Percoll不连续密度梯度离心法分离红螯光壳螯虾血细胞

建立了利用Percoll不连续密度梯度离心分离红螯光壳螯虾血细胞的方法,并对配制分离体系的缓冲液以及分离体系的密度组成进行了优化。结果显示,由20%、65%和100%的Percoll组成的分离体系分离效果最优。在转速为1 810 r/min的条件下离心20 min之后,可将红螯光壳螯虾血细胞分为SGC与GC 2个细胞层。经流式细胞术分析,发现细胞层纯度均在95%以上,细胞死亡比率低于1.5%,可用于后续的细胞功能分析。此方法简单有效,为后续研究螯虾的免疫防御机制及病害防治方法奠定了基础。     

理化因素对川泽泻凝集素血细胞凝集活性的影响

[目的]明确温度、pH和金属离子等理化因素对川泽泻凝集素血细胞凝集生物学活性的影响。[方法]川泽泻块茎经研磨、浸取、硫酸铵沉淀、离子交换和亲和层析柱分离纯化得到凝集素(Alisma plantago-aquatica Linn.Lectin, APL),然后用系列温度、pH和金属离子等理化因素处理凝集素样品，应用倍比稀释法检测凝集素凝集人类血细胞活性。[结果]APL对家兔、家鸡、鲤鱼等动物血细胞无凝集作用，能使人ABO 4种类型血细胞发生不同程度凝集，对A型血细胞凝集活性明显高于其他3种血型红细胞。用20～100℃以10℃梯度处理后，川泽泻凝集素在20～40℃凝集活性很强，50℃凝集活性开始降低，在70℃仅具42%的凝集活性，80℃加热10 min完全失活；当pH为低于5.4或高于7.6时，凝集活性逐渐降低，当pH≤3.4或pH≥9.0时，川泽泻凝集素失去血细胞凝集活性；用EDTA透析后凝集素凝集活性基本消失，Ca²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、K⁺等离子能使凝集素凝集活性不同程度恢复。[结论]川泽泻凝集...     

中华绒螯蟹的血细胞组成、分类及免疫学功能

为了解中华绒螯蟹血细胞组成、分类及其在免疫应答过程中起到的重要作用,本研究通过细胞化学和细胞酶学分析,并结合细胞形态观察,对中华绒螯蟹血细胞的组成、分类进行了研究。同时,通过人工感染嗜水气单胞菌后血液的总血细胞数(THC)和不同类型血细胞数(DHC)的变化,研究不同类型血细胞在免疫应答过程中所发挥的作用。结果显示,依据本实验分类方法,中华绒螯蟹血细胞可以分为4类:大颗粒细胞(G)、中间型颗粒细胞(IG)、小颗粒细胞(SG)和透明细胞(H)。其中小颗粒细胞数量最多,约占33.54%±0.98%,中间型颗粒细胞最少,仅占15.31%±2.01%。4种类型细胞中均含有多糖成分而不含脂质,只有大颗粒细胞在酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、β-葡萄糖醛酸酶以及酚氧化酶染色中发现阳性反应。此外,嗜水气单胞菌感染后中华绒螯蟹总血细胞数在3 h后明显升高,在6 h达到峰值,约9.57×106个/m L,并显著高于未处理组和生理组;在感染过程中,大颗粒细胞数量明显下降而透明细胞数量明显上升,这种现象在6 h时达到顶峰并随着时间延长而逐渐恢复至正常水平。研究表明,在中华绒螯蟹非特异性免疫应答过程中,透明细胞主要通过大量增殖执行吞噬功能来参与免疫应答,而大颗粒细胞主要通过裂解释放胞质中所含免疫相关酶参与免疫反应。其中,各类型细胞之间可能存在相互转化作用,而中间型颗粒细胞为这种转化中的过渡类型。     

流式细胞术与显微观察对罗氏沼虾血细胞的比较研究

应用流式细胞术和显微观察对罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）血细胞的分类分群和各类细胞组成比例进行研究，比较2种方法的优缺点。应用显微观察，根据细胞颗粒的有无和大小以及细胞染色情况，可把罗氏沼虾血细胞分为透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞。根据其血细胞的前向角散射光（FSC）和侧向角散射光（SSC）特性的不同，也将血细胞分为3个亚群：透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞。检测各种细胞所占的比例，2种方法测得比例均为：小颗粒细胞〉大颗粒细胞〉透明细胞；2方法的结果存在显著差异（P〈0．05），但相关性极显著（P〈0．01）。利用流式细胞术可更快捷、准确，减少人为误差，显微观察可对细胞内部结构进行更深入的分析，并可进行细胞实际大小和细胞密度的测定。2种方法互补不足，可更快速、准确、全面地进行细胞基础特征的研究。     

101例犬睾丸肿瘤病例的回顾性分析

调查犬睾丸肿瘤的发病及治疗情况，探讨原发肿瘤及骨髓抑制对疾病预后的影响。从中国农业大学动物医院2020年5月至2022年7月接诊的病例中筛选出101例符合要求的睾丸肿瘤病例，记录患犬的基本信息、实验室检查结果、诊断信息及治疗和预后情况进行统计学分析。结果显示，常见的睾丸肿瘤有间质细胞瘤(51.7%)、精原细胞瘤(27.3%)、支持细胞瘤(17.5%)。腹内隐睾常见的肿瘤类型为支持细胞瘤(76.9%),睾丸肿瘤的主要发病品种为贵宾犬(22.8%)、金毛寻回猎犬(19.8%)、杂种犬(8.9%)。睾丸肿瘤平均发病年龄为10.9岁，不同类型肿瘤发病年龄无显著差异(P>0.05)。并发全血细胞减少症的患犬预后差，存活期均未超过30 d。犬睾丸肿瘤患病动物的半年以上、1年以上和2年以上存活率分别为88.4%、73.8%和44.4%,死亡病例当中大部分(61.5%)死因与睾丸肿瘤无关。     

重金属对罗氏沼虾血细胞活性和酯酶活力的影响

为探讨不同重金属对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)血细胞的细胞毒性,取罗氏沼虾血淋巴,离体状态下分别暴露于不同浓度(10~(-9)~10~(-3) mol/L)的Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)环境中6 h,设置不添加重金属的对照组,应用流式细胞术测定细胞活性和胞内非特异性酯酶活力。结果显示,10~(-9)~10~(-6) mol/L的Cd~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Cd~(2+)浓度达到10~(-5) mol/L时,酯酶活力受到了显著的抑制,Cd~(2+)浓度达到10~(-4)和10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降;10~(-9)~10~(-6) mol/L的Hg~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Hg~(2+)浓度为10~(-5)~10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降;10~(-9)~10~(-5) mol/L的Cu~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Cu~(2+)浓度为10~(-4)~10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降;10~(-9)~10~(-5) mol/L的Zn~(2+)对细胞活性和酯酶活力均没有显著影响,Zn~(2+)浓度为10~(-4) mol/L时,酯酶活力显著下降,Zn~(2+)浓度为10~(-3) mol/L时,细胞活性和酯酶活力均显著下降。Cd~(2+)、Hg~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)对细胞活性的毒性临界浓度分别为10~(-4) mol/L、10~(-5) mol/L、10~(-4) mol/L和10~(-3) mol/L,毒性强度由高到低依次为Hg~(2+)、Cd~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)。Cd、Hg、Cu和Zn这4种重金属对罗氏沼虾血细胞活性和酯酶活力均具有明显的剂量效应;酯酶活力对重金属胁迫较细胞活性更为敏感,可作为虾类细胞毒理学研究的重要指标。     

硫化物胁迫对凡纳滨对虾血细胞的毒性影响

硫化物是水产养殖过程中常见的水体污染物之一。为探讨水体硫化物胁迫对虾类血细胞的毒性影响,以不同浓度(0.5 mg/L,2.0 mg/L)的硫化物对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)进行胁迫,于胁迫后6、12、24和48 h取血淋巴,应用流式细胞术测定血细胞的总数(THC)、活性氧(ROS)含量、一氧化氮(NO)含量以及凋亡率。结果显示,经0.5 mg/L硫化物胁迫48 h后,对虾THC显著下降至11.78×10~6个/mL,为对照组的72.7%(P0.05),ROS含量为对照组的225.2%(P0.05),血细胞凋亡率显著上升至7.42%(P0.05);经2.0 mg/L硫化物胁迫6 h开始,对虾THC呈现显著的下降(P0.05),血细胞ROS含量和凋亡率显著提高(P0.05);表明硫化物胁迫刺激对虾血细胞产生大量ROS,诱导血细胞凋亡,从而导致THC下降,这一过程可能是硫化物导致虾类细胞免疫下降的重要机制;随着硫化物浓度的升高,其细胞毒性作用明显提高。血细胞NO含量在2.0 mg/L硫化物胁迫12和48 h时显著升高(P0.05),推测NO可能在硫化物胁迫防御调控中起着信号因子的作用。     

青石爬鮡血浆生化指标、血细胞分类与发生

对40尾野生青石爬鮡进行了血液生化指标、血细胞分类与发生研究。测得血浆的总蛋白为(48.35±3.60) g/L，白蛋白为(8.73±0.54) g/L，球蛋白为(39.63±3.10) g/L，血浆白蛋白与球蛋白比为(0.22±0.01)，甘油三酯为(5.05±2.14) mmol/L，总胆固醇为(16.66±3.64) mmol/L，极低密度脂蛋白为(1.01±0.43) mmol/L，葡萄糖为(5.27±2.43) mmol/L。血液生化指标检测结果表明，青石爬鮡血浆中总蛋白与球蛋白、甘油三酯与胆固醇较高，葡萄糖较低，具有活动量较大和冷水性鱼类的特点，主要利用脂肪和蛋白质作为能量。细胞学显示出其外周血液包含红细胞，核影，淋巴细胞，血栓细胞，嗜中性粒细胞和单核细胞。血涂片计数为红细胞96.58％，其中成熟红细胞占65.92％，幼稚红细胞占30.66％。白细胞为3.42％，其中嗜中性粒细胞0.14％、单核细胞0.07％、淋巴细胞2.37％、血栓细胞0.85％。白细胞中淋巴细胞和血栓细胞数量较多。原始血细胞主要在中肾和头肾中，在脾脏中也有部分原始白细胞，而肝脏和外周血液中未见原始血细胞。中肾和头肾是青石爬鮡的主要造血器官，其中红细胞主要由头肾产生，白细胞主要由中肾产生。脾脏亦产生少量白细胞。