猪cGAS基因的克隆与原核表达

【目的】环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase, cGAS)是近期在哺乳动物细胞中发现的一种新型核酸转移酶,能够识别胞质DNA,催化ATP和GTP生成第二信使cGAMP,继而通过STING依赖的方式活化转录因子IRF3,启动机体固有免疫。通过构建含猪cGAS基因的重组质粒pBbB3a-His6-NusA-cGAS,进行原核表达,得到cGAS蛋白,为进行体外催化合成cGAMP及探讨其在天然免疫过程中的作用奠定基础。【方法】以猪脾脏cDNA为模板克隆猪cGAS的蛋白编码区 (open reading frame, ORF),用非酶连接技术将此基因克隆至丙酸诱导型原核表达载体pBbB3a-His6-NusA-LIC中。菌液PCR进行阳性克隆鉴定并测序。将测序鉴定正确的克隆菌液提取质粒,转化至E.coli BL21 (DE3)中。当细菌生长到对数期时,丙酸钠诱导表达His6-NusA-cGAS融合蛋白,用20 mmol·L^-1丙酸钠在20℃,180 r/min分别诱导0, 2, 4, 6, 8, 10 h,以确定最佳诱导时间;然后,分别用0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 mmol·L^-1的丙酸钠在20℃,180 r/min诱导6 h,以确定最佳诱导丙酸钠诱导浓度;另外,分别在20℃,30℃,37℃条件下用20 mmol·L^-1丙酸钠,180 r/min培养6 h,以确定最佳诱导温度。筛选最佳诱导条件,并用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。【结果】（1）本试验成功克隆了猪cGAS基因,其ORF长度为1 494 bp;（2）构建了cGAS丙酸诱导型原核表达载体pBbB3a-His6-NusA-cGAS;（3）His6-NusA-cGAS融合蛋白在37℃,添加20 mmol·L^-1丙酸钠,诱导6 h时表达量最高。（4）His6-NusA-cGAS融合蛋白在裂解菌液的上清和沉淀中均有表达,相对分子质量为111.87 kD。【结论】运用大肠杆菌表达系统成功表达了cGAS融合蛋白,本试验为体外表达cGAS融合蛋白提供技术方法。     

四川盆周山区农业产业时空特征及影响因素分析——以广元市为例

研究农业产业时空特征为协调推进四川省落实"四个全面"战略布局提供科学依据,对国家精准扶贫核心区的农业产业结构调整、农民脱贫致富具有重大意义。重点对广元市农业产业特征进行定量分析,并借助PCA法探讨其影响因素。广元市农业占地区生产总值的比重逐步下降,三次产业结构不断优化,与全国、全省相比,农业占比优势凸显,但三次产业结构发展仍不合理。广元市农业产业结构状况与该市各区县农业产业结构的同构性较弱,互补性较强,农业产业结构具有较大的整合空间。影响该市农业产业现状的因素是农业机械、社会经济和人口结构。提出完善农业基础条件、创新农业科技、转变农业经营模式、建立农业产业市场体系的对策建议。     

新型复合肥在黑龙江省水稻生产中的应用效果

为了更好地评价新型肥料在黑龙江省水稻生产中的施用效果,利用大田区域联合试验的方法,通过将新型复合肥与常规肥料进行对比,研究新型复合肥的施用对不同积温带水稻生长发育及产量的影响。结果表明:施用复合肥处理较常规对照在佳木斯增产4.08%,在哈尔滨减产7.49%,且差异显著,在二九一农场减产5.18%。由于有效穗数和每穗粒数下降引起减产,每穗粒数和千粒重增加导致增产。在成熟期,施用新型复合肥使佳木斯的干物质增加5.15%,而哈尔滨和二九一农场的干物质分别下降4.95%和3.89%。与常规对照相比,复合肥处理使佳木斯的氮肥偏生产力增加4.08%,而哈尔滨和二九一农场的氮肥偏生产力分别降低7.49%和5.18%。表明,该新型复合肥在黑龙江省不同水稻种植区域的应用效果存在一定差异。     

基于Radarsat-2和环境星的淮河流域冬小麦估产模型比较研究

建立基于微波和光学卫星影像的农作物估产模型,可对上报作物产量准确性及估产模型精度进行相互验证.应用2014年4月中旬和5月初星载合成孔径雷达(SAR)——RADARSAT-2和同期HJ影像各两幅,选择安徽省寿县和怀远县冬小麦产区,通过试验田产量和反演的雷达影像后向散射系数,以及从环境星计算得到的归一化植被指数(NDVI),建立冬小麦线性估产模型,在此基础上对估产模型精度进行比较:通过星载SAR的同极化HH和交叉极化HV方式建立的估产模型对寿县涧沟镇冬小麦估产精度分别为68.37％和74.01％,对怀远县龙亢镇冬小麦估产精度分别为63.10％和69.10％;通过HJ星建立的估产模型对寿县涧沟镇和怀远县龙亢镇冬小麦估产精度分别为69.52％和66.43％.基于HJ星影像得到的冬小麦估产模型精度和基于SAR得到的估产模型精度接近.模型结果为上报产量准确性、冬小麦估产模型验证、参数纠正及推广奠定基础和积累经验.     

野菊多糖对白术土传病害的防效试验

本文研究了野菊多糖对白术土传病害的防治效果,试验分为温室盆栽试验和大田试验两部分。温室盆栽试验表明,0.2、2和20 mg/mL的野菊多糖药剂在药后10 d对白术土传病害的防控效果分别为6.277%、83.863%和71.839%;田间试验表明,0.4、2和20 mg/mL的野菊多糖药剂在用药后60 d对白术土传病害的防效分别达到57.836%、74.925%和82.470%,其中2和20 mg/mL的野菊多糖药剂对白术病害的防效显著高于常用药剂百菌清。同时野菊多糖对田间白术有较好的促生作用,0.4、2和20 mg/mL的野菊多糖药剂分别比百菌清药剂组单位面积产量增产了17.647%、14.706%和32.353%。     

浅谈经济管理类专业教育的发展思路

在高等职业技术教育中，经济管理类专业以它对社会生产的作用表现出重要意义，经济管理类专业对实践性教学环节有特殊的要求。目前在教学实践中，对专业的实践性教学多流于形式，使得该类专业的毕业生偏离了高职教育的目标。本文通过考察分析，就如何为高职学生提供实践教学环境，如何加强实践性教学做了相关的总结。     

“紫曼”搜爆排除虚假信息

2009年1月15日16时许,河南省许昌市公安局110指挥中心的电话骤然响起,一自称李某的男子在电话中称:其已在长葛市石象乡其女友家房后埋下30公     

数据库技术探讨

如何充分利用有限的存储空间，提高嵌入式数据库的存储空间利用率一直是倍受关注的研究课题。介绍了嵌入式数据库中比较有代表意义的索引机制以及它们的优缺点，分析了B＋树索引机制的实现思想及其优缺点，实现了一种改进的索引机制B#树索引机制。B#树索引机制能在多消耗少量时间基础上，较大提高了嵌入式数据库的存储空间利用率。     

水稻旱育秧田立枯病防治措施的初步探讨

榆林地区倒春寒严重,水稻育秧期间气温低而不稳,致使＂立枯病＂对秧苗危害极为严重,每年因＂立枯病＂造成秧苗损失达20%以上,而且,都是被动防治,使生产成本增加,所以,通过对不同药剂对比试验,从中筛选出一种具有保水抗旱、防病治虫、壮苗壮根、保蘖、省工、节本、增产的理想药剂。