激光扫描共聚焦显微镜检测Fluo-3 AM 负载大鼠心肌微血管内皮细胞最佳浓度和时间的探讨

为了探讨 Ca2+荧光探针 Fluo-3 AM 对大鼠心肌微血管内皮细胞(Rat Myocardial Microvascular Endothelial Cells RMMECs)最佳装载浓度和时间。将 Fluo-3 AM 分别稀释成1、2、3、4、5μM/L,每一浓度的探针分别装载细胞5、10、15、20 min,应用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内荧光信号的强度、位置、装载探针后细胞的形态来观察装载效果。结果表明：1～3μM/L的Fluo-3AM负载5~20 min均不出现荧光信号;4μM/L 的 Fluo-3AM 负载5~10 min 时即出现荧光信号;5μM/L 的 Fluo-3 AM 孵育细胞15 min后出现清晰且分布均匀的荧光信号。Fluo-3AM对贴壁生长的RMMECs负载效果主要受探针浓度和负载时间的影响。     

正交设计法优选芪参口服液提取工艺

为研究芪参口服液的最佳水提工艺,选用L9(34)进行正交试验设计,以干膏率和高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定的黄芪甲苷含量为考察指标,煎煮时间、煎煮次数和加水量为提取工艺的考察因素,对芪参口服液的提取工艺进行优选.结果表明,煎煮时间和煎煮次数对工艺有极显著影响,而加水量对工艺无显著性影响,故确定芪参口服液最佳煎煮条件为加水量10倍,煎煮3次,每次1h.该制备工艺操作可行,质量可控,适合工业生产.     

淫羊藿苷对辐射损伤小鼠保护作用研究

目的：探讨淫羊藿苷（ICA）对辐射损伤小鼠的保护作用。方法：将50只昆明小鼠按体重随机分为5组,3个剂量组分别按20、80、160 mg/kg体质量给小鼠灌服淫羊藿苷水溶液,正常对照组和照射对照组给予同体积生理盐水,1次/d,连续灌胃16 d。第6天照射对照组和3个剂量组小鼠用5.0 Gy60Co-γ射线进行单次全身照射。照射后第10天检测小鼠的血液学指标、脏器系数及MDA含量、SOD和GSH-Px活性。结果：与照射对照组比较,高剂量组的白细胞和GSH-Px活性显著增加（P〈0.05）,3个剂量组的血小板显著升高（P〈0.05）,SOD含量显著降低（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷对小鼠辐射造成的损伤具有保护作用。     

芪参口服液对免疫功能低下小鼠的保护作用

为探讨芪参口服液对免疫力低下小鼠的保护作用,用环磷酰胺造小鼠免疫力低下模型,同时灌胃给芪参口服液,分别测定小鼠的胸腺系数、脾脏系数、血清溶血素水平、血清IL-2含量和网状内皮细胞的吞噬能力。结果显示：芪参口服液能够显著增加免疫功能低下小鼠的胸腺系数和脾脏系数,显著增强其血清溶血素生成水平和网状内皮细胞的吞噬能力(P<0.01)。表明芪参口服液对免疫功能低下小鼠具有保护作用。     

五种中药有效成分诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-γ的研究

为了探讨抗病毒中药有效成分能否诱导肠黏膜微血管内皮细胞(IMMVECs)表达IFN-γ,本实验采用双夹心ELISA方法检测了穿心莲内酯、人参皂苷Rb1、苦参碱、绿原酸和甘草次酸等5种中药有效成分对体外培养的大鼠IMMVECs表达IFN-γ的影响。结果表明：一定浓度的穿心莲内酯、人参皂苷Rb1、苦参碱、绿原酸和甘草次酸均可以诱导大鼠IMMVECs表达IFN-γ,与空白对照组相比都具有极显著意义(P<0.01)。在同一个时间段内, 5.0 mg/L穿心莲内酯组IFN-γ的表达量高于10.0 mg/L穿心莲内酯组,20.0 mg/L人参皂苷Rb1组IFN-γ的表达量高于40.0 mg/L人参皂苷Rb1组,20.0 mg/L苦参碱组IFN-γ表达量高于40.0 mg/L 苦参碱组,5.0 mg/L 绿原酸组IFN-γ的表达量高于10.0 mg/L绿原酸组,5.0 mg/L甘草次酸组IFN-γ的表达量均高于10.0 mg/L甘草次酸。本结果提示：穿心莲内酯、人参皂苷Rb1、苦参碱、绿原酸和甘草次酸均可以激活MVECs诱生IFN-γ,而IFN-γ的表达可能与中药的抗病毒作用有直接或间接的关系。     

小檗碱对LPS诱导白细胞跨内皮迁移的影响

为探明小檗碱对脂多糖（LPS）诱导外周血多形核白细胞（polymorphonuclear leukocytes,PMN）跨内皮细胞迁移（transendothelial migration,TEM）的影响。通过体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞,利用Tran-swell培养系统模拟内皮屏障,观察1μg/mL LPS刺激及5μg/mL小檗碱干预时,6 h后穿越内皮屏障PMN数量的变化。结果显示,LPS致炎诱导了PMN的TEM增加,小檗碱干预则能显著抑制LPS的诱导作用。试验表明,抑制PMN的TEM是小檗碱治疗LPS性炎症的机制之一。     

黄芩苷、连翘酯苷对肺微血管内皮细胞分泌IFN-α、IFN-γ的影响

为了研究黄芩苷、连翘酯苷对大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs）分泌IFN-α、IFN-γ的影响,本试验以体外培养的PMVECs为模型,用ELISA法检测这2种中药成分在不同浓度、不同时间点诱导PMVECs分泌IFN-α和IFN-γ的量。结果表明,黄芩苷在10 μg/mL,24 h时诱导PMVECs分泌的IFN-α和IFN-γ的量均最高,连翘酯苷分别在20 μg/mL、12 h时和5 μg/mL、24 h时诱导PMVECs分泌的IFN-α和IFN-γ的量最高。这一结果为体外筛选诱导PMVECs表达干扰素的中药成分提供了参考,为进一步研究中药成分的抗病毒机理奠定了基础。     

硫酸软骨素对大鼠心肌膜微血管内皮细胞分泌IFN-γ的影响

研究硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)对微血管内皮细胞(MVECs)分泌IFN-γ的影响,为进一步研究CS的免疫增强机制提供资料。体外培养大鼠心肌膜微血管内皮细胞(RMMVECs),CS分为10、50、500 μg/mL 3个浓度组刺激RMMVECs,ELISA法检测药物处理后细胞上清液中IFN-γ的含量。结果显示,RMMVECs正常情况下能够分泌一定量的IFN-γ,经CS处理后IFN-γ的分泌量显著升高,且3个剂量组在刺激后24 h分泌量均达到峰值。结果表明,CS诱导大鼠心肌膜微血管内皮细胞分泌IFN-γ可能是其免疫增强作用机制之一。     

黄芪多糖对大鼠心肌膜微血管内皮细胞免疫相关分子表达的影响

黄芪多糖(astragalus polysaccharide, APS)是黄芪的主要活性成分之一,具有增强机体的免疫功能,对特异性免疫和非特异性免疫均有促进作用.近年来,微血管内皮细胞(MVECs)越来越受到关注,它不仅在炎症和免疫应答方面具有十分重要的作用,而且作为一种抗原呈递细胞,可向T细胞呈递抗原[1],激活后还可以表达或上调表达多种免疫功能相关分子[2],并能影响粘附其上或穿越内皮层的免疫细胞的功能[3].     

槲皮素对SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌细胞因子的影响

通过检测槲皮素对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1、P-选凝素、sICAM-1及TNF-α的浓度变化,探索中药复方主要成分槲皮素对仔猪水肿痛的疗效机制.将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、SLT-Ⅱ e组、不同浓度槲皮素处理组等5个组,采用ELISA法测定了培养3、6、9和12 h时细胞培养上清液中NO、ET-1、P-选凝素、sICAM-1及TNF-α浓度的变化.结果,10 mg/L槲皮素可下调SLT-Ⅱ e诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1及sICAM-1的分泌,12 h内使NO、ET-1及sICAM-1的分泌浓度接近正常水平;1、5、10 mg/L槲皮素不能下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞P-选凝素和TNF-α的分泌.结果表明,槲皮素通过抑制SLT-Ⅱ e诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、sICAM-1的过量分泌,缓解肠道微循环障碍,减轻炎症反应,达到治疗水肿病的目的.