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用2株不同致病力的H5亚型禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6,12,24,48,72 h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene RG3 000实时定量PCR仪对H5亚型AIV的HA基因进行检测,试图建立快速检测H5亚型AIV的real-time RT-PCR方法,并用所建立的方法对来自全国各地的疑似H5亚型AIV的病料和咽喉拭子、泄殖腔拭子346份进行检测。结果表明：农业部动物流感重点开放实验室建立的HA基因的teal-time RT-PCR方法可以检测到细胞培养物中和临床样品中是否含有H5亚型AIV,与常规RT-PCR比较,该方法更加特异、准确、快速。 相似文献
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通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增了禽流感病毒A/TurKey/England/N28/73(H5N2)(TEN28/73)的8个基因片段即PA、PB1、BP2、NS、NP、M、HA、NA基因,将其分别克隆到PMD18-T载体后进行序列测定:并将克隆到的8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较分析,绘制HA和NA基因的进化树.结果表明所克隆到的8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架;HA、NA基因的序列分析表明TEN28/73符合低致病力禽流感病毒的特征:HA进化分析发现TEN28/73与A/Duck/Hongkong/698/79处于不同的分支中,与A/Goose/Guangdong/1/96和A/Goose/Guangdong/3/97亲缘关系较远;NA进化分析表明TEN28/73与A/Duck/Hongkong/86/76亲缘关系较近,但和A/Leningrad/47/57的NA基因却在不同的分支中.TEN28/73全基因序列的测定是首次对H5N2亚型AIV的全基因进行序列测定工作. 相似文献