柑橘苗期SSR鉴定分析体系的优化及初步应用

本文以柑橘幼苗微量叶片(3～5 mg)为材料,改进柑橘基因组DNA提取方法,并对3种PAGE凝胶浓度和3种银染色方法进行了筛选和优化,建立了一种经济,高效的柑橘苗期SSR分析体系.试验结果表明:该微量叶片提取方法需材少,用时短,所提取基因组DNA质量好、纯度高,完全适用于SSR-PCR扩增反应.9%的PAGE凝胶浓度最适合柑橘SSR标记的电泳检测,扩增出的条带清晰,分散良好.改进的两种快速银染方法相对于传统的染色方法染色效果较好,且更加经济.初步对两个柑橘杂交幼苗群体进行了遗传鉴定和分析,2对引物从24株沙田柚与强德勒柚杂交幼苗中鉴定出17株杂种,4对引物在沙田柚与红江橙杂交群体中扩增出14条多态性条带,占总条带数的70.0%.表明所建立的SSR优化体系可为柑橘分子辅助育种提供技术参考.     

刺梨ISSR-PCR反应体系的建立和优化

以刺梨为试材，对影响ISSR．PCR扩增结果的主要影响因素包括Mg^2＋、TaqDNA聚合酶、dNTPs、引物、模版DNA的浓度及引物退火温度进行了优化筛选。确立了适合刺梨ISSR．PCR分析的最佳反应体系，即20μL反应体系中各组分浓度分别为：10×buffer 2．0μL，Mgz＋1．875mInoI／L。TaqDNA聚合酶1．0U，dNTPs0．1mmol／L，引物2．0μmol／L，模板DNA20ng。PCR扩增程序：94。c预变性5min，94℃变性1min，48℃退火温度45S，72℃延伸1min，34个循环，72℃后延伸6min。利用优化体系对3个刺梨品种进行体系稳定性检测，结果表明该优化体系的重复性和稳定性良好。     

猕猴桃细菌性病害的发生及抗性研究进展

对4种严重为害猕猴桃的细菌性病害（溃疡病、花腐病、叶枯病、根癌病）,从病害的发生、侵染、抗性机制和育种等方面的最新研究进展做了综述,提出猕猴桃抗病育种存在的问题,并结合作者对猕猴桃抗病育种的相关研究,展望了猕猴桃抗病育种的前景。     

‘红江橙’天然多倍体的45S rDNA荧光原位杂交分析

 以实生筛选获得的红江橙三倍体和四倍体植株及其二倍体对照为试验材料,利用荧光原位杂交（Fluorescence In situ hybridization,FISH）技术分析了不同倍性红江橙体细胞染色体上45S rDNA的分布。结果表明,红江橙二倍体体细胞中期染色体中存在3个45S rDNA杂交位点,分别位于第1对染色体的核仁组成区和第8号染色体的整个随体上;三倍体体细胞中期染色体中存在4个杂交位点,其中有三个与二倍体基本相同,另外的一个位于第3号染色体的核仁组成区;四倍体体细胞中期染色体中存在6个杂交位点,分布的位置及区域和信号的强弱均与二倍体基本相同。供试材料体细胞间期核与中期染色体中的杂交信号数及强弱程度基本相似。通过分析,提出红江橙三倍体的形成与2n雌配子的形成有关,伴随有外源基因组的重组;四倍体可能产生于珠心系细胞的直接加倍,并且伴随有染色体的断裂和易位。     

李种质资源ISSR鉴定及亲缘关系分析

为了更好的利用目前收集得到的李资源,对重庆地方李品系和国内外引进的李品种共40份资源进行了ISSR分析。从100条引物中筛选出13条多态性引物,共扩增得到134条带,多态性条带109条,多态性百分率为81.3%,其中9条特征性谱带可用于品种鉴定和系谱分析的参考性标记。此外,13条引物可将40份材料完全区分开来,图谱分析表明不存在同物异名现象。UPGMA聚类分析将供试品种分成2组,进一步可细分为4个亚组;主坐标分析将其分成6类,其中奉节李、脆红李和万盛鸡血李分别单独成类。2种分析方法所得的结果均与按原产地划分的结果不完全相符,奉节李、脆红李和万盛鸡血李与其余品种(品系)的亲缘关系较远。来自江苏的早黄李与日本和美国李品种间的亲缘关系相对较近,初步推测国外中国李可能来源于我国华东地区。     

柚优良品种——龙安柚

龙安柚是1986年在四川省广安县选出。母树为30年代从外地引进,现保留的为50年代从母树上高空压条获得的第二代母树。“八五”期间已推广发展到60余万株。龙安柚具有丰产稳产、无核或少核、质优的特点。1986年送南充地区鉴评,名列前矛,定为     

单胚清见橘橙×椪柑产生高比例多胚种子及多胚有性的分子检测

 多胚现象是柑橘研究及育种实践中一个重要问题。为了避开珠心胚的干扰 ,育种实践中常采用单胚材料作母本。清见橘橙是柑橘杂交育种中一个比较优良的单胚材料 ,以其为母本配制了 7个杂交组合。当父本为强德勒柚和塔罗科血橙时 ,只产生单胚种子 ;父本为脐血橙梨形橙和冰糖橙时 ,产生较低比例的多胚种子 ,为 3.5 %～7.2 %;而以新生系 3号柑和太田柑为父本时 ,则产生高比例的多胚种子 ,达 2 8.4%～ 44 .2 %。通过连续 2年杂交试验 ,发现清见×柑产生高比例多胚种子现象比较稳定。此现象与前人研究的结论有明显不同 ,前人多认为单胚柑橘一般只产生单胚种子 ,即使有时也产生多胚种子 ,但其比例较低 ,一般不超过 7%。为此 ,笔者对清见×新3号柑的多胚种子进行了分胚培养 ,获得多胚苗 ,并取部分幼苗叶片进行RAPD分析。分析发现多数多胚苗具有父本的特征带或具有与母本明显不同的带型 ,肯定为有性后代 ;而且这些多胚苗大部分在遗传上非常一致 ,可能为同一受精卵分裂而来 ,但也发现所检测的部分多胚苗之间还存在差异谱带 ,可能为多卵受精发育而来 ,或在同一受精卵分离后出现了明显的变异。     

柑桔多倍体育种研究进展

染色体多倍化现象是促进植物进化的重要基础 ,在被子植物中 ,约 70 %的种类在进化史上曾发生过一次或多次多倍化过程[1] 。尽管柑桔相对而言发现的自然多倍体较少 ,但柑桔中的天然多倍体类型很早就引起了育种学家们的注意[2 ] 。尤其是近年来随着生物技术的快速发展 ,原生质体融合技术的逐步成熟与胚抢救技术在柑桔多倍体育种中的应用 ,成为克服柑桔多倍体育种中的珠心胚干扰、有性不亲和和天然四倍体较少等的有利工具 ,使得三倍体无核柑桔育种及多倍体作为砧木抗性育种材料的研究成为热点。因而 ,重视和利用柑桔的多倍性改造现有的遗传资源…     

热激处理对枇杷2n花粉发生率的影响

以龙泉1号枇杷为试材,用热激处理诱导小孢子2n配子的发生;并通过观察天然四倍体枇杷花粉,研究其中正常花粉与2n花粉在形态上的异同及其所占的比例。结果表明:30℃/12 h的处理可以使枇杷2n花粉的发生率由对照的0.26％提高到2.64％,败育率约为2.44％。32℃/12 h处理过后的枇杷花粉由于败育率达到20％以上,不能准确计算2n花粉所占比例;在天然四倍体枇杷花粉中存在四种直径不同的花粉,即45μm左右的特大花粉、31μm左右的大花粉。25μm左右的中型花粉和18μm左右的败育花粉,其比例分别为0.1％、54.52％、19.32％和26.06％。     

“大五星”天然三倍体枇杷株系的SSR分析

利用从103对简单重复序列(SSR)引物中筛选出的62对多态性引物,对8份"大五星"天然三倍体枇杷株系和1份二倍体枇杷单株进行PCR扩增,共扩增出152个等位位点,每个位点扩增出2~3个等位基因,平均2.45个,引物多态信息量介于0.099至0.586之间,平均多态信息量为0.358.62对SSR引物将供试枇杷株系完全区别开,各株系间Dice相似系数范围为0.493~0.954,A376与A368株系之间的Dice相似系数最高,A313与A332株系之间的Dice相似系数最低.在62对引物中,CL22.Contig1,NZ02b01,Hi15h12,EJ014,CH04c06和CH01h02共6对引物能鉴定出A379,A322,A348和A332这4个"大五星"天然三倍体枇杷株系的倍性.