隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。     

消毒剂对贝氏隐孢子虫卵囊活力影响的初步研究

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是寄生在脊椎动物的呼吸道和胃肠道粘膜上皮微绒毛区的单细胞原虫病。严重时可导致畜禽死亡,所以近年来引起了人们的重视。隐孢子虫卵囊的抵抗力很强,很多消毒剂不能将其杀灭。Sundermann曾尝试用9种常用的消毒剂进行杀灭卵囊研究,结果发现对其影响很小或无影响。陈业矫等亦报道隐孢子虫卵囊对碘酊、次氯酸苄可尼、氯化苄可尼、氢氧化钠液具有很强的抵抗力。因而,卵囊的杀灭是防治隐孢子虫病一个不可忽视的大问题。为了寻找有效的消毒剂,作者选择了一些国内新近研制使用的消毒剂,和一些较常用的消毒剂,进行了对贝氏隐孢子虫卵囊活力影响的研究,旨在为商品化养鸡提供有效的消毒方法,保障环境免遭污染和促进养鸡业的发展。     

银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因

以柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料，用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板．用Oligo（dT）12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带，进行2次PCR扩增，产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后，再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现，地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段（可能为新的基因片段），这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。     

鸡球虫田间混合种和柔嫩艾美球虫单一种的抗药性试验

用上海某鸡场分离的球虫田间混合种及从其中分离纯化的4株柔嫩艾美球虫（Eimeria tenella)单一种对常用抗球虫药的抗药性进行检测，发现该球虫田间种对氯羟吡啶（clopidol)，马杜拉霉素（maduramicin)，莫能菌素（monensin), 氨丙啉（amprolium)4种抗球虫药已产生完全抗药性，对氯苯胍（robenidine)轻度抗药，对地克珠利（diclazuril)无抗药性，4株柔嫩艾美球虫单一种对氯羟吡啶，马杜拉霉素，莫能菌素，氨丙啉的抗药谱与该球虫田间混合种基本一致。     

球虫病的免疫 :活疫苗的作用

前言　　自从1965年CoccivacTM的问世及20年后的ImmucoxTM的研制成功以来,抗鸡球虫病的活卵囊疫苗已经在家禽工业中得到应用,共有4种品牌的30亿头份以上的疫苗已经销售给养鸡场。这两种疫苗(CoccivacTM和ImmucoxTM)所包含的卵囊株最先是由田间分离的,而另两种疫苗(Paracox...     

五种药物抗鸡贝氏隐孢子虫（Cryptosporidium baileyi）人工感染试…

作者分别用大蒜素、乙酰螺旋霉素（２００ｐｐｍ）、速丹（３ｐｐｍ）、对－氨基水杨酸（１０００ｐｐｍ）、不杨酸异戊酯（１０００ｐｐｍ）五种药物进行了三次抗鸡隐孢子虫人工感染试验。结果发现对－氨基水杨酸、水杨酸异戊酯、大蒜素可以明显地降低粪便卵量排出量，防止临床太的出现和死亡。乙酰螺旋霉素、速丹的效果不明显。     

0.5%地克珠利可溶性粉剂预防鸡球虫病试验

对0.5%地克珠利(Diclazuril)可溶性粉剂,以0.2×10-6、0.5×10-6、1.0×10-6 3种浓度饮水预防鸡艾美耳球虫(Eimeria)混合种人工感染,并用地克珠利预混剂(商品名球佳)以1.0×10-6浓度饲喂作对照,结果发现0.5%地克珠利可溶性粉剂以0.5×10-6、1.0×10-6两种浓度饮水预防鸡球虫病,具有良好的效果,抗球虫指数均在176.6以上,与地克珠利预混剂以1.0×10-6浓度混饲效果相当,证实0.5%地克珠利可溶性粉剂是地克珠利又一种高效预防鸡球虫病新剂型.     

鸡口福(鸡调味剂)对肉鸡的饲养效果

随着生活水平提高,人们对禽肉需要量大增,据统计,1991年我国人均消费禽肉量已占肉类总量的13.6％,禽肉中鸡肉量超过85％。特别是近年猪肉价格大幅上涨,多数地区的猪肉售价已超过鸡,大家对鸡肉的消费更加频繁,同时对鸡肉的品质也提出了更高要求。鸡调味剂是国内最新研制的一种饲料添加剂新品种,由数种植物经科学提炼而成的一种纯天然物质,用于鸡能提高饲料报酬,改善鸡肉品质。笔者对用鸡调味     

四种隐孢子虫半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因的克隆和序列分析

为克隆不同种隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)的半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因,分析其核苷酸与编码氨基酸序列的变异情况,根据GenBank上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)Cryptopain-1基因序列设计合成引物,用PCR技术从不同种隐孢子虫基因组DNA中扩增Cryptopain-1基因,并将其克隆至pZeroBack/blunt载体,阳性克隆经PCR鉴定正确后测序,与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因进行序列同源性比对,并进行系统进化分析。结果显示,本研究成功从泰泽隐孢子虫(C.tyzzeri)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、兔隐孢子虫(C.cuniculus)基因组DNA中扩增出Cryptopain-1基因。与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因比较,泰泽隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、兔隐孢子虫Cryptopain-1基因核苷酸序列相似性分别为98.67%、94.53%、98.34%,演绎的氨基酸序列相似性分别为99.00%、96.51%、99.00%。研究结果为利用Cryptopain-1基因进行隐孢子虫的代谢、致病机理等研究奠定了基础。     

合理使用抗鸡球虫药

1　如何合理使用抗球虫药1.1　合理选择药物　目前市售抗球虫药品种繁多 ,选择余地较大。但每种药物对球虫的作用峰期、有效虫种不尽一致 ,各种药物间的配伍禁忌、协同效果不完全一样 ,药物的安全性也相差很大。理想的抗球虫药标准 :一是抗球虫谱广 ,性质稳定 ;二是能够提高饲料报酬 ,促进鸡的生长发育 ;三是组织中残留量少 ,无毒性 ,多用途 ,又不影响鸡产生免疫力 ;四是价格低廉 ,容易与饲料混合或易溶于水。但是对一个具体的鸡场而言 ,还要结合自身特点加以考虑。这些因素包括 :鸡场的不同优势虫种、鸡场球虫的抗药性特点、鸡的品种 (是肉…