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【目的】 探索猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S蛋白的结构和功能,为建立PEDV感染的诊断方法和疫苗开发提供理论依据。【方法】 以PEDV经典CV777株为模板,通过PCR扩增获得S、S1基因片段;PCR扩增产物分别克隆pET-30a (+)原核表达载体和pFLAG-CMV-3真核表达载体,构建原核表达质粒pET-30a-PEDV-S和真核表达质粒pFLAG-CMV-3-PEDV-S1;将pET-30a-PEDV-S转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达PEDV-S重组蛋白,通过变性、复性、浓缩纯化重组蛋白并进行Western blotting检测;将PEDV-S重组蛋白免疫C57BL小鼠制备多克隆抗体,获得的多克隆抗体经间接免疫荧光试验(IFA)检测特异性,通过间接ELISA法检测多克隆抗体效价;将pFLAG-CMV-3-PEDV-S1转染至HEK293T细胞,以制备的多克隆抗体为一抗,经IFA测定PEDV-S1蛋白的抗原性和多克隆抗体的反应性。【结果】 成功克隆出PEDV S和S1基因,构建了可表达PEDV-S重组蛋白的原核表达质粒和在HEK293T细胞中高效表达S1蛋白的真核表达质粒;PEDV-S重组蛋白在IPTG为0.5 mmol/L、16 ℃诱导8 h条件下可获得最高表达量,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,PEDV-S重组蛋白成功表达;ELISA检测结果显示,制备的多克隆抗体效价达1:3 280 500;IFA结果显示,多克隆抗体有良好的特异性,可特异性识别PEDV-S和PEDV-S1蛋白。【结论】 本研究获得了PEDV-S重组蛋白,并成功表达S1蛋白,制备出PEDV-S蛋白多克隆抗体,为研究S蛋白的结构和功能提供了条件,为揭示PEDV致病机制奠定了基础。 相似文献
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<正> 合理利用水土等资源,改善农业生态条件,搞好多种经营的大农业,是华北平原农业发展的根本方向。在这当中,合理利用水资源根治水害是农业发展的重要问题之一。解放以来,在广阔的大平原上挖河筑堤,修渠打井兴建了数以万计的水利工程系统,防洪涝灾害,兴灌溉之利,对农业生产的发展起了一定的作用,这是应当予以肯定的。但是,兴水利、治水害重点着眼于大平原本身是不够的,还必须重视搞好上游山区的水土保持。虽然过去也在山区修建了许多水库和塘坝,但如不搞好水土保持,就很难发挥这些水利工程的有效性和保证它们本身的寿命。 相似文献
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三氯异氰尿酸防治草鱼细菌性疾病初步研究 总被引:2,自引:0,他引:2
三氯异氰尿酸(TCCA)比漂白粉等无机氯制剂杀菌力强,TCCA水溶液中有效氯是以次氯酸分子的形式存在;漂白粉在水中释放的有效氯则是以次氯酸盐离子的形式存在。据测定,次氯酸分子的杀菌能力为次氯酸盐离子的100倍左右。 相似文献
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经过Co~(60)r射线照射的马铃薯和洋葱,由于呼吸强度下降,蒸发和营养损耗降低,贮藏期间的损耗减少,但高剂量处理由于降低了抗病力腐烂增加。两年的试验结果表明,洋葱最适处理剂量为5000伦琴,而马铃薯为10000伦琴以上。对照的洋葱发芽率高于其它处理的。对照的还原糖占总糖的百分率增加,而Co~(60)r射线处理的减少了。洋葱贮藏后期抗坏血酸的含量增加,而r射线抑制了发芽和代谢,抗坏血酸含最低于对照。 相似文献
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2008年5月12日,受汶川8级特大地震影响,青神县发生了相当于5-5.5级地震,其后多日余震不断,造成全县机电提灌站损毁26座,提灌机械损毁124台套,各种农业机械损毁(不含提灌站设备)12台套,机 相似文献
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自到小型发电站工作后,多次遇到发电机三相电压不平衡和电压不稳定的情况。实践中自已有了点寻找故障原因和处理故障的经验。今借贵刊一角,与同行谈一谈。 相似文献
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核桃仁乳乳化稳定关键技术张天箴,房淑珍,郗荣庭(河北农业大学保定071001)核桃仁是一种传统高级滋补食品,有“万岁子”、“长寿果”之美称,它富含不饱和脂肪酸、蛋白质及人体必需氨基酸、多种矿物质及微量元素,具有补气养血、润燥化痰、温肠补肾、乌发健脑等... 相似文献