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经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的cDNA克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis4.5,筛选到重组质粒命名为rpBacHisH7HA。测序正确后,在脂质体介导下,与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数株重组杆状病毒rBacHisH7HA。提取重组病毒DNA经PCR证明目的基因片段已插入杆状病毒基因组。 相似文献
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蔬菜是一种极易累积硝态氮的植物,尤其是茎叶类蔬菜,采收时期正是茎叶旺盛生长时期,也是根系旺盛吸收硝态氮的时期,体内的硝态氮来不及转化,便出现大量累积,这种累积虽无害于植物本身,却严重危害人类健康。硝酸盐对蔬菜的污染主要是通过大量施用化肥 相似文献
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草莓轻型黄边病毒CP基因的克隆、序列分析及原核表达 总被引:2,自引:0,他引:2
克隆草莓轻型黄边病毒CP基因,并构建其原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达CP蛋白。利用SMYEV的检测引物,通过RT-PCR技术筛选带SMYEV的草莓植株;根据NCBI中SMYEV序列设计扩增CP基因全长引物,通过RT-PCR获得SMYEV沈阳分离物CP基因全长序列;将CP基因克隆到原核表达pGEX-6P-1上,利用IPTG诱导CP基因在大肠杆菌BL21(DE3)中表达蛋白。利用RT-PCR扩增获得SMYEV分离物SY05的CP基因全长序列,由729个核苷酸组成,编码242个氨基酸残基。SY05与其他SMYEV分离物的核苷酸同源性为80.1%~97.4%,氨基酸同源性为92.1%~99.6%,其中,与SMYEV分离物SY03的氨基酸一致性为98.3%。将SY05的CP基因成功克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建了重组表达载体p6P-EV-CP,并将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导SMYEV分离物SY05的CP基因在大肠杆菌中表达出分子量为52.0 kDa的融合蛋白。克隆出SMYEV分离物SY05的CP基因,实现了其在原核细胞中的表达,为SMYEV抗血清的制备奠定了重要基础。 相似文献
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<正>为了推进农民科学素质行动,加快农业科技进村入户步伐,增强科技对发展现代化大农业的支撑能力,培养造就有文化、懂技术、会经营的新型农民,中化化肥黑龙江分公司与农业部积极配合,共同创办了农民田间学校。近日,该农民田间学校在绥化市举行了隆重地揭牌仪式,与此同时授课也正式开始。黑龙江省农业技术推广总站副站长杜成福在揭牌仪式上发表了讲话,他说:"农民田间学校是以农民为中心,以田间为课堂,采用非正式成人教育的方法,以启 相似文献
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尼帕病毒病是由尼帕病毒(Nipah virus,Ni V)引起的人畜共患病。尼帕病毒主要侵害中枢神经系统和呼吸系统,引起多种动物和人类严重脑炎和呼吸系统疾病,出现急性发热、头痛和不同程度的意识障碍。由于发病率和死亡率高,因此,Ni V被美国疾病控制中心列为最危险的生物安全4(P—4)级病原。 相似文献
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草莓不同器官中microRNA表达差异研究 总被引:3,自引:0,他引:3
MicroRNA(miRNA)在植物的生长发育过程中起着重要作用。以CTAB法提取的总RNA为模板,通过设计茎环反转录引物,利用实时RT-PCR技术对草莓根系、花托、茎尖和叶片4种器官中的6种miRNA进行了表达差异研究。以草莓叶片中6种miRNA的表达量为1,差异表达结果显示miR164在草莓花托中高度表达,达到6.615,明显高于根系(0.485)、茎尖(0.371)和叶片(1.000);miR172在茎尖和花托中的表达量都较低,分别为0.029和0.020,在根系中的表达量更低,只有0.0008454;miR167在根系中表达也很低,只有0.053;miR156,miR159和miR165在4种草莓器官中的表达差异不明显。这些结果为进一步验证miRNA基因在草莓植株生长发育过程中的作用奠定了基础。 相似文献
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