地理气候条件和社会风俗孕育了这里悠久的花事生活习俗与传统。广府文人作为花事活动的重要参与者,将花事活动融入园居生活的方方面面,这也影响了园林营建。运用图像学图文互证方法,对清代广府文人画作中描绘的花事活动内容与园林空间、园居生活的关系进行了分析：图像中主要包含了种花、赏花、插花、采花、绘花5种活动,这些活动结合了中国传统文人情趣和广府地方生活风俗,表现出雅俗共赏的特征。园林中的花事活动也与广府古典园林中的空间布局、构筑形态和植物种植方式互相影响,反映出岭南园林空间营造特色与园居活动、文化观念之间的密切关系。     

基于“言-象-意”关系的《楚辞》园林意境解译

《楚辞》是中国浪漫主义文学的源头和文学史上的瑰宝,描绘了楚国的人居环境和园林场景。基于“言-象-意”关系和意境心理发生机制,研究《楚辞》中的园林意境及其承载的思想内涵,分别对“大内御苑”“离宫苑囿”“贵族宅园”3类园林的场景意境解译,反映楚国园林“天人合一”,人本主义、浪漫主义、仙境的人居思想和君权至上的思想与情感。     

顺德清晖园荷池香景感知评价研究

聚焦岭南园林荷池香景营造,以顺德清晖园为例,采用香景漫步和问卷调查的方法,分析游人对荷香的感知评价,绘制香景地图,揭示荷香的空间分布特征及感知特征。从香景地图可见,清晖园荷香主要分布于澄漪亭一带及六角亭和绿湖红雾门附近,其中尤其以澄漪亭被感知荷香的频次最高,是荷香消夏的理想场所;从主观评价得出,大多数人喜爱荷香,认为其强度为弱,持续时长短,香气类型为清爽,对香景的感知受其经验记忆的影响。香景地图作为一种以人的感知为途径,将无形的香气进行可视化表达的记录与监测方式,可为古典园林遗产保护与遗产文化呈现提供新的视野和启发。