表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白的重组塞内卡病毒的构建与鉴定

A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原，与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构，所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗，用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫，以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础，在SVA 2A与2B基因之间插入O型FMDV的VP1基因，经双酶切及测序鉴定，成功获得了重组质粒pSVA-FMDV-VP1-O。将重组质粒转染BHK-21细胞，拯救获得重组病毒rSVA-FMDV-VP1-O,间接免疫荧光试验鉴定显示，该重组病毒可在细胞中表达O型FMDV的VP1蛋白。对该重组病毒进行体外生长增殖特性以及遗传稳定性分析表明，重组毒株和亲本毒株在BHK-21细胞上具有相似的增殖特性，插入的FMDV VP1基因可在细胞传代过程中稳定存在6代。研究结果为开发以塞内卡病毒为载体构建表达口蹄疫病毒VP1蛋白的重组基因工程活载体疫苗提供了参考。     

大麻秸秆栽培秀珍菇配方比较试验

以工业大麻秸秆为原料，筛选栽培秀珍菇最适配方，以开发大麻秸秆资源。结果表明，粉碎后大麻秸秆混合玉米芯发酵后栽培秀珍菇，不仅能降低生产成本、缩短出菇时间，还可提高秀珍菇产量，且出菇整齐；优选配方为配方1（大麻秸秆70%，棉籽壳10%，玉米芯10%，麸皮8%，石灰1%，石膏1%）。试验结果对提高工业大麻秸秆利用率，拓展秀珍菇生产原料来源，促进秸秆产业和食用菌产业协同发展具有一定指导意义。     

犬源H9N2亚型流感病毒的遗传进化及其致病性分析

【目的】明确犬源H9N2亚型流感病毒的分子变异特征及致病性,为今后探究流感病毒的禽—犬跨种传播机制提供科学依据。【方法】从流浪犬中分离H9N2亚型流感病毒,利用RT-PCR扩增其8个基因节段进行BLAST同源比对,然后基于国内外的22株参考毒株进行遗传进化分析,并通过小鼠滴鼻感染试验评估分离毒株的致病性。【结果】从采集的393份犬鼻拭子样品中分离获得1株H9N2亚型流感病毒,命名为A/canine/Guangxi/LZ11/2018(简写为LZ11)。分离毒株LZ11为三重组毒株,其中,HA、NA和NS基因属于BJ/94类谱系,PB2和M基因属于G1类谱系,PB1、PA和NP基因属于F/98类谱系;病毒基因组成属于近年我国广泛流行的S基因型。分离毒株LZ11的HA蛋白在第324~331位存在1个裂解位点(PSRSSR↓GL),符合低致病性流感病毒的特征;HA蛋白还出现226Q→L突变,具有优先结合人类α-2,6唾液酸受体的能力;NA蛋白在119E、151D、276E、292R和294N未发生突变,但M2蛋白出现31S→N突变,说明分离毒株LZ11仍对神经氨酸酶抑制剂敏感,但已对金刚烷胺类药物产生耐药性;聚合酶蛋白出现多个哺乳动物适应性相关的氨基酸位点突变,包括PB2蛋白的292I→V、PB1蛋白的368I→V及PA蛋白的409S→N和356K→R。分离毒株LZ11虽然未引起小鼠出现典型的临床症状,但可在肺脏和上鼻窦有效复制,病毒滴度分别为3.82和5.98 lg PFU/mL。【结论】分离获得的犬源H9N2亚型流感病毒属于近年流行的S基因型,其8个基因节段分属于3种谱系(BJ/94类谱系、G1类谱系和F/98类谱系),且存在多个哺乳动物适应性相关氨基酸位点突变,具备感染哺乳动物的分子特征,可在小鼠脏器内有效复制。鉴于人类与宠物犬的密切关系,今后应加强对犬源H9N2亚型流感病毒的监测与防控。     

凤梨释迦低产园改造技术研究初报

针对广西早期引进的凤梨释迦老龄果树存在低产、裂果、果品不佳等问题,重点通过树形改造和产期调节技术,对十年生以上凤梨释迦大树进行了低产改造试验研究。研究结果实现了老龄树形结构优化,促进树冠透风透光,均衡树体营养供应,为轻简化栽培管理提供了便利;结合人工授粉和产期调节,显著提高了坐果率、改善果品质量,提高单产。本改造技术实施对提升凤梨释迦老果园产量和品质以及生产效益具有重要指导意义。     

马铃薯PYL基因家族的全基因组鉴定及表达分析

作为关键信号分子,脱落酸(ABA)通过其核心信号通路PYLs-PP2Cs-SnRK2s广泛调控植物的生长发育和逆境响应过程,PYLs蛋白作为ABA信号传导的核心组件,在ABA信号传导中发挥着不可替代的作用。为探究PYLs (PYR/PYL/RCARs)基因在马铃薯中的进化以及表达模式,本研究从马铃薯全基因组‘DM-v 6.1’共鉴定到17个StPYLs基因,并对其分布、蛋白理化性质、系统进化、基因结构特征以及基因表达模式进行了分析。结果表明,17个StPYLs基因不均匀分布在8条染色体上,其氨基酸大小在163～231aa之间,等电点在4.5～8.6之间,相对分子量在18.71～25.29 kD之间。根据基因结构和蛋白的系统发育特征, StPYL家族成员共分为3个亚组, motif 1存在于本家族所有基因中,说明它在StPYLs的进化过程中较为保守。基因表达模式分析表明,StPYL家族成员具有明显的组织表达特异性,且除StPYL1在外源激素(BAP、ABA和IAA)和非生物胁迫(高温、盐和干旱)下均上调表达外,其余基因存在功能分化,不同胁迫下的表达模式各异。本研究结果为进一步阐明StPY...     

不同蛋白酶酶解制备鸡肉小肽的工艺条件研究

本研究拟制备2 ～ 3个氨基酸组成的鸡肉小肽，为鸡肉深加工和综合利用提供科学的方法和依据。试验采用4因素3水平正交试验设计，通过对中性蛋白酶和酸性蛋白酶的酶用量、时间、料液比、温度4个因素条件进行研究，确定最佳的鸡肉酶解小肽的工艺条件。结果表明：不同蛋白酶的酶解工艺条件对总氮（T-N）、游离氮（A-N）、水解度（DH）、氮回收率（NR）、平均肽链长度（APL）、肽平均分子质量（APM）指标均有影响。对各指标进行极差分析可知，酸性蛋白酶的酶解时间是决定DH、NR、APL和APM的主要影响因素|中性蛋白酶的酶解时间是决定DH、APL和APM的主要影响因素，而料液比是决定NR的主要影响因素。中性蛋白酶的酶解效果优于酸性蛋白酶，中性蛋白酶酶解2 ~ 3个氨基酸为主的最优酶解工艺条件为：酶用量1000 U/g，温度56 ℃，水解8 h，料液比1:2。 [关键词] 中性蛋白酶|酸性蛋白酶|酶解|鸡肉小肽|工艺条件     

不同砧木对凤梨释迦嫁接愈合及幼苗生长特性的影响

为掌握凤梨释迦砧穗组合的嫁接愈合情况，以期为种苗后续移栽防护工作提供重要参考价值。试验以普通番荔枝、牛心梨和冷子番荔枝为砧木，‘吉夫纳’凤梨释迦为接穗，通过观察不同时期供试砧穗组合的嫁接口解剖结构，同时比较苗期植株嫁接成活率及接穗生长势、相关生理变化等情况。结果表明：供试砧穗组合的嫁接成活率均达到80.00 %以上，其中牛心梨与冷子番荔枝砧木的接穗枝梢生长势分别显著高于普通番荔枝。嫁接50d后，砧穗组合接口出现愈伤组织，砧穗间韧皮部开始融合；嫁接150 d后，砧穗组合的可溶性蛋白与可溶性糖含量差异逐渐变小，砧穗接口木质部与新生部位韧皮部紧密连接，其中冷子番荔枝砧木砧穗间的木质部已完全融合；嫁接300 d后，砧穗组合嫁接口完全达到愈合程度。综合各项指标来看，冷子番荔枝砧木的嫁接愈合速率高于普通番荔枝和牛心梨砧木，嫁接150 d后的接口愈合程度已趋于稳定。     

伽师瓜和86-1甜瓜几丁质酶基因的克隆与序列分析

以新疆主产不同耐藏性的甜瓜品种伽师瓜(耐藏性好)和86-1甜瓜(新密11号,耐藏性差)为试料,利用甜瓜基因组辅助设计引物克隆几丁质酶基因的c DNA序列,分别对其编码序列(CDS)及编码氨基酸进行相关生物信息学的预测分析,以期通过研究二者之间基因的差异揭示伽师瓜和86-1甜瓜采后不同耐藏性的机制。结果表明,获得的伽师瓜几丁质酶基因(Jia Shi Melon chitinase,JSMC2),NCBI检索号为KT921406;86-1甜瓜几丁质酶基因(Xin Mi-11 melon chitinase,XMMC),NCBI检索号为KU236388。JSMC2和XMMC序列长度均为1 011 bp,包含完整的开放阅读框,编码336个氨基酸,与黄瓜几丁质酶基因具有高度的同源性。蛋白结构域预测分析表明,甜瓜几丁质酶蛋白包含GH18_hevamine_Xip I_class_Ⅲ、Chi1、GH18_chitinase-like super family、Glyco-hydro-18和Glyco_18保守结构域,可催化几丁质水解成N-乙酰葡糖胺,分解真菌细胞的细胞壁,抵御病原真菌的侵染。     

化学发光光纤免疫传感器的研制及其对谷物中呕吐毒素的快速检测

为实现谷物中呕吐毒素（deoxynivalenol，DON）的快速、灵敏检测，采用生物传感和化学发光技术相结合的方式，研制应用于现场快速检测谷物中呕吐毒素的化学发光光纤免疫传感器，并搭建用于化学发光信号检测的便携式传感平台。整个检测平台集成到一个32 cm×15 cm×25 cm的黑色避光盒中，质量小于3 kg。结果显示：所研制的化学发光光纤免疫传感器在0.1~1 200 ng/mL呈现出良好的线性关系，检出限为62.7 pg/mL；功能化的光纤探针能够稳定保存30 d且具有良好的特异性和抗干扰性；其应用于谷物样品的呕吐毒素检测回收率为81.00%~107.33%，相对标准偏差小于8.69%。结果表明，该方法较ELISA法的灵敏度提高了30倍，线性范围拓宽了3个数量级，适合应用于谷物样品中呕吐毒素的现场快速检测。