甘蔗蔗糖转运蛋白SoSUT5基因克隆、表达及功能鉴定

[目的]克隆甘蔗蔗糖转运蛋白基因SoSUT5,分析其表达特性,并通过转化酵母突变体验证其功能,为研究SUT5基因的功能提供理论依据.[方法]以甘蔗品种桂糖28(GT28)未成熟茎cDNA为模板,采用RT-PCR从甘蔗中克隆SoSUT5基因,并进行生物信息学分析及构建系统发育进化树.采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SoSUT5基因在甘蔗不同组织的表达情况,同时构建酵母表达载体并转化酵母突变体SUSY7/ura3进行基因功能验证.[结果]克隆获得的SoSUT5基因为1605 bp,编码534个氨基酸,GenBank登录号KF808328.SoSUT5蛋白的分子量和理论等电点(pI)分别为56.40 kD和8.36,具有12个跨膜结构,属于易化扩散载体(MFS)家族成员,也属于蔗糖/H+共转运体家族(GPH)成员.该蛋白具有保守的SUT蛋白功能域,是SUT5亚家族成员.在甘蔗生理成熟期,从成熟茎、花序、成熟芽和根中均能检测到SoSUT5基因表达,以在花序中的表达量最高,根次之,但在+1叶中检测不到.转pDR196空载体的酵母突变体SUSY7/ura3在以蔗糖为唯一碳源的MD培养基上不能生长,但转pDR-SoSUT5重组质粒的酵母突变体SUSY7/ura3能正常生长,说明SoSUT5蛋白具有蔗糖转运活性.[结论]SoSUT5基因编码蛋白具有转运蔗糖的生物学功能,在甘蔗蔗糖运输和积累过程中发挥调控作用.     

基于高通量测序的金钗石斛叶转录组数据分析

本研究采用Illumina Hiseq4000对金钗石斛(Dendrobium nobile)叶转录组进行测序,共获得5.6 Gb数据。组装并去冗余后得到61 998个Unigene,其总长度,平均长度,N50以及GC含量分别为53 773 338 bp、867 bp、1 482 bp和43.09%。将Unigene比对到七大功能数据库进行注释,最终分别有34 250(NR:55.24%),28 010(NT:45.18%)、22 029(Swissprot:35.53%)、13 384(COG:21.59%)、25 754(KEGG:41.54%)、7 731(GO:12.47)以及25 407(Interpro:40.98%)个Unigene获得功能注释。在KEGG数据库中,注释上的与碳水化合物代谢、萜类和黄酮类化合物代谢、以及多糖合成相关的Unigene分别有2 819个、706个和559个。根据注释结果共检测出34 096个CDS,未注释上的Unigene使用ESTScan预测后获得2 108个CDS。检测出7 165个SSR分布于6 264个Unigene中,其中在不同重复基序类型中,出现频率最高的为AG/CT,其次是AAG/CTT、AT/AT和AGG/CCT。同时,预测出1 234个编码转录因子的Unigene。该转录组测序分析为金钗石斛次生代谢和转录组方面研究提供了一定的理论参考。     

施用赤霉素对牛大力生物量和可溶性糖含量的影响初探

为揭示外源激素对植物幼苗生长发育的调控作用,实验采用不同浓度的赤霉素施用于南药牛大力植物,测定了其株高、叶片厚度,块根生物量、可溶性糖含量等生长指标。研究结果表明:不同浓度赤霉素均对牛大力幼苗的生长具有一定的促进作用。在赤霉素浓度为0～100 mg/L的范围内,随着赤霉素浓度的增加,牛大力株高、叶片厚度、块根生物量、可溶性糖含量均呈现先增加后减少的趋势。其中,浓度50 mg/L的赤霉素促进牛大力生长最明显,其株高、叶片厚度、块根生物量和可溶性糖含量的积累分别为69.5 cm、0.22 cm、16.27 g、22.09 mg/g。在牛大力栽培生产上,选用50 mg/L赤霉素处理浓度效果最理想。     

产β-葡萄糖苷酶罗尔夫青霉发酵条件的优化

为提高罗尔夫青霉(Penicillium rolfsii)HXL菌株产β-葡萄糖苷酶的能力,探明β-葡萄糖苷酶的酶学性质,采用单因素与正交试验方法,对HXL摇瓶发酵条件进行统计学优化研究。结果表明:菌株HXL优化发酵条件为麸皮3%+酵母膏4g/L+KH_2PO_4 0.2%+水杨苷0.05%,接种量6%,装液量75mL/250mL,起始pH 6.0,培养温度30℃,摇床转速180r/min,培养时间144h。在此条件下,菌株HXL产β-葡萄糖苷酶量从原来的1.32U/mL增至21.68U/mL。β-葡萄糖苷酶的最适温度为60~70℃,最适反应pH 3.5~5.0;在60℃以下及pH 3.0~6.0均能保持稳定;Mn2+对酶有激活作用,而Cu2+对酶有明显的抑制作用。     

猪圆环病毒2型Cap蛋白与热休克蛋白DNAJC7的相互作用研究

为探究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与热休克蛋白DNAJC7的关系,用Cap与DNAJC7蛋白的重组杆状病毒质粒pFast-GST-Cap和pFast-DNAJC7共转染sf9细胞,并用免疫共沉淀试验(Co-IP)检测.结果显示,沉淀Cap蛋白后能检测到DNAJC7蛋白条带,且沉淀DNAJC7蛋白后能够检测到Ca...     

桉树叶二种酶和蛋白质的季节与年际变化

桉树是中国南方地区的重要用材树种,探讨其贮藏氮素循环机制对于提高桉树人工林氮素利用水平具有一定的研究意义。试验以桉树枝叶组织为研究对象,在观察其物候期基础上,采用紫外分光度法测定了桉树叶蛋白质含量及谷氨酸合成酶和谷氨酰胺合成酶活性的动态变化。结果表明,秋季桉树叶中的可溶性蛋白含量最低,而在次年的春季其含量最高;夏季其含量则处在春季和秋季中间。谷氨酸合成酶活性在秋季为最高,在次年春季为最低。谷氨酰胺合成酶活性在秋季表现为最高,在次年的春季则表现为最低。桉树叶中的可溶性蛋白含量、谷氨酸合成酶活性以及谷氨酰胺合成酶活性与年份和季节密切相关,三者分别呈现出不同的变化趋势。     

苏铁种子萌发研究

以浓硫酸浸种、机械破皮、生根粉浸泡3种处理方法对不同贮藏时间苏铁种子进行处理,研究不同处理方式对苏铁种子萌发的影响。结果表明:浓硫酸处理6h内,可以提高苏铁种子的发芽率;苏铁种子经浓硫酸酸蚀6h后再用生根粉浸泡5h,发芽率可达98.7%;完全去掉中种皮并使用生根粉浸泡1h,发芽率达97.2%;当年采摘的苏铁种子发芽率比贮藏1、2年的发芽率高。     

盐胁迫对罗汉果幼苗生长和叶绿素荧光参数的影响

为揭示罗汉果幼苗对盐胁迫的响应,本文研究了不同浓度NaCl溶液胁迫处理罗汉果幼苗生长和叶绿素荧光参数的变化。结果表明：随着盐胁迫浓度的升高,罗汉果幼苗茎叶、根系质量、及叶绿素a、叶绿素b和叶绿素a+b的含量逐渐减小,在40 mmol/L以上盐胁迫下茎叶鲜质量及叶绿素含量显著低于对照组；随着盐胁迫浓度的升高,F_o逐渐升高,F_m、F_v/F_o和F_v/F_m都逐渐减小,F_v"/F_m"和qP先增加后减小,qN逐渐升高,罗汉果幼苗的光化学量子产额(Φ_PSⅡ)逐渐下降,尤其在120 mmol/L处理组罗汉果幼苗叶绿素含量、叶绿素荧光参数均变化明显。综上可知,40 mmol/L以上盐胁迫对其生长特性、植株光合作用影响较大,120 mmol/L以上盐胁迫则严重抑制了罗汉果幼苗的生长、叶绿素含量及荧光特性。     

引种紫锥菊中松果菊苷含量的分析测定

采集云南省蒙自市引种栽培的紫锥菊,以其根、茎、叶和头状花序为试材,采用高效液相色谱(HPLC)方法研究了松果菊苷的定量分析方法,并对建立的分析技术进行方法学考察,运用该定量分析技术对紫锥菊中不同部位的松果菊苷含量进行测定。结果表明:松果菊苷含量在0.021～0.321μg范围内与峰面积之间呈良好的线性关系,平均加标回收率为93.24%,RSD值为1.28%;紫锥菊不同部位松果菊苷含量在0.075%～0.221%范围内,且叶、头状花序中松果菊苷含量显著高于根和茎中含量。建立的松果菊苷测定分析方法定性定量准确、可靠、重现性好,可用于紫锥菊药材中松果菊苷的质量评价;云南省蒙自市引种栽培生产的紫锥菊药材中松果菊苷含量较高,优于国外原产地及国内报道的引种栽培区。     

猪热休克蛋白40(Hsp40)基因的克隆及过表达和RNA干扰载体的构建

热休克蛋白(Hsp)是在各种生物体内广泛分布的一类具有高度保守性、短时性、多样性等特点的热应激蛋白质,参与细胞的多种生理生化活动。已有研究表明,Hsp40在多种病毒感染细胞的过程中发挥重要作用,但其对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的影响及机制尚不清楚。为了探究Hsp40在PCV2感染中的生物学功能,在克隆猪Hsp40基因CDS区全基因序列的基础上,采用双酶切位点法分别构建猪Hsp40基因的过表达载体和RNA干扰载体。该研究为猪Hsp40转基因细胞株的构建搭建好平台,同时也为挖掘猪Hsp40对PCV2感染的响应机制提供极大的便利。