H9亚型AIV型特异性电化学发光免疫检测方法的建立

【目的】H9亚型禽流感是重要的人兽共患性传染病,该亚型病毒为H7N9亚型和H10N8亚型流感病毒提供了6个内部基因（PB2、PB1、PA、NP、M、NS）,并且一直处于动态重组过程中。因此,建立针对H9亚型禽流感的型特异性电化学发光免疫的高通量快速检测方法,加强H9亚型流感的监测,具有重要意义。【方法】用钌联吡啶标记H9亚型AIV的单克隆抗体,用MPI-E型电致化学发光分析系统评价钌标单抗标记效率;用生物素标记H9亚型AIV的多克隆抗体,HABA法检测抗体生物素化的效率;待测抗原与钌标单抗作用1 h后,将此抗原-抗体复合物与通过生物素-链霉亲和素系统固定在磁微球表面的多克隆抗体反应,最后加入反应底物三丙胺后即可在电化学分析系统进行发光检测。优化生物素化多抗和钌标单抗最佳工作浓度,确定临界值和反应谱,对所建立的方法进行敏感性、特异性和重复性试验。攻毒后3 d和5 d,采集攻毒组和空白对照组鸡只的88份咽拭子和肛拭子,分别用电化学发光免疫检测方法和鸡胚病毒分离法进行检测和比较。【结果】钌标抗H9亚型AIV单克隆抗体的标记效率为每个单抗IgG分子上结合21个Ru²⁺,且间接免疫荧光方法证明其仍具有生物活性;生物素化兔抗H9N2亚型AIV多克隆抗体的标记效率为每个IgG分子上结合了6个生物素分子,且Western blotting试验证明其仍保持生物活性;该方法的检测临界值为28.3,可疑区间为23.4-33.2;阴性和阳性变异系数均小于10%;检测限为5×10⁴EID₅₀,能够特异性地检测H9亚型AIV,不与其他亚型流感病毒（H1、H3、H4、H5和H6亚型）和其他类型的禽源病毒（NDV、IBV和IBDV）反应。3 h内即可完成检测,与鸡胚病毒分离法的符合率为86.4%。【结论】所建立的H9亚型AIV型特异性电化学发光免疫检测方法可以用于临床样品检测,对H9亚型禽流感的监测和防控具有重要意义。     

3种方法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清的比较

本试验分别用蛋白G亲和层析法、饱和硫酸铵法和辛酸-硫酸铵法纯化兔抗H9N2亚型禽流感病毒血清,发现蛋白G亲和层析法纯化得到的抗体纯度最高,回收率较低,抗体活性未变,操作简便,但成本较高,适合实验室研究及小量样品的纯化;饱和硫酸铵法纯化得到的抗体纯度较蛋白G亲和层析法低一些,抗体活性不变,可通过多次盐析来提高抗体纯度,多作为蛋白G亲和层析法纯化前的初步纯化;辛酸-硫酸铵法纯化得到的抗体纯度不及前两种方法,回收率较高,抗体活性亦无改变,纯化时对pH的精确性和辛酸的浓度要求较高,多用于样品的粗提和单抗的纯化。     

1型鸭肝炎病毒R株全基因组分析与检测技术的研究

 【目的】测定1型鸭肝炎病毒（DHV1）毒株R全基因组,建立鸭肝炎病毒1型巢式PCR与实时荧光定量RT-PCR。【方法】设计特异性引物测定DHV1毒株R全基因组,以3D为靶基因序列的引物P1和P2,P3 和P4进行巢式PCR,引物F和R进行实时荧光定量RT-PCR。【结果】序列分析发现该毒株与其它GenBank上发表的DHV1毒株基因组核苷酸序列同源性为94.2%～99.2%,编码聚合蛋白氨基酸序列同源性为98%～98.8%,表明DHV1-R株与其它DHV1毒株之间病毒基因组一级结构有较高的同源性。基因组结构5′UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C- 3A-3B-3C-3D-3′UTR在遗传进化关系上与副肠孤病毒属（Parechovirus）亲缘关系较近。参照鸭肝炎病毒1型基因序列设计特异性引物,分别进行巢式PCR和SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR 方法检测鸭肝炎病毒1型, 结果表明巢式PCR敏感性为6 pg•ml-1。实时荧光定量RT-PCR确定特异性产物的Tm值,同时做普通RT-PCR。试验结果表明,特异性产物的Tm值为85.6℃,最低能检测到含0.015 fg•μl-1 阳性质粒标准品。【结论】建立的巢式PCR与SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR 检测方法显示了较好的特异性、敏感性,为鸭肝炎病毒1型的临床检测和流行情况调查提供了新的技术手段。     

禽源空肠弯曲杆菌的分离鉴定及其致病性的初步研究

本研究对广东部分地区不同品种家禽空肠弯曲杆菌的流行状况进行了调查。通过菌落和菌体形态、生化特征、培养特性等生物学特性和多重PCR方法对所分离菌株进行鉴定,结果表明广东地区鸡、鸭和鹅空肠弯曲杆菌的带菌率分别为7.93%、2.46%和4.16%。从分离株中选取10株进行了致病性试验,结果表明禽源空肠弯曲杆菌对雏鸡的主要病理变化是腹泻便血,肝脏出现白色坏死灶,盲肠充血、膨大充满气泡和红色内容物。     

2021年我国禽流感等禽病流行情况与2022年预测分析

受新冠肺炎疫情和家禽生产量增加的影响,2021年家禽价格仍保持低位运行,随着饲料成本的大幅上涨,多数养禽企业呈现微利或亏损局面.在家禽疫病防控方面,高致病性禽流感仍然是养禽业的最大威胁,2021年H5N8、H5N6和H5N1高致病性禽流感对我国家禽生产造成较大损失.本文将对我国2021年禽流感等重要家禽疫病发生情况进行...     

当前水禽流感防疫的主要问题及策略

正一、水禽流感防疫存在的主要问题(一)水禽流感历史1878年Perroncito首次报道在意大利发生,并称为"鸡瘟"。1901年Centanni﹠Savunozzi发现了该病是由"可滤过"的病毒引起的。1955年Shaffer证实了该病毒是A型禽流感病毒。1972年Slemons证实了水禽是禽流感病毒的重要储存库。从水禽(主要是鸭、雁、鸥等)已分离到H1-H16、N1-N9各血清亚型的禽流感病     

当前我国禽流感的流行特点及防控对策建议

2010年我国的禽流感疫情总体形势较为平稳,家禽中未发生高致病性禽流感突发重大疫情,但防疫形势仍十分严峻。本文将分析当前我国禽流感的流行特点,并对防控对策提出建议。12010年我国禽流感发生情况分析     

浅谈当前公共卫生形势下兽医流行病学教学的重要性

兽医流行病学（Veterinary epidemiology）是研究动物群体中疾病的频率分布及其决定（影响）因素的学科，是预防兽医学的一个重要组成部分。该学科研究范围涵盖动物群体中的一切疾病，其中包括非传染病和部分人兽共患病。该学科的主要研究方法是对动物群体中的疾病进行调查研究，收集、分析和解释资料，并作生物学推理；从而确定病因、阐明分布规律、制定防控对策并评价其效果，     

当今禽流感的流行特点及防控措施

1当今禽流感的流行特点1.1H5N1亚型禽流感在全球呈不断扩散且感染动物范围扩大的趋势近年来,尽管世界各国对H5N1亚型高致病性禽流感高度重视并采取了扑杀、强制免疫等多种防范措施,但疫情仍持续不断发生。据世界动物卫生     

鸽Ⅰ型副黏病毒灭活疫苗的免疫抗体监测与分析

鸽Ⅰ型副黏病毒(PPMV-Ⅰ)病又称鸽瘟或鸽新城疫,是一种由禽Ⅰ型副黏病毒引起的、流行于鸽群的高度接触性急性传染病,它以肠炎、严重腹泻和神经症状为特征,是危害养鸽业的主要疫病之一。鸽Ⅰ型副黏病毒病目前在各种鸽群(肉鸽、信鸽和赛鸽)中普遍存在,临床发病多见于月龄以下的鸽,