莺歌海盐场30%盐度晒盐池底泥中可培养芽胞杆菌资源遗传多样性研究

采用80℃水浴处理与稀释涂布法从莺歌海盐场30%盐度晒盐池底泥中分离获得215株芽胞杆菌。采用16S rDNA PCR-RFLP与16S rDNA序列分析技术,对分离的菌株进行遗传多样性分析。16S rDNA PCR-RFLP酶切图谱UPGMA聚类分析结果表明,在100%的相似性水平上,分离菌株归属到9种酶切类型。16S rDNA测序结果显示,这些菌株主要分布在Pontibacillus、Halobacillus、Oceanobacillus和Bacillus等4个属,其中Pontibacillus为优势属。有7株芽胞杆菌的16S rDNA序列与数据库中相应模式菌的最大相似性在97.4%~99.0%之间,有可能为芽胞杆菌新种资源。     

RT-PCR克隆人血清白蛋白cDNA及其序列分析

为了构建人血清白蛋白cDNA橡胶树乳管特异性表达载体，提取人工流产胎儿肝脏组织总RNA，采用RT—PCR法得到其改良cDNA，T／A测序后，采用NCBI BLASTn软件分析测得的序列及由此推导的氨基酸序列，与NCBI数据库中公布的HSA cDNA及氨基酸序列比较其同源率。结果表明，两者分别达到99．6％和99．5％。这为后期橡胶树乳管特异表达载体的构建和以转基因橡胶树来表达人血清白蛋白的研究打下了坚实的前期技术工作基础。     

利用REF启动子构建橡胶树乳管特异表达载体及GUS基因的瞬时表达

采用SDS法提取橡胶树基因组DNA,用2套引物进行PCR扩增,得到2条REF条带,它们与NCBI报道的REF序列间的同源性分别是98.9%,98.4%.用克隆得到的REF片段分别替换载体质粒pBI121中的CaMv35S启动子,得到利用橡胶内源性启动子构建的橡胶树REF启动子瞬时表达载体（pBIR1和pBIR2）.用基因枪法转化橡胶树组培苗叶片后,Gus组织化学检测显示叶脉为Gus染色阳性.研究中发现,长度为306bp的REF启动子片段可以实现REF启动子的全部功能.从而成功地构建了橡胶树乳管瞬时表达载体,为外源基因的橡胶树乳管特异表达载体的构建打下了基础.     

马尾藻有机肥发酵工艺优化及其对辣椒抗寒性的影响

【目的】研究马尾藻有机肥的发酵条件并评价其品质及其对辣椒抗寒性的功效，为海藻肥的制备工艺优化及农业应用提供一定理论依据。【方法】采用固态发酵工艺，以马尾藻、鸡粪、椰糠和桐子饼为发酵原料，以发酵温度为指标明确马尾藻有机肥制备过程中的碳氮比、初始含水量和发酵菌剂添加量，并进行有机质、全氮、全磷、全钾、pH、水分、重金属、粪大肠杆菌等检测。利用种子萌发试验检测其对植物的无毒性；采用盆栽试验，设置空白（CK）、市售有机肥、马尾藻有机肥处理，比较叶片的冷害指数、丙二醛、可溶性糖和脯氨酸质量分数，探究马尾藻有机肥对辣椒抗寒性的影响。【结果】马尾藻有机肥固态发酵的最适条件为碳氮比 25∶1、初始含水量 50%、发酵菌剂添加量 2%，此条件下发酵堆体最高温度达 69 ℃，55 ℃以上保持天数 6~7 d，制备的马尾藻有机肥有机质含量 72.46%、总养分 5.42%、水分 28.96%、pH 7.5、种子发芽率 89%，重金属含量极低且粪大肠菌群等指标均符合国家标准。与空白和市售有机肥处理相比，马尾藻有机肥处理的辣椒幼苗冷害指数分别降低20.70%、13.49%；丙二醛质量分数分别降低 23.41%、14.18%；可溶性糖质量分数分别提高 27.96%、21.94%；脯氨酸质量分数提髙 15.49%、9.01%；表明马尾藻有机肥可有效增强辣椒的抗寒性。【结论】马尾藻有机肥最适工艺条件为发酵碳氮比 25∶1、初始含水量 50%、发酵菌剂添加量 2%，且制备的有机肥品质达到相关国家标准，对植物无毒性，并能有效提高辣椒的抗寒性。