芒果炭疽病菌内切葡聚糖酶基因CgEg1B的克隆与敲除载体构建

芒果炭疽病（Colletotrichum gloeosporioides）是为害芒果的重要病害之一，为了明确内切葡聚糖酶CgEg1B与芒果炭疽病菌致病力的关系，本实验以芒果炭疽病菌DNA为模板，利用同源克隆技术扩增CgEg1B，对其序列特征、蛋白的保守结构域进行分析，并借助In-Fusion?HD Cloning Kit技术进行敲除载体构建。结果表明，该基因DNA和cDNA全长分别为1077 bp、1020bp，编码区有1个内含子（大小为57bp），推测编码339个氨基酸，其分子量约为37.13 kDa，等电点PI为5.11。与NCBI网站中已公布的基因进行Blastp比对，发现该序列与鳄梨炭疽菌（C.gloeosporioides）（EQB54542.1）的内切葡聚糖酶基因相似性均为99%；该基因的敲除载体pCgEg1BGH-1构建成功。CgEg1B基因具备真菌内切葡聚糖酶基因家族的序列特征，推测CgEg1B基因可能与芒果炭疽病菌的侵入、定植和致病性有关。     

珍稀植物浙江七子花炭疽病病原菌的分离和鉴定

炭疽病是浙江七子花(Heptacodium miconioides subsp.jasminoides)的重要病害之一，该病的发生严重影响植株生长，并威胁该珍稀物种的生存。为明确引起浙江七子花炭疽病病原菌的种类，以病叶为材料，采用组织分离法获得病原真菌，在确定致病性的基础上，利用形态学和多基因联合法对炭疽病病原菌进行鉴定。结果表明，从叶片中共分离到3个菌株，经柯赫氏法则验证，证实仅1个菌株(QZH)能引起炭疽病；病原菌的形态特征与果生刺盘孢菌(Colletotrichum fructicola)一致。多基因联合分析结果显示，菌株QZH与果生刺盘孢菌在系统发育树上聚为一支，并具有较高的支持率。综合形态学特征与多基因鉴定鉴定结果，确定引起浙江七子花炭疽病的病原菌为果生刺盘孢菌。浙江七子花炭疽病病原菌的分离与鉴定为后续开展该病害的有效防治和致病机理研究提供了基础。     

福建李叶斑病病原菌种类鉴定及致病性研究北大核心CSCD

【目的】鉴定明确近年在福建新发生的李叶斑病的病原菌种类。【方法】采集李叶斑病叶进行组织分离,对获得的菌株采用形态学和分子生物学相结合的方法进行种类鉴定和致病性研究。【结果】通过组织分离和纯化,并根据菌落形态特征共获得66个刺盘孢属(Colletotrichum)菌株。对这些菌株进行形态学观察和多基因(ACT、TUB2、CHS-1、GAPDH及ITS)系统发育分析的结果显示,它们分别归属于刺盘孢属的6个种,包括果生刺盘孢(C.fructicola)59个菌株、喀斯特刺盘孢(C.karstii)2个菌株、普洛柏刺盘孢(C.plurivorum)2个菌株、暹罗刺盘孢(C.siamense)1个菌株、无锡刺盘孢(C.wuxiense)1个菌株和李刺盘孢(C.pruni-salicinae)1个菌株,其中李刺盘孢(C.pruni-salicinae)为笔者鉴定出的1个新种。分离鉴定的6种刺盘孢的代表菌株,有伤接种结果显示它们均可使李叶片和果实致病,但其致病力明显不同,它们对桃、梨、柑橘和猕猴桃的致病也存在显著差异。【结论】引起福建李叶斑病的病原菌有果生刺盘孢、喀斯特刺盘孢、普洛柏刺盘孢、暹罗刺盘孢、无锡刺盘孢和李刺盘孢6种,其中果生刺盘孢(C.fructicola)为优势种,占刺分离获得的盘孢属(Colletotrichum)菌株的89.4%。不同刺盘孢菌的致病性存在明显差异。     

半边红李炭疽病病害调查及病原菌鉴定

探明绥江半边红李炭疽病为害程度及病原菌的种类,可为李树炭疽病的防控提供依据。以绥江县2个主要种植区会仪镇和新滩镇的6个半边红李果园为研究对象,对炭疽病为害状况进行了调查,并对炭疽病原菌进行分离保存;利用病原菌分生孢子形态及核糖体ITS序列对绥江半边红李树炭疽病致病菌进行了种类鉴定和分析。病害调查表明,新滩镇比会仪镇的危害程度严重。单孢分离获得15株分离株,各分离株平板菌落形态略有差异,获得4类不同的分生孢子,经回接验证均致病。rDNA ITS序列系统进化分析初步推定半边红李炭疽病的病原菌为胶孢炭疽复合群(Colletotrichum gloeosporioides species complex)和暹罗炭疽复合群C. siamense species complex。该研究探查了半边红李炭疽病的为害状况,获得了李炭疽菌的单胞分离菌株,初步鉴定了半边红李炭疽菌归属的复合群。     

芽胞杆菌SM905的鉴定及其对铁皮石斛胶孢炭疽菌的抑菌活性研究

芽胞杆菌Bacillus sp.SM905是本实验室分离并保存的一株活性细菌，为进一步明确其分类地位及其对铁皮石斛胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides的抑菌活性，利用形态学、生理生化特性及16S rDNA和gyrB序列分析对SM905进行种属鉴定；采用菌丝生长速率法、插片法和琼脂平板法测定了不同浓度的SM905发酵上清液对靶标菌菌丝生长和孢子萌发的影响；并通过盆栽试验考察其防效。结果表明，SM905为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。不同稀释倍数的SM905发酵上清液对胶孢炭疽菌均有一定的抑制作用，其中5倍稀释液对菌丝生长的抑制率最高，为97.89%，20倍稀释液的抑制率也达90%左右。处理组残留胶孢炭疽菌气生菌丝表现为畸形、空洞、色素积累等，基内菌丝产生大量的分生孢子。SM905发酵上清液不影响胶孢炭疽菌孢子的萌发率，但是导致萌发后的菌丝生长稀疏、膨大。盆栽试验结果表明，SM905粉剂100倍液间隔7 d喷施2次对铁皮石斛炭疽病的防效为80.74%，优于10%苯醚甲环唑水分散粒剂800倍液。本研究表明，芽胞杆菌SM905可以作为铁皮石斛炭疽病生物防治用生防菌，具有良好的应用前景。     

菜用大豆炭疽病病原菌的分离鉴定与防治

炭疽病是菜用大豆生产上发生的常见真菌性病害,破坏力强,发病时在豆荚表面形成黑色斑点,严重影响鲜荚外观商品性和品质,已成为我国菜用大豆生产上面临的主要问题之一。为明确浙江省菜用大豆炭疽病病原菌的种类,本文对采集的菜用大豆炭疽病样本进行分离纯化培养,基于柯赫氏法则分离到引起菜用大豆炭疽病的病原菌,并通过病原菌的菌落形态特征结合其rDNA-ITS区域的序列分析对病原菌进行种类鉴定。结果表明,造成浙江省菜用大豆炭疽病的主要病原菌为平头炭疽菌(Colletotrichum truncatum)和胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。为筛选可以用于防控菜用大豆炭疽病的杀菌剂,测定了分离得到的病原菌平头炭疽菌Cts18和胶孢炭疽菌Cts22对生产中常用杀菌剂多菌灵和戊唑醇的敏感性,发现多菌灵对Cts18、Cts22的抑制中浓度(EC₅₀)分别为2.13 μg·mL^-1和96.12 μg·mL^-1,戊唑醇对Cts18、Cts22的EC₅₀分别为0.27 μg·mL^-1和0.63 μg·mL^-1。结果表明,平头炭疽菌Cts18相比胶孢炭疽菌Cts22对多菌灵和戊唑醇更加敏感,其中戊唑醇可作为生产中防控菜用大豆炭疽病的杀菌剂之一。     

吉林白城与内蒙古开鲁辣椒白皮病病原鉴定及生防菌筛选

【目的】明确吉林白城和内蒙古开鲁辣椒白皮病病原，并从辣椒根际土壤中筛选对该病原菌具有良好防效的生防菌，为辣椒白皮病的诊断和绿色防控提供参考。【方法】从吉林白城和内蒙古开鲁辣椒产区，采集表现“白皮”症状的辣椒果实及其根际土壤样品，采用组织分离法分离纯化病原菌，果实接种法验证分离病原菌的致病性，通过形态学结合ITS-ACT-TUB-CHS-GAPDH-HIS3多基因联合法对分离的致病菌进行鉴定。利用逐级稀释法分离辣椒根际土壤样品中的放线菌，用离体结合活体测定法筛选对分离病原菌有显著拮抗活性的生防菌，并采用形态学、培养特性和分子序列相结合的方法对筛选的生防菌株进行鉴定。【结果】从吉林白城和内蒙古开鲁辣椒样品中分离得到25株真菌，其中有6株真菌在致病性测定中表现出典型的白皮病症状，分别为LJ1、LJ2、LJ3、LJ4、LJ5和KLLJ9，形态学结合多基因联合确定分离的病原菌均为斯高维尔炭疽菌（Colletotrichum scovillei）。以斯高维尔炭疽菌LJ1为供试靶标菌，从辣椒根际土壤中分离到1株拮抗放线菌SLJ2-2，其能有效抑制斯高维尔炭疽菌LJ1的感染和扩展，喷施3次SLJ2-2发酵上清液后对斯高维尔炭疽菌LJ1的抑制率达到95.53%，结合形态学、培养特性和分子生物学方法将SLJ2-2鉴定为微黄白链霉菌（Streptomyces albidoflavus）。【结论】吉林白城和内蒙古开鲁地区辣椒白皮病主要由斯高维尔炭疽菌侵染引起，从辣椒根际土壤中筛选出的微黄白链霉菌能有效抑制该病原菌的感染及其在辣椒上的扩展。     

山茶炭疽菌对茶树的致病性及其对杀菌剂的敏感性研究

山茶炭疽菌（Colletotrichum camelliae）是引起茶树叶部病害的优势致病菌。从中国13个产茶省的茶树病叶中分离获得65株炭疽菌菌株，基于多基因系统发育树，结合菌落和分生孢子形态特征，对分离菌株进行鉴定，结果表明，分离菌株均属于山茶炭疽菌。采用离体叶片接种的方法进行致病力测试，结果显示，所有菌株均能导致茶树叶片发病，但不同菌株间的致病力存在显著差异。YCW1180、YCW1331、YCW1382、YCW1387、YCW1419、YCW1443、YCW1451、YCW1453、YCW1454、YCW1461、YCW1613和YCW2134等12个菌株致病力显著强于其他菌株，菌株YCW1378致病力最弱。采用菌落生长速率法测试65个山茶炭疽菌菌株对25%吡唑醚菌酯的敏感性，药剂敏感性结果显示，25%吡唑醚菌酯对菌株YCW1436的菌丝生长抑制率仅为36.00%，抑菌效果最差，而对大部分菌株的抑制率高于70.00%，表明大部分菌株对该药剂高度敏感。显微镜观察结果显示，25%吡唑醚菌酯影响了山茶炭疽菌分生孢子的萌发。以上研究结果为有效防治茶树叶部病害提供了理论基础。     

富贵草叶斑病病原的鉴定

2019年5月,在湖南长沙地区富贵草上发生了一种不明原因的叶部病害,对其进行病原菌分离、形态学鉴定和科赫氏法则验证,并通过对核糖体转录间区rDNA(ITS)、肌动蛋白基因(ACT)、几丁质合成酶1基因(CHS1)和甘油醛–3–磷酸脱氢酶基因(GAPDH)序列的系统进化树分析,对病原菌进行分子鉴定,确定病原菌为冬麦刺盘孢...