吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007产嗜铁素的相关基因克隆及条件优化

为了明确吡咯伯克霍尔德氏菌Burkholderia Pyrrocinia JK-SH007是否产嗜铁素，揭示其生防机制，本文通过CAS检测该菌株产嗜铁素的能力，并对其嗜铁素合成相关基因cepR进行克隆及序列分析，同时采用单因素试验及响应面法对菌株JK-SH007产嗜铁素条件进行优化。结果表明，菌株JK-SH007具有明显的产嗜铁素能力，其嗜铁素合成相关基因cepR大小为720 bp，与B.pyrrocinia（EU034001）的亲缘关系最近，同源性为99%，两者序列相似性为97%，13个位点出现SNP；另外菌株JK-SH007 cepR基因编码的氨基酸序列有3个氨基酸发生了替换，两者一致性为97%。该菌产嗜铁素最优培养时间是15 h、pH 8、转速200 r/min、最佳碳源和氮源分别是甘油和氯化铵；PB试验筛选出影响该菌株产嗜铁素的关键性因素分别是pH、加碳量、加氮量；CCD试验结果显示，pH和加氮量的交互作用较明显；最终采用Design-Expert软件分析出菌株JK-SH007产嗜铁素最佳方案为碳源加入量15.00 g/L、氮源加入量10.50 g/L、温度30℃、pH 7.36，优化后菌株产嗜铁素能力由18.59提升到37.86，响应面优化产嗜铁素条件的效果是显著的，嗜铁素产量得到明显提高。     

群体感应信号物质对吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007在杨树内定殖的影响

为了明确杨树溃疡病生防菌吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007的群体感应系统是否与其内生定殖相关，本文通过群体感应指示菌紫色杆菌CV026和液相色谱串联四级杆飞行时间质谱技术（HPLC-Q-TOF-MS）确定其群体感应信号物质种类，并利用结晶紫染色、菌体回收、GFP标记等技术，研究其群体感应信号物质对该菌株生物膜及在杨树苗内的定殖能力的影响。结果表明，菌株JK-SH007产生的群体感应信号物质为含8个碳原子酰基侧链的辛酰基-L-高丝氨酸内酯（C₈-HSL）。群体感应信号物质C₈-HSL的添加对该菌株生物膜及在杨树苗内的定殖能力有影响，并且呈现低浓度促进，较高浓度抑制的规律。C₈-HSL的添加与菌株JK-SH007生物膜的OD值和菌体量具有显著相关性，相关系数分别为0.923和0.756。当添加1.0% C₈-HSL终浓度达到5×10^{-8 g/L}时，菌株JK-SH007生物膜的形成量达到峰值。荧光显微镜镜检发现，当添加100 μL C₈-HSL时，杨树组培苗根和茎中GFP荧光标记的菌株JK-SH007的定殖数量明显较CK多。菌株JK-SH007的群体感应与其在杨树内的内生定殖能力密切相关，群体感应信号物质C₈-HSL具有增强菌株JK-SH007内生定殖的能力，同时也表明该物质有利于该菌株生防效果的发挥。     

克氏原鳌虾在养殖过程中形成铁壳虾的原因及对策

克氏原鳌虾又称小龙虾、红鳌虾、淡水小龙虾,是淡水经济虾类。因肉味鲜美,深受广大消费者欢迎,因其杂食性,生长速度快,适应能力强而在当地生态环境中形成绝对的竞争优势。由于小龙虾的高密度养殖,在诸多因素影响下产生了大量铁壳虾,铁壳小龙虾,又称“丁壳虾”“钢虾”等。笔者于2019年5月份走访龙虾田口,安徽地区小龙虾养殖行业增加了很多稻虾养殖户电话,微信中虾农时常提起“铁壳虾”,“红头虾”,顾名思义,虾壳厚且坚硬,甲壳呈现艳红色,而且头大身子小,尾部肉质较少,松散。全身黑色,看上去很脏,并且身黏附着很多水生微生物。本文分析了影响克氏原鳌虾产生铁壳虾的因素,指出“铁壳虾”给养殖户带来的危害,结合各地铁壳虾情况,提出有效降低稻田中铁壳虾比例的有效方法,最后提出关于稻虾田水质管理的指标,供养殖户参考。     

2株副溶血弧菌不同盐度下致病性和毒力基因差异分析

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是常见的食源性致病菌和海水养殖动物致病菌,目前已知的毒力基因有tlh、tdh、trh、T3SS、pirA、pirB、toxR/S、orf8等。盐度是影响细菌基因表达的关键生态因子之一,为进一步探求副溶血弧菌的致病机理,对2株分别分离自海水和淡水养殖发病凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)中的副溶血弧菌在不同盐度下的生长速率、致病性进行检测,并用q-PCR方法对菌株毒力基因携带和表达情况进行定量研究。实验结果表明:海水菌株383生长速率快于淡水菌株V9,但菌株383在生长稳定期的细菌浓度明显低于菌株V9;菌株383对凡纳滨对虾的致病性明显高于菌株V9,前者的48 h半致死浓度(LD_(50))低于后者2个数量级;2株副溶血弧菌皆携带毒力基因tlh、T3SS1和pirA/B,但未检测到tdh、trh、T3SS2、toxR/S和orf8。部分毒力基因表达量检测结果显示,菌株383和菌株V9均为vcrD1表达量最高,其次是pirA,vopD1表达量最低;4个毒力基因不仅在2菌株间的表达量差别较大,而且盐度对同一菌株不同毒力基因表达的影响也是不同的。2株副溶血弧菌的毒力与pirA和vcrD1的表达量呈正相关性。研究结果为探究环境因素与副溶血弧菌致病力的关系提供了科学依据,同时也提示,淡水养殖凡纳滨对虾要防范副溶血弧菌输入的风险。     

饲料添加剂对虾类免疫力提升及抗WSSV的影响研究进展

整理了前人研究结果,重点介绍中草药、糖类,以及其它物质作为饲料添加剂,对养殖虾类免疫机能的提升以及抗WSSV的影响效果,并加以分析。     

一株感染深水网箱养殖许氏平鲉的病原菌分离与鉴定

2016年7月,山东省长岛县深水网箱养殖许氏平鲉(Sebastes schlegeli)暴发严重皮肤溃疡症。作者对病鱼进行病原菌分离。通过形态学观察、常规生理生化试验、gyrB和16S rDNA基因克隆测序等方法对分离菌株进行鉴定。在病灶溃疡处分离到一株绝对优势菌BZ01,该菌株在TSB固体培养基上呈半透明菌落,在TCBS选择性培养基上菌落呈绿色。透射电镜观察为短棒状,具有单根极生鞭毛。人工回接感染证明,该菌株对许氏平鲉具有较强的致病力,可以引起皮肤溃疡等症状,且与自然感染症状一致,其LD_(50)为2.07×10~6 CFU/ml。通过gyrB和16S rDNA基因序列测定并构建系统发育树显示,菌株BZ01与弧菌属同源性最高,并在系统发育树中与轮虫弧菌(Vibrio rotiferianus)聚为一枝,结合形态及生理生化表型测定结果,将该菌株鉴定为轮虫弧菌(V.rotiferianus)。药敏试验结果显示,该菌株对四环素类、喹诺酮类、香豆素类、肽酰转移酶类高度敏感,而对大环内酯类、多肽类、磺胺类、β-内酰胺类、氨基糖苷类中度敏感或不敏感。     

犬克雷伯氏菌肺炎的诊断与治疗

上呼吸道感染治疗不当常引起肺炎,肺炎克雷伯氏菌是引起肺炎的致病菌之一。2019年2月,福州某动物诊所接诊1例比熊犬。临床检查该犬心跳加快,呼吸急促,体温偏高,精神沉郁。血常规化验结果表明,该患犬身体患有炎症,并有轻微脱水;CRP检查结果表明,该患病犬体内有严重的细菌感染;X光片结果显示,肺部有均匀一致的大片密度增高阴影;该患病犬气管狭窄、患肺炎;取鼻腔分泌物姬姆萨染色镜检观察视野内有蓝色、两端钝圆的短杆状细菌;PCR扩增出目的条带,确诊为肺炎克雷伯氏菌。通过对该患病犬对因治疗,结果愈后良好。     

不同冻害补救措施对勃氏甜龙竹笋期生长的影响

2016年1月下旬福建三明市区出现极端低温,最低气温-4. 2℃,造成引种的勃氏甜龙竹遭受较严重的冻害。为探讨不同冻害补救措施对勃氏甜龙竹笋期生长的影响,分别选择砍伐枯竹与扒土施肥结合、砍伐枯竹及未采取冻害补救措施3块样地进行出笋、退笋、笋高、地径及笋重量的调查与分析。结果表明:不同冻害补救措施对勃氏甜龙竹笋期生长达高度显著影响,尤其对勃氏甜龙竹平均每丛笋总重量的影响最大;扒土施肥对冻害补救勃氏甜龙竹笋期生长的促进效果较为明显,出笋期也略长于未采取任何措施的竹林,对提高冻害补救勃氏甜龙竹笋的质量和产量有明显的促进作用。     

宝鸡峡灌区小麦水足迹时空变化特征与归因分析

基于水足迹理论,计算了实际耗水和施肥情况下宝鸡峡灌区小麦水足迹的各项指标,分析了小麦水足迹各指标的时空变化特征,利用对数平均迪氏指数分解法推导了总水足迹变化量分解公式,细致定量了气候变化和人类活动因子对总水足迹变化的贡献。结果表明:灌区小麦总水足迹1994—2010年均值为6.73亿m~3,Mann-Kendall检验呈显著下降趋势,年均变幅为-0.17亿m~3/a,水足迹结构由蓝水主导演变为灰水主导。单位产量的小麦生产水足迹、生产绿水、蓝水和灰水足迹多年平均值分别为1.04、0.36、0.32、0.37 m3/kg。生产水足迹、生产绿水和蓝水足迹在灌区内从西向东呈递增趋势,生产灰水足迹以兴平为中心向两侧递增。归因分析表明,影响灌区小麦总水足迹变化的主导因子为人类活动,其贡献率和为-113.57%,而气候变化因子的贡献率仅为13.57%。人类活动因子中,贡献率从大到小依次为灌溉定额(-56.58%)、总种植面积(-55.78%)、小麦种植比例(-43.76%)、单位面积施氮量(39.96%)、灌溉水有效利用系数(2.59%)。     

不同稀土浓度对瓦氏黄颡鱼生长的影响试验

本试验设计3个稀土浓度水平,一个空白对照,饲养76d R后测量其生长情况,试验结果表明:3个在饲料中添加了稀土的池鱼之间在试验组的结束时均重、绝对增重率及特定增重率等都有显著性差异(P<0.05),证明添加稀土与不添加及不同添加量对瓦氏黄颡鱼生长有显著性影响;在瓦氏黄颡鱼饲料添加1%"希科安"稀土添加剂,能较好地促进瓦氏黄颡鱼的生长.