木霉拮抗菌的筛选与鉴定

采用涂布平板法从植物和土壤中共分离得到301株细菌,其中从羊蹄甲、芦荟和香蕉皮等植物中分离到内生细菌86株,从土壤中分离到细菌215株。以食用菌栽培中的主要污染菌木霉,包括哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）等4种共8株木霉菌株以及蘑菇（Agaricus bisporus）、香菇（Lentinul aedodes）等14种不同食用菌为实验菌,通过平板对峙培养法筛选出对木霉有拮抗作用而对食用菌拮抗性弱甚至无拮抗作用的细菌75株。采用传统分类法以及16S rDNA序列分析对其中作用效果最好的5株细菌进行了鉴定,结果显示,5株细菌均为枯草芽孢杆菌Bacilluss subtilis。在实验中还发现,从羊蹄甲、芦荟和香蕉皮等植物中更容易分离到木霉拮抗菌。     

长根金钱菌对玉米小斑病菌的拮抗作用

对峙培养试验结果表明,长根金钱菌对玉米小斑病菌菌丝生长有很强的拮抗作用。L16(4^5)正交试验结果表明,以玉米粉4％,蔗糖3％,黄豆粉0．5％,蛋白胨0．2％为培养基,初始pH6时,液体培养长根金钱菌发酵液对玉米小斑病菌菌丝生长的抑制作用最强,抑制率与长根金钱菌的生物量呈显著正相关。发酵液中的粗蛋白对玉米小斑病菌菌丝生长有极显著的抑制作用,但粗多糖对玉米小斑病菌菌丝生长没有抑制作用。     

食用菌种植中污染菌青霉的拮抗菌筛选

针对食用菌种植中常见的污染菌青霉（penicillium）进行了生物防治探讨．通过拮抗（antagonism）实验筛选到一株拮抗菌-蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus Frankland ＆ Frankland）；并将其与有关灭菌剂进行了对比．同时也进行了小规模田间防治实验，均取得了较好的效果。     

姬松茸选育菌株的部分特性研究

对新选育4株姬松茸菌株的若干菌性特征进行了研究。结果表明：在差异性为0．05和0．01的两种水平下，AbML11菌丝长速与AbML2、AbMD3、AbML7、AbM9菌丝长速差异达到极显著水平，AbML7长速最慢，长势最弱；4个菌株的最适温度均为28℃，其中AbML2、AbMD3耐受温度最高达36℃。在转管过程中，AbML11菌丝长速与长势稳定性最佳，其次AbML2、AbM9、AbMD3，AbML7最差；与出发菌株比较，AbML2、AbML11具有较强的抗青霉能力，AbMD3、AbML7抗霉力较差；在菌丝桔抗试验中，5个菌株之间均产生桔抗，说明菌株间存在一定的遗传差异性；RAPD图谱分析表明，当遗传相似系数达62％时，可以将5个菌株分成：AbML2、AbMD3，AbML7、AbM9和AbML11两类。由此可见，新选育的4株姬松茸菌性有别于AbM9，AbML11若干性状优于AbM9。     

食用真菌空间诱变育种研究

本研究将香菇、平菇、黑木耳、金针菇、灵芝等食用菌材料进行了卫星或高空气球搭载,随之进行地面实验。结果表明,搭载材料在拮抗反应、菌丝生长速度、出菇形态等方面出现明显变异。RAPD分析的结果也证实一些搭载菌株在DNA水平上发生了变异。以上结果表明,空间诱变可能为食用菌的遗传育种提供新途径。     

长枝木霉T8对水稻纹枯病菌拮抗作用的研究

对峙培养表明:长枝木霉T8[Trichoderma longibrachiatum]对立枯丝核菌有较强的拮抗作用,拮抗系数为1。长枝木霉T8对立枯丝核菌形成明显的拮抗区带,界面处病菌菌丝的细胞质变稀薄、消解或菌丝断裂,病菌菌丝停止生长,同时对立枯丝核菌菌核形成包围,抑制其萌发。在光学显微镜下,可观察到长枝木霉T8对立枯丝核菌菌丝的缠绕、细胞质变稀薄、菌丝消解、菌丝断裂或侵入等现象。     

ARDRA方法在荧光假单胞菌分离鉴定中的应用

【目的】探索荧光假单胞菌的分类方法，分离筛选拮抗性较强的荧光假单胞菌。【方法】利用紫外下产生荧光的特性，采用梯度稀释及鞭毛染色的方法，对采自云南、海南、山东和新疆的488份植物根际土壤进行分离筛选，分离菌株进行ARDRA分析，采用室内平板对峙法筛选对植物病原真菌具有较强拮抗作用的菌株，并对其进行生理生化分析和分子鉴定。【结果】分离筛选到102株紫外下产生荧光的杆状单极生鞭毛菌株。ARDRA分析产生荧光假单胞菌类型、恶臭假单胞菌类型以及一个未知的谱带类型。以油菜立枯病菌作为靶标菌，筛选到25株具有拮抗作用的菌株，其中TC222产生的抑菌圈最大，进一步的生测结果表明该菌株对9种重要的植物病原真菌如番茄灰霉病菌等具有很强的拮抗活性。TC222的 16S rDNA核苷酸序列与荧光假单胞菌PfO-1同源性达到99%，其最终鉴定为荧光假单胞菌。【结论】ARDRA方法在分子水平上为荧光假单胞菌的分离鉴定探索了一条新途径；TC222菌株具有拮抗多种植物病原真菌的能力，显示了良好的应用前景。     

烟草黑胫病拮抗菌的筛选及其抑制作用研究

从河南省罗山县和舞阳县烟区采集的土壤样品,经分离纯化获得6个真菌菌株,采用平板对峙法发现其中1株真菌对烟草黑胫病菌(Phytophthora nicotianae)有明显的抑制作用,其拮抗机理主要是拮抗作用、寄生作用和竞争作用。     

2株优良芽孢杆菌的筛选鉴定及促生特性

选用实验室保存的10株芽孢杆菌,通过皿内拮抗试验、皿内种子发芽试验、菌株碳氮源利用试验、菌株分子生物学鉴定等手段筛选鉴定出MY1、CY1两株芽孢杆菌,它们具有广谱抑菌性和潜在促生能力,其中MY1为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),CY1为枯草芽孢杆菌沙漠亚种(Bacillus subtilis subsp.inaquosorum)。进一步通过盆栽试验研究MY1、CY1对番茄促生及抗性的影响,结果表明MY1、CY1发酵液可显着提高番茄株高、叶片叶绿素含量、地上部分干质量等生物学指标,PAL、PPO、POD、CAT 4种防御酶活性分别在不同测试时间显著高于对照组,表明MY1、CY1具有促进番茄生长,增强植株抗病性的能力。     

蟹源弗氏柠檬酸杆菌拮抗菌PNB3的分离鉴定与安全性分析

摘 要：筛选和鉴定抗水产致病性弗氏柠檬酸杆菌的优良芽孢杆菌,并分析其安全性。以一株蟹源致病性弗氏柠檬酸杆C1作为筛选指示菌、抑菌圈直径和抑菌效果作为指标进行抗菌芽孢杆菌优良菌株的分离与筛选,综合生理生化鉴定与16S rRNA序列分析对抗菌芽孢杆菌优良菌株进行鉴定,并参照《HJ/T 415—2008 环保用微生物菌剂环境安全评价导则》、《NY/T1444-2007微生物饲料添加剂评价通则》等国家标准,从毒力基因、耐药性、对小球藻生长的影响以及对斑马鱼和中华绒螯蟹的致病性等方面分析抗菌芽孢杆菌优良菌株的安全性。结果显示,从养殖淤泥中分离并筛选出一株抗菌芽孢杆菌优良菌株PNB3,其在1.0×105 CFU/mL时与蟹源致病性弗氏柠檬酸杆菌C1共培养处理120 h的最高抑菌率达到了99.99%。结合生理生化鉴定以及16S rRNA序列分析,菌株PNB3被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),不含溶血素BL基因、肠毒素Nhe基因、肠毒素T基因、肠毒素FM 基因、细胞毒素 K 基因、呕吐基因、多效调控因子等毒力基因,对复方新诺明、氨苄西林、诺氟沙星、卡那霉素、多粘菌素B、氟苯尼考、庆大霉素、依诺沙星、头孢拉定、青霉素等10种抗生素高度敏感,对多西环素、四环素等2种抗生素中度敏感,对链霉素耐药,在终浓度为2.0×104~2.0×108 CFU/mL时对小球藻的生长有促进作用,对斑马鱼的半数致死浓度（LC50）大于2.0×108 CFU/mL,对中华绒螯蟹的半数致死浓度（LC50）大于2.0×108 CFU/g。地衣芽孢杆菌PNB3是一株具有潜在安全性的弗氏柠檬酸杆菌拮抗菌,具备应用于中华绒螯蟹弗氏柠檬酸杆菌病生物防控的安全基础。