鳗鲡病害及其防治技术（下）

三、鳗鲡弧菌病 1．病原 为鳗弧菌，弧菌病主要流行在含有盐分的养鳗近海地区，流行水温19～24℃。水质不良、鳗体受伤等是弧菌病的发生和流行的诱因。     

养殖大黄鱼弧菌病检测研究进展

养殖大黄鱼弧菌病发病率高、发病范围广,流行时间为6～10月,7～8月为高峰期,一般死亡率为30%～40%,最高可达80%以上,已成为制约养殖大黄鱼健康发展的主要瓶颈之一.就国内外研究发展动向,综述了养殖大黄鱼弧菌病的主要检测技术,包括传统的检测技术、免疫学技术、分子生物学检测技术等,并详细阐明了各个技术的原理、特点及应用.     

大黄蒽醌提取物对罗氏沼虾抗鳗弧菌感染的研究

将罗氏沼虾随机分成5组,每组三个平行,每个平行约1000尾(个体均重1g左右),第1组为对照组,投喂基础日粮,另外4组为试验组,在基础日粮中分别添加0.05%、0.1%、0.2%、0.4%大黄蒽醌提取物,饲养6周后对罗氏沼虾进行鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染.测定生长以及0、12、24、48h血清和肝胰腺溶菌酶、丙二醛(MDA)、总抗氧化能(T-AOC)以及超氧化物歧化酶(SOD)等指标.生长试验表明,与对照组相比,0.1%组、0.4%组罗氏沼虾的增重率、特定生长率显著提高,饵料系数显著降低.攻毒试验Ⅰ表明,各组48h内罗氏沼虾血清溶菌酶活性、肝胰腺溶菌酶含量、血清T-AOC均呈先升高后降低趋势,其中它们的最大值分别出现于0.4%组的12h、0.2%组24h、0.1%组12h;肝胰腺SOD活力呈上升趋势,而血清MDA则一直下降.攻毒试验Ⅱ表明,大黄蒽醌提取物能有效地降低试验组罗氏沼虾的死亡率,提高免疫保护率,其中0.4%组的保护效果为最佳.因此,在饲料中添加大黄蒽醌提取物降低罗氏沼虾对病原的敏感性,增强机体抗病力,促进生长.     

鳗弧菌L-18株的限铁条件和铁调节外膜蛋白的免疫效果研究

利用Western-blot技术，对鳗弧菌L-18株的OMPs和IROMPs的免疫反应性进行了分析，并通过免疫牙鲆比较二者免疫保护力的差异，以期从IROMPs方向探索开发鳗弧菌新型鱼用疫苗，并为研究其免疫原理提供重要的科学依据。结果表明，培养基中加入不同浓度的联铁剂，鳗弧菌L-18株的生长和铁载体的表达出现规律性变化，其中加入100~130μmol·L-1 2,2’-联吡啶为最适合限铁条件，此时铁载体的表达量最高且生长受抑制程度较小。在此条件下，菌株表达出74.3ku和77.4ku的IROMPs，其中77.4ku蛋白具有免疫反应性，为重要抗原。用全菌灭活疫苗、OMPs、IROMPs分别腹腔注射免疫牙鲆7周后攻毒， IROMPs疫苗的相对免疫保护力达到75.9%，远高于OMPs疫苗的51.8%。相对于OMPs，IROMPs的抗体效价显著提高，接近全菌疫苗组的水平，而血清杀菌活力没有显著变化。 关键词：鳗弧菌；铁调节外膜蛋白；牙鲆     

养殖刺参溃疡病病原菌RH2的鉴定及其生物学特性分析

从患溃疡病养殖刺参(Apostichopus japonicus)病灶处分离出3株优势菌(RH1、RH2、RH3),以浸浴、体腔注射、体壁肌肉注射等方式进行感染实验,证实菌株RH2为养殖刺参溃疡病的病原菌,其对刺参的LD50(半数致死量)每尾为5.68×106CFU,并证实浸浴、体腔注射的方式无法感染刺参,该菌可能通过体表创伤侵入的方式感染刺参。经形态学观察、生理生化特性分析、16SrRNA和HSP60基因测序确定菌株RH2为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。基于16S rRNA基因构建的系统发育树显示,菌株RH2与溶藻弧菌(AF513447)亲缘关系最近,置信度为50%;HSP60基因序列分析表明RH2与溶藻弧菌(AY332570、AF230931)聚为一个分支,且置信度高达99%。菌株RH2的最适生长盐度为25~35,最适生长pH为7.2~8.0,最适生长温度为14~22℃。对18种药物的敏感实验证实菌株RH2对诺氟沙星、复方新诺明、壮观霉素等较为敏感。     

鳗鲡肠道蛭弧菌的分离及其对水产动物细菌性疾病的预防作用研究

以多发性水产动物疾病的病原菌嗜水气单胞菌为宿主，从鳗鲡肠道中分离到一株噬菌力较强的蛭弧菌，命名为Bdm4。通过光学显微镜、相差显微镜和电子显微镜对蛭弧菌Bdm4进行革兰氏染色观察显示，蛭弧菌Bdm4为短杆状和长杆状的革兰氏阴性细菌，其大小约为0．3—0．4μm×1．2～1．5μm；菌有单根的极生长鞭毛。Bdm4对试验所选取的多种海淡水致病菌均有较强的裂解能力，而对所选用的益生菌则不能裂解；且其在鱼体表、鳃和肠道中能有效地消减致病菌，抑制致病菌的繁殖，同时有利于肠道乳酸杆菌数量的增长。     

新型微生态制剂——溶藻细菌在水产养殖中的开发前景

近年来，养殖水体富营养化、海洋赤潮的危害日益严重，给水产养殖业带来巨大损失，已经引起了各国的普遍关注。而目前对水华、赤潮的防治，主要以铜制剂、除草剂等化学方法为主。这类防治方法虽可有效地控制藻类生长，但化学药剂使用量大，成本较高，效果单一，且会造成水体的二次污染。因此，更安全、高效的生物防治方法，越来越受到人们的关注。     

大菱鲆致病性溶藻弧菌SR1的外膜蛋白及其抗原性分析

用十二烷基肌氨酸钠(Sarkosyl)抽提结合超速离心的方法提取了一株大菱鲆致病性溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)SR1和其他7株弧菌的外膜蛋白。通过SDS-PAGE图谱分析比较了这8株弧菌外膜蛋白的组成,结果表明,8株弧菌的外膜蛋白电泳一般可得到6-12条条带,其分子量多集中在65-106 kD和28-48 kD,其中36 kD的蛋白带为8株弧菌所共有。用兔抗SR1全菌血清进行Western-blot印迹显示,菌株SR1的外膜蛋白条带中有6条发生了阳性反应,其分子量分别为73 kD、48 kD4、5 kD3、9 kD、36 kD和32 kD。而其他7株弧菌的外膜蛋白与兔抗SR1血清也发生程度不等的阳性反应,这些阳性反应条带的分子量集中在65-73 kD、45-48 kD和36-41 kD之间,其中36 kD的外膜蛋白在8株弧菌中均出现明显的阳性反应,说明36 kD的外膜蛋白是这8株弧菌共有的特异性抗原。     

鸡弧菌性肝炎的诊治

2006年2月，江苏省海安县一养殖户饲养的三黄鸡突然发病，感染率和死亡率很高，经实验室检查及鉴定，确诊为弧菌性肝炎，采用中西医结合治疗，效果显著。     

副溶血弧菌VP-5的分离鉴定及其与鲈鱼免疫信号通路相互关系研究

为探讨福建省漳州市盛明养殖场鲈鱼的致病菌及其与鲈鱼免疫信号通路的相互关系,从而可以预防和治疗该疾病。解剖患病鲈鱼肝脏组织后划线培养分离纯化了致病菌VP-5。显微镜观察该致病菌VP-5形态为球杆状,弧形,有单鞭毛,运动活跃,革兰阴性菌。在VITEK-32全自动微生物分析仪鉴定后,该致病菌对酪氨酸、葡萄糖、甘露醇等反应阳性,对蔗糖,阿拉伯糖和棉子糖等反应阴性。分析了该致病菌16SrRNA和tdh1基因序列,发现其与副溶血弧菌的亲缘关系非常接近。综合后鉴定致病菌VP-5为副溶血弧菌。并研究了副溶血弧菌VP-5侵染鲈鱼后寄主免疫信号通路基因cd63/cxcr4/il-8的表达水平差异。鲈鱼腹腔注射感染副溶血弧菌VP-5,感染后0-96h解剖鲈鱼肝脏组织和表皮组织。采用Trizol试剂盒抽提鲈鱼总RNA,反转录后生成cDNA。利用实时荧光定量PCR技术对鲈鱼免疫信号通路基因cd63/cxcr4/il-8表达水平进行测定。鲈鱼受到副溶血弧菌VP-5感染后,免疫信号通路基因cd63/cxcr4/il-8在鲈鱼肝脏组织的表达量12h和24h时与对照组相比较差异显著(P<0.05)；在表皮组织的表达量在24h和36h时与对照组相比较差异显著(P<0.05)。证实鲈鱼肝脏组织免疫信号通路基因的表达与副溶血弧菌VP-5的感染正相关,相对于表皮组织反应更快。因此鲈鱼的免疫信号通路基因cd63/cxcr4/il-8积极反应于致病菌,这些基因的快速表达会引发鲈鱼自身免疫应答,增强其抵抗致病菌的能力。