伪狂犬病病毒gD、gE基因的克隆及转移载体的构建

利用PCR扩增了伪狂犬病病毒Min-A株gD、gE基因,扩增产物克隆于pGEM-T Easy载体.将gD、gE基因连接于质粒pUC18获得pUgDgE,缺失质粒pUgDgE的BamHI和BstEII位点间391bp的片段.在此缺失位置插入来自质粒pcD-NA3.1-的一段含hCMV启动子、多克隆位点和Neo报告基因的片段,构建了通用转移载体pgD-M-gE.该转移载体缺失了伪狂犬病病毒gI基因和gE基因ORF5'端363bp的碱基,有11个酶切位点可供外源基因的插入,上下游侧翼分别为1.25bp和1.42bp.这为开发以伪狂犬病病毒为载体的多价基因工程疫苗提供了有力工具.     

伪狂犬病病毒Min-A株gD基因的克隆及其真核表达质粒的构建

参考GeneBank收录的伪狂犬病病毒gD基因的序列设计了一对引物,对PRV Min-A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM-T Easy载体.对重组质粒PGTE-gD进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性.测序结果表明目的片段包含一个1203bp的开放性阅读框(ORF),编码400个氨基酸组成的多肽.将gD基因亚克隆至真核表达载体pcDVA3.1-的CMV启动子下游,构建了真核表达质粒pcDNA-gD,为下一步基因免疫奠定了基础.     

猪生殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白nsp4基因的表达及其产物的纯化

根据GenBank中已登录的猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）全基因组序列，设计合成了1对特异性引物，对PRRSV非结构蛋白nsp4基因进行了RT-PCR扩增，将回收的目的基因片段克隆到大肠埃希氏菌表达载体pET28a中，构建了重组质粒pET-nsp4，测序结果证实了重组质粒pET-nsp4的可靠性。将pET-nsp4转化至大肠埃希氏菌表达菌株BL21（DE3），用IPTG诱导表达，SDS-PAGE结果表明，重组菌可表达分子质量约23ku的蛋白。经镍离子亲和层析柱（Ni-NTA）纯化，获得了高纯度的重组蛋白，Western-blot分析结果表明，nsp4重组蛋白在大肠埃希氏菌系统中获得了正确表达。     

谢印涛与蘑菇的“不了情缘”

创业,是一个能让所有人心情澎湃的字眼!自主创业的成功,是胆识、智慧和坚韧不拔意志的最好诠释!创业成功人物,无疑是能让所有人肃然起敬的人!《蔬菜》杂志征集“蔬菜创业人物”故事近百篇,为将这少数成功人士的智慧转换成大家自主创业的动力和助力,我们对来稿进行了精选和编排,重在“创业智慧”分析,希望能带领读者们一起,通过阅读别人的故事,来积淀自己的智慧。     

猪传染性萎缩性鼻炎的治疗

(一)发病情况2010年2月15日略阳县郭镇宋氏养猪场饲养的36头2月龄仔猪有5头突然发病,出现鼻塞、呼吸困难、鼻腔歪斜等症状,用青霉素、链霉素、阿莫西林     

人工哺育设备哺育仔猪对其生长性能的影响

为研究人工哺育设备哺育仔猪对其生长性能的影响,选取5日龄杜×(长×大)三元杂交哺乳仔猪78头,分为3组,每组3窝,I组和Ⅱ组每窝8头,Ⅲ组每窝10头,Ⅰ组为人工哺育正常仔猪组,Ⅱ组为人工哺育弱小仔猪组,Ⅲ组为母猪哺乳组(对照组),Ⅰ组和Ⅱ组自5日龄起转入人工哺育设备饲喂代乳品,所有仔猪均在10日龄开始教槽,21日龄断奶,断奶后饲喂至31日龄试验结束。结果表明:5~21日龄阶段,Ⅰ组仔猪平均日增重显著高于Ⅲ组(P0.05),Ⅱ组平均日增重比Ⅲ组小(P0.05),Ⅰ组和Ⅱ组腹泻率和死亡率都低于Ⅲ组;22~31日龄阶段,Ⅰ组仔猪的平均日增重高于Ⅲ组(P0.05),Ⅱ组日增重低于Ⅲ组(P0.05),Ⅰ组教槽料采食量显著高于Ⅲ组(P0.05),Ⅱ组仔猪教槽料采食量高于Ⅲ组(P0.05),Ⅰ组和Ⅱ组料肉比与Ⅲ组差异不显著(P0.05),Ⅰ组和Ⅱ组腹泻率低于Ⅲ组。综上所述,使用人工哺育设备哺育仔猪可改善仔猪的生长性能。     

鲁南黑咸菜的腌制

鲁南黑咸菜,又称熟咸菜、老咸菜,其色泽酱红,奇香甘甜,松软可口,感觉如肉,具有特殊的味道。此咸菜清口利痰,生津健胃,助消化,利肾通络。其腌制方法如下。(1)选菜蔬菜品种以辣疙瘩菜最佳,胡萝卜、勺头菜等次之。选择无病虫害原材料,去除梗叶、根须,洗净晾干以备用。(2)时间一般原材料收获后就可以准备腌制,从立冬到大雪腌制装缸最好,可一直腌至翌年清明节。此期间气温低,易管理,不易发生腐烂。(3)装缸腌制黑咸菜一般用瓷器,不能使用金属器皿或塑料桶。将洗净的原材料放入瓷缸,材料与盐的比例为10︰1,原材料、盐相间腌制,然后加入井水,以淹没…     

苏打碱胁迫对多年生黑麦草的生理影响

为研究苏打碱胁迫对多年生黑麦草幼苗的生长和生理特性的影响,采用水培实验,用0.1 mol/L的Na₂CO₃ 和NaHCO₃ 溶液配置pH=8.2、pH=9.1、pH=9.9、pH=10.9四个梯度的处理液,以去离子水pH=6.5作为对照,探讨pH值对黑麦草蒸腾速率、株高、根长、含水量、叶绿素含量、丙二醛(MDA)含量以及抗氧化酶系统中超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)、过氧化物酶 (POD)活性的影响。结果表明,随着pH的升高,幼苗的株高、根长、含水量、相对蒸腾速率及叶绿素含量都显著下降,而根冠比呈先升后降的趋势。随着处理液的pH值从8.2递增至10.9,叶片中的MDA含量从对照的7.0 nmol/g FW逐步上升到30.0 nmol/g FW;而SOD活性先高后低,当pH=9.1时,最高含量为8.4 U/mg蛋白;CAT的活性则从对照的118.5 U/(min·g 蛋白)逐步递减至47.1 U/(min·g 蛋白);而POD活性呈现递增的趋势,当pH达到最高时,POD活性是对照的4倍多。     

水稻螟虫农业防治试验

根据国家公益性行业科技专项“水稻螟虫防控技术研究项目”的要求,通过深水灭杀虫和无害化水肥管理,营造一个适合水稻生长而不利螟虫发生的生态环境,提高水稻抗、耐虫能力,减少农药使用次数和使用量。     

十字花科蔬菜主要害虫的防治技术

十字花科蔬菜害虫较多,但以菜青虫、小菜蛾、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、黄曲条跳甲、蚜虫、猿叶虫等为害最重. 1 菜青虫 1.1 为害特点