大豆豆荚特异性启动子的克隆及功能分析

【目的】克隆大豆豆荚特异性启动子,并对其进行功能分析,为研究抗病虫基因在大豆荚中的特异性表达奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆得到豆荚特异性启动子(Pod Specific Promoter,PSP)的核心序列,用PSP序列取代质粒pBI121中的CaMV 35S启动子,构建与GUS基因融合的豆荚特异性报告载体pPSP-GUS,通过农杆菌介导法转化烟草"NC89",对转基因植株进行分子生物学检测,将鉴定为阳性的植株经GUS组织化学染色,验证PSP片段的功能。【结果】所获得的豆荚特异性启动子PSP大小为1 270bp,与已报道序列的同源性为98%,具有多种典型的启动子表达调控元件,如A/T-rich core、CAATBOX、TATABOX、GATABOX等。将pPSP-GUS质粒转化烟草后,经PCR和Southern blot检测结果显示,成功获得了转基因阳性烟草植株。GUS活性检测结果显示,在转pPSPGUS质粒的烟草根和叶片中均未检测到GUS活性,在萼片中可检测到低水平的GUS活性;而在花荚中可检测到高水平的GUS活性,且明显高于转pBI121质粒的对照植株。【结论】克隆得到的豆荚特异性启动子PSP片段具有启动基因在豆荚中特异性表达的功能。     

国有林区改革的“内部分开”与林权改革的边际创新

以改革成本理论为分析工具,从经济改革成本、社会改革成本2个维度对我国国有林区的内部分开体制进行分析,认为经济改革成本是采取内部分开体制的直接原因,而社会改革成本会随着改革过渡期的延长而增加。在当前国有林权改革停滞的情况下,对林业产权体系进行边际创新,明晰林区居民对于森林生态资源的产权有利于突破林权改革遭遇的困境,实现林权的帕累托式改革。     

Cry1Ab13杀虫基因的PCR诱变及功能验证

【目的】通过易错PCR技术克隆一种新的Cry1Ab13基因,以利用Cry类Bt基因提高作物抗虫性,丰富基因资源。【方法】利用易错PCR技术对苏云金芽孢杆菌Cry1Ab13基因进行随机诱变,构建突变体文库,筛选获得突变株Cry1Ab13-1,将该基因构建原核重组表达载体后转化到大肠杆菌中进行异源表达,并利用表达的目的蛋白进行抗虫鉴定。【结果】序列分析表明,突变株Cry1Ab13-1基因序列全长2 036bp,与原始碱基序列的一致性为97.79%,有2个碱基发生突变,导致该基因编码的氨基酸序列中有2个氨基酸改变,分别是第130位由脯氨酸变成丝氨酸,第383位由丝氨酸变成苏氨酸;改变后的氨基酸序列与原始氨基酸序列一致性为96.97%。在线分析表明,该基因与已知过敏源的序列同源性低于35%,不存在致敏性。SDS-PAGE电泳分析表明,表达蛋白分子质量大小为79.5ku,与预期结果相符。抗虫鉴定表明,处理72h时表达的目的蛋白对小菜蛾(Plutella xyllostella)幼虫的致死率达87.88%,明显高于未突变基因对照组的幼虫死亡率;对亚洲玉米螟(Ostrinia nubilalis)幼虫的致死率达81.11%,而且存活的亚洲玉米螟幼虫的生长发育受到明显抑制。【结论】成功克隆了Cry1Ab13-1抗虫基因,且该基因对小菜蛾幼虫和亚洲玉米螟幼虫均具有高效的杀虫活性。     

基于Ecotect猪舍光热环境的模拟仿真

为探究北方不同建筑材料和不同结构形式猪舍光热环境对建筑的要求,基于Ecotect模拟分析软件,对试验猪舍和某猪场猪舍进行光热环境的模拟仿真,对2种猪舍的朝向、全年的光环境和热环境进行了模拟分析。结果表明:2种猪舍建筑的最佳朝向为南偏西25°,两猪舍均满足建筑屋顶及墙体接收太阳辐照度要求;根据光环境模拟分析,两猪舍采光系数良好,均满足设计及使用要求,满足绿色建筑标准;根据热环境分析,2种不同建筑结构猪舍冬季单位建筑面积上围护结构的热负荷指标分别为68.4 W/m2和96.9 W/m2,夏季得热平均到单位面积上围护结构的热负荷指标分别为3.2 W/m2和4.2 W/m2,试验猪舍比对照猪舍围护结构在1月份日均总失热量少约33%,在6月份日均总得热量少约31%。试验猪舍达到冬暖夏凉的效果,满足北方猪只对建筑热工性能要求。此研究方法和结果可为农业建筑设计提供新的手段和工具。     

羊传染性脓疱病毒B2L基因片段重组腺病毒载体的构建（摘要）（英文）

[目的]利用腺病毒载体系统构建羊传染性脓疱病毒B2L基因重组腺病毒载体。[方法]以从羊传染性脓疱病毒株JLSY04中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增获得B2L目的基因片段;然后将B2L目的基因克隆至PD-NR-CMV载体,筛选阳性克隆获得质粒CTC572-6;再将质粒CTC572-6与腺病毒载体进行同源重组,筛选阳性克隆,并进行菌液PCR、酶切、测序等鉴定。[结果]经酶切和基因测序等鉴定,成功构建了携带羊传染性脓疱病毒B2L基因的重组腺病毒载体CTC572Ade-30。[结论]为羊传染性脓疱基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。     

黑龙江省森林食品产业品牌竞争力层次模糊综合评价研究

对森林食品品牌竞争力的内涵及其特征进行了分析,在此基础上对影响黑龙江省森林食品品牌的因素进行具体分析与评价,根据模型分析得出：对黑龙江省的森林食品产业品牌竞争力影响处于主要地位的依次是技术创新能力、品牌产品质量、品牌传播能力、森林食品产业的运作能力。在此基础上提出提升黑龙江省品牌竞争力的具体对策与建议。     

大蒜素生理功能及在反刍动物上的应用

大蒜素是一种从大蒜中提取的含硫化合物，具有安全性高、无残留、不产生耐药性、抗菌谱广、无配伍禁忌等优点。大蒜素的生理功能包括降低血糖和血压、抗氧化、增强免疫力和抑制有害细菌等，并且在动物生产中发挥着维持动物肠道健康、改善肠道菌群、调节脂肪沉积等作用。作为饲料添加剂的大蒜素主要为化学合成类型。首先合成二烯丙基二硫醚，再通过氧化反应合成大蒜素，在实验室中大蒜素还可以通过过氧化氢、过氧邻苯二甲酸镁或氯代苯甲酸氧化二烯丙基二硫化物来合成。在实际生产中，大蒜素对反刍动物有促生长、提高饲料消化率、改善瘤胃发酵等诸多功能。大蒜素还可以通过抑制瘤胃内产甲烷菌活性和减少产甲烷菌数量来降低瘤胃甲烷产量。作者主要介绍了大蒜素的合成、理化特性及其生理功能，并阐述了在反刍动物中应用大蒜素的研究成果，以期为大蒜素在反刍动物生产中的应用提供参考。     

向日葵锈病抗性相关microRNA的挖掘及其靶基因预测

前期利用高通量测序技术及生物信息学分析方法，在向日葵上预测筛选到10个差异表达的新microRNA （miRNA）可能与锈病抗性相关。本试验利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，对筛选到的10个miRNA做进一 步的定量验证。结果表明，相比于水处理的健康叶片(对照组A)，接种锈菌300生理小种的叶片中（抗病组B）HanmiR21 、Han-miR25、Han-miR42表达量呈上调趋势，Han-miR11、Han-miR34、Han-miR43、Han-miR47、Han-miR67 表达量呈下调趋势；接种锈菌737生理小种的叶片中（感病组C）Han-miR25、Han-miR42的表达量呈上调趋势， Han-miR11、Han-miR21、Han-miR34、Han-miR43、Han-miR47、Han-miR67表达量呈下调趋势。qRT-PCR的检测 结果与前期高通量测序结果80%相一致。利用miRanda软件预测靶基因，10个miRNA共预测到117个靶基因，其 中86个靶基因获得其生物信息学功能注释。运用miRBase数据库，对10个新预测miRNA进行同源性分析发现，新 预测的10个miRNA与拟南芥、烟草、水稻等作物中参与病害逆境胁迫响应的miRNA有较高相似性（62%～100%）。 定量检测和验证miRNA作用的靶基因时发现，抗病组表达量上调的Han-miR21对应的靶基因有1个下调、表达量 下调的Han-miR43对应的靶基因有3个上调，符合miRNA与其靶基因互作的规律。     

不同保鲜剂对金枝柳切枝保鲜效果的研究

本试验设计5种保鲜剂配方,研究了不同保鲜剂对金枝柳切枝鲜重、瓶插寿命、形态变化及叶绿素、花青素、可溶性糖含量的影响,为生产上金枝柳的切枝保鲜及花艺应用提供理论基础。研究结果表明:保鲜剂B(苯钾酸钠0.5%,蔗糖3%)处理后,切枝鲜重变化最小、瓶插寿命最长,枝条健壮充实,保鲜效果最好,保鲜剂A(3%蔗糖、硫酸铝50 mg/L,柠檬酸200 mg/L,赤霉素100 mg/L)次之。整个瓶插周期中,保鲜剂B处理后的叶绿素和花青素含量略高于保鲜剂A处理;保鲜剂A和B处理后的可溶性糖含量差异不大。综上所述,保鲜剂B配方对金枝柳切枝的保鲜效果最好,值得在花店推广应用。