胶体金免疫层析法用于禽流感亚型诊断

依据AIV H5亚型单克隆抗体技术，结合胶体金免疫层析试验，同时制备H5亚型诊断试纸条。H5试纸条对H5亚型标准毒株、以及9株疑似H5亚型毒株检测为阳性结果，同时对H9亚型标准毒株及传染性支气管炎、新城疫抗原等检测结果为阴性，本试验制备试纸务的检测结果与血凝试验和血凝抑制试验结果一致，与NP基因和H5引物扩增结果一致。研究表明：本试验制备的H5亚型试纸条具有快速、经济、灵敏度高、特异性强、重复性好、易于判读、操作简便等优点，可用于AIV H5亚型的特异诊断和流行学调查，为开发成品化检测试纸条提供理论依据。     

47个亚、欧、美洲野生、地方和培育猪群的AFLP多态性及群体遗传关系研究

采用双色荧光标记技术,检测21个中国地方猪类群、19个欧美商业猪类群、5个亚欧美野猪类群、1个中国培育猪种、1个杜洛克×中国野猪杂种群体总共47个类群基因组DNA池的AFLP多态性,22种引物组合产生312个AFLP多态标记。根据多态标记信息,计算47个类群间的遗传相似系数,并构建UPMGA聚类关系图。结果表明,中国地方猪、中国野猪与欧美商业猪群、欧美野猪间存在明显的遗传分化,提示中国地方猪起源于亚洲野猪,而欧美商业猪种由欧美野猪驯化而来。杜洛克猪、长白猪和大白猪不同类群间的遗传相似性较高,但也存在一定的遗传分化。南昌白猪与大白猪、PIC L95系与太湖猪有着很近的亲缘关系,真实反映了其育成历史。嘉兴黑猪与梅山猪、冠朝猪、藤田花猪、上犹花猪和万安花猪等地方猪群遗传关系的研究结果与其形态学、地理分布和现行分类情况相一致,认为AFLP技术是遗传多样性和群体遗传学研究的一项有效的技术手段。     

利用白色杜洛克×二花脸资源家系定位影响猪肉硬实度的QTL

为定位影响猪背最长肌和半膜肌硬实度的数量性状基因座(QTL),本研究测定了白色杜洛克×二花脸资源家系中490头F_2代猪的背最长肌和半膜肌硬实度,检测了3代个体在19条染色体上194个微卫星的基因型,并据此进行了QTL定位分析.共检测到9个QTLs,包括影响背最长肌硬实度的4个QTLs,分别位于SSC1、SSC2、SSC7和SSC10,其中SSC1和SSC7的QTLs达到1%基因组显著水平;影响半膜肌硬实度的5个QTLs分别位于SSC1、SSC7、SSC10、SSC12和SSC14,其中SSC7和SSC14的QTLs分别达到5%和1%基因组显著水平.     

H-FABP基因型对二花脸猪相关性状影响的初步分析

利用21窝不同日龄的二花脸猪共97头,根据日龄分布,分成1组(日龄阶段)—49天,2组—58～60天,3组—61～70天,4组—71～80天,5组—81～90天,6组—228天六个日龄组;采用索氏脂肪抽提法和石蜡组织切片图像分析法对其背最长肌及半腱肌的肌肉组织学特性进行了测定。根据心脏脂肪酸结合蛋白(HeartFatty Acid Binding Protein,H FABP)基因的PCR RFLP多态性,对其与二花脸猪相关性状初生重、20日龄体重、断奶重及肌肉组织学特性的关系进行了分析。所有二花脸猪均表现为AADD型。邓肯氏(Dancans)差异显著性检验结果表明:(1)二花脸猪H FABP基因HH与Hh、hh基因型间20日龄体重差异显著(P<0 05),但对初生重及断奶重无显著影响;三性状值均表现为HH>Hh>hh。(2)在不同的基因型间,没有一个日龄组内的肌肉组织学性状值表现为差异显著,从侯选基因角度分析H FABP基因对肌肉粗脂肪含量的影响,发现趋向于HH>Hh>hh。     

泰和丝毛乌骨鸡耐热性AFLP标记鉴别研究

通过热应激试验,将45羽泰和丝毛乌骨鸡分为3个耐热性差异极显著的组(强、中、弱),用25对AFLP(Amplified fragment length polymorphism)引物组合对这3个组的池DNA进行了AFLP分析,结果发现,25对引物组合共检测到1800余条AFLP扩增带。8对引物扩增结果表现为单态,17对引物组合扩增结果有多态现象,其中E32／T32、E32／T38、E32／T49、E42／T32、E45／T32、E45／T486对引物组合检测到了耐热性强鸡群池DNA所特有的多态条带,而E32／T48、E39／T48、E42／T38和E45／T334对引物组合在耐热性差鸡群的池DNA中扩增到其特有的多态条带;这些与耐热性相关的AFLP多态标记在转换为STS后,对于日后定位、分离和鉴别鸡耐热性主效基因,或利用标记辅助选育策略,培育耐热性鸡新品系提供了有利的工作基础。     

含太湖猪血缘的四元商品瘦肉猪杂交组合的研究与推广

以太湖猪为母本、抗应激皮特兰或杜洛克为第l父本、无氟烷基因的长大或大长公猪为第2父本的土四元杂交组合，经过示范与推广，结果表明，杜（皮）太二元母猪初配情期受胎率87．88％，经产母猪情期受胎率达到95．16％，窝均产仔13．72头，产活仔13.29头，35d断奶窝重112．99kg；长大杜（皮）太等四元杂交瘦肉猪日增重684．44g，料重比2．96：1，瘦肉率61．91％；且无应激现象的发生，肉质正常，经济效益和社会效益非常显著。     

GH基因在5个藏猪群体中的遗传多态性分析

采用PCR-RFLP技术,扩增了5个不同地理类群藏猪群体(工布江达藏猪、米林藏猪、理塘藏猪、迪庆藏猪、合作藏猪)生长激素基因(GH基因)-119bp-+486bp之间的区域,分别用内切酶ApaI及Hin6I检测其多态性。结果表明:(1)从ApaI酶切产生的多态型来看,除理塘藏猪之外,A等位基因在其它4个藏猪群体中频率高于B等位基因;(2)从Hin6I酶切产生的多态型来看,在5个藏猪群体中C4频率较高、C1频率极低,而C3除在工布江达藏猪之外的其它猪种中的频率也很低,其基因型主要表现为C4C4、C2C4、C2C2;(3)利用Hin6I对扩增出的GH基因片段进行酶切电泳,在工布江达、迪庆、合作藏猪中发现一种特异酶切带型,初步判定GH基因在这些个体中可能为多拷贝基因。     

鸡SCD和Sirt1基因的SNP搜寻及其遗传多样性分析

硬脂酰辅酶A去饱和酶（Stearoyl—CoA desaturase,SCD）和Sirt1基因是位于鸡6号染色体的两个与脂肪代谢相关的功能基因。本研究以泰和丝毛乌骨鸡、杏花鸡、隐性白洛克鸡为研究材料,利用DNA池比较测序技术对鸡SCD和Sirt1基因的整个编码区进行SNPs搜寻,共检测出鸡SCD基因SNPs 13个,其中5个编码区SNPs（cSNPs）,2个为错义突变,10个为新发现的SNPs;检测出鸡Sirt1基因SNPs35个,其中10个cSNPs,2个为错义突变,18个为新发现的SNPs,另外有3处插入／缺失多态。对SCDC．492G〉A和Sirt1 c．1753G〉A位点在隐性白洛克鸡、杏花鸡、泰和丝毛乌骨鸡、白耳黄鸡、康乐鸡、南城黑鸡等271个个体中进行了PCR—SSCP检测,发现它们具有丰富的多态性,为这个染色体区域进一步的关联性分析提供了新的标记。     

中国地方猪种品种特异性遗传标签构建——以莱芜猪为例

我国拥有丰富的地方猪种资源,但地方猪种的保护和开发工作尚任重道远。建立完善可靠的生猪及猪肉产品追踪溯源技术体系对于建设优质安全猪肉品牌极其关键。传统的基于条形码、无线射频技术等的猪肉食品安全追溯技术,很难对从田间到餐桌的猪肉生产、屠宰、加工零售等环节实现全程精确而可靠的追溯。该研究以莱芜猪为例,对35个中外地方品种(中国地方猪种29个,培育品种2个,西方商品品种4个),共986头个体,进行60K芯片扫描判型;利用全基因组关联分析的case-control方法筛选出品种特异遗传位点,再结合主成分分析和邻近法进化树相互印证,构建了莱芜猪的品种特异性遗传标签组合并进行了验证:标签集为100个特异SNP位点,品种鉴别准确率达到100%。该研究所构建的品种特异性遗传标签可以准确地用于猪只个体及其猪肉产品的品种鉴别,为猪肉产品的追踪溯源奠定了坚实的技术基础,对我国地方猪种的品种保护和品牌猪肉深度开发提供了新的技术支撑。     

位置功能候选基因HMGA1、C6orf106和ENSSSCG00000023160与猪肢蹄结实度的关联性

【目的】建立一种通过内在的四肢骨关节评分来评估猪肢蹄结实度的方法,并计算关节评分与表观评估的肢蹄结实度之间的相关系数。此外,在F2、莱芜、二花脸、苏太和杜长大5个猪群中,研究三个位置功能候选基因HMGA1、C6orf106和ENSSSCG00000023160与猪肢蹄结实度之间的关联性。【方法】根据关节面裂痕的大小和深浅以及损伤的严重程度,对5块四肢骨的关节进行评分(1—5分)。如果关节面裂痕很大且很深,或损伤很严重,则评为1分;如果关节面没有裂痕和损伤,则评为5分。评分越高,说明关节越健康,肢蹄越结实。此外,基于笔者前期全基因组关联分析的结果,在猪7号染色体最强关联SNP两侧翼各0.2 Mb的区域内,筛选出HMGA1、C6orf106和ENSSSCG00000023160三个位置功能候选基因。在F2群体中,通过基因测序,搜寻这3个基因的多态位点,并根据多态位点在6个物种间的保守性,筛选出11个多态位点。利用Taqman探针,对3个HMGA1位点和3个C6orf106位点进行基因分型,而另一个基因的5个多态位点则通过基因型填补(genotype imputation)方法进行基因分型。最后,利用R软件Gen ABEL程序包,分析最小等位基因频率(MAF)大于0.05的多态位点与肢蹄结实度之间的关联性。【结果】在C6orf106和ENSSSCG00000023160基因中,分别鉴别到174和5个多态位点。关节评分之间呈显著的正相关,绝大部关节评分与蹄趾、肢蹄和步态评分之间无相关,而与肱二头肌长度和重量呈显著的负相关。公猪的肩胛骨关节评分极显著低于母猪的评分,但是臂骨肩关节和后肢跗关节评分显著高于母猪相应的关节评分。在F2群体中,3个候选基因均与肢蹄结实度关联,但是ENSSSCG00000023160的关联程度不如另外2个基因强,可以排除它为肢蹄结实度的因果基因。因此,该基因没有在其余的4个群体中进行检测。在二花脸群体中,HMGA1的g.2029CT和g.3155AG位点均与肢蹄结实度关联,另一个位点的MAF小于0.05。在其它3个群体中,HMGA1 3个位点的MAF都小于0.05。在莱芜群体中,仅C6orf106的g.6953TC位点的MAF大于0.05,该位点与肢蹄结实度显著关联。在苏太和杜长大群体中,C6orf106的g.2054TC和g.6953TC位点的MAF大于0.05,但它们与肢蹄结实度性状之间无显著关联。【结论】建立了一套利用四肢骨关节评分来评估肢蹄结实度的方法,该方法是对现有的表观评估方法的重要补充。因为蹄趾、肢蹄和步态评分与关节评分无相关,所以它们不能取代关节评分。关联分析结果排除了ENSSSCG00000023160是肢蹄结实度因果基因,但没有排除HMGA1和C6orf106的可能性,因此,有必要对这2个基因进行更深入的研究。