甘南藏系绵羊DGAT1基因16-17外显子多态性分析

本研究旨在探讨甘南藏系绵羊(欧拉羊、甘加羊和乔科羊)及滩羊DGAT1基因16-17外显子多态性,为开展藏系绵羊遗传分化、藏系绵羊与其他绵羊的亲缘关系、藏系绵羊DGAT1基因与肉质性状关联等方面的研究提供参考.采用PCR-RFLP方法,检测501只绵羊DGAT1基因16-17外显子SNP,并对主要遗传参数进行统计学分析.结果表明:①藏系绵羊DGAT1基因16-17外显子均具有Alu Ⅰ酶切多态性,存在TT、TC、CC 3种基因型,其中CC基因型频率最高,为优势基因型;C等位基因频率高于T等位基因频率,为优势等位基因.②欧拉羊在DGAT1基因16-17外显子处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05),而甘加羊、乔科羊在DGAT1基因16-17外显子处于Hardy-Weinberg不平衡状态(0.01＜P＜0.05).③独立性检验结果表明:各藏系绵羊间基因型分布差异不显著(P＞0.05),而滩羊与乔科羊之间差异极显著(P＜0.01),滩羊与欧拉羊、滩羊与甘加羊之间差异显著(0.01＜P＜0.05).④藏系绵羊在DGAT1基因16-17外显子Alu Ⅰ酶切位点均表现为中度多态.结果提示:在DGAT1基因16-17外显子Alu Ⅰ酶切位点上藏系绵羊之间基因型分布差异不显著(P＞0.05),而滩羊和藏系绵羊差异显著(0.01＜P＜0.05)、亲缘关系较远.     

西兰花尾菜发酵饲料对绵羊生长性能、营养物质表观消化率及血清生化、抗氧化和免疫指标的影响北大核心CSCD

本试验旨在研究西兰花尾菜发酵饲料对绵羊生长性能、营养物质表观消化率及血清生化、抗氧化和免疫指标的影响。选取54只体重接近、体况良好的5月龄欧拉绵羊公羊,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6只。对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组分别饲喂添加0、10%和20%西兰花尾菜发酵饲料的试验饲粮。试验共78 d,其中预试期14 d,正试期64 d。结果表明:1)试验Ⅰ组和试验Ⅱ组的第33~64天及第1~64天的平均日增重(ADG)显著高于对照组(P<0.05),且料重比(F/G)显著低于对照组(P<0.05)。2)试验Ⅰ组和试验Ⅱ组的粗蛋白质(CP)表观消化率显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅰ组的粗脂肪(EE)表观消化率显著高于对照组(P<0.05)。3)试验Ⅱ组的血清乳酸脱氢酶(LDH)活性显著低于对照组(P<0.05),试验Ⅰ组和试验Ⅱ组的血清肌酸激酶(CK)活性显著低于对照组(P<0.05)。4)试验Ⅰ组和试验Ⅱ组的血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性及免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)含量均显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加西兰花尾菜发酵饲料可提高绵羊的生长性能、CP表观消化率以及抗氧化性能和免疫功能。     

哺乳动物ACCα基因启动子结构特征及调控

乙酰辅酶A羧化酶(ACC)在哺乳动物脂肪酸合成和分解代谢中发挥着重要作用.ACC包括ACCα和ACCβ2种形式,由不同基因编码,其中ACCα主要在脂肪酸合成过程中起作用.哺乳动物ACCα基因的启动子主要包括3个:PⅠ、PⅡ和PⅢ,而反刍动物和啮齿动物还包括第4个启动子PIa,各启动子具有不同的结构特征.     

半定量RT-PCR法检测原代培养脂肪细胞生脂基因mRNA转录表达

在原代培养脂肪细胞生脂机制研究中,为了检测生脂基因ACCl和FAS mRNA表达水平变化,细胞总RNA经反转录合成cDNA,以β-actin为内参照,分别与ACCl和FAS等基因同管扩增.通过探讨和优化PCR体系中引物设计、退火温度、MgCl2浓度和循环次数等参数,以及引物对间的扩增竞争,建立了检测脂肪细胞生脂相关基因mRNA表达的半定量多重RT-PCR体系.结果显示,RT-PCR产物经电泳后,β-actin及生脂基因电泳带清晰,与预期产物大小一致,引物对间无扩增竞争,其扩增效率和特异性与单重RT-PCR体系相同,实验重复性好.因此,该方法和体系可用于快速、灵敏、可靠地检测特异基因mRNA的表达.     

光照制度对蛋鸡开产日龄和生产性能的影响研究

对育成期罗曼商品褐壳蛋鸡提供10～12 h光照时间和10 Lx的光照强度,后备母鸡提前5～8 d开产;45周龄之前,产蛋量和产蛋数均高于8 h、10 Lx光照;64周龄时产蛋量、产蛋数各组间无差异,但平均蛋重下降;至72周龄时产蛋量、平均蛋重和饲料利用率均下降,并呈现明显差异(P＜0.05).     

大鼠脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达时序的研究

对大鼠附睾和肾周脂肪组织分离的前体脂肪细胞原代培养，采用RT—PCR法分析脂代谢重要酶和转录因子基因在不同分化阶段转录表达的时序变化。结果显示，在前体脂肪细胞阶段，固醇调控元件结合蛋白（SREBP）-1c、碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）以及脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶α（ACC1）、硬酯酰辅酶A去饱和酶（SCD）和激素敏感脂酶（HSL）基因均不转录表达；HSL mRNA在分化初期表达，中期表达水平最高，分化末期降低；SCD mRNA在分化中期表达，末期表达水平显著提高；分化初期FAS mRNA水平明显高于中期和末期；ACC1 mRNA仅在末期表达；分化初期SREBP-1c mRNA水平较高，中期和末期显著下降；ChREBP mRNA表达水平在分化末期稍高于中期，但差异不显著。表明，SREBP-1c mRNA的表达与脂肪细胞早期分化调控有关，分化成熟脂肪细胞的ChREBP mRNA表达可能与生脂基因的转录激活有关。     

芽孢杆菌CY1—3株碱性纤维素酶基因celC的克隆及其在大肠杆菌中的表达

芽孢杆菌CY1-3株基因组DNA经Sau3A Ⅰ部分消化后回收2～7 kb片段,构建了部分文库.通过刚果红染色鉴定,筛选出6个纤维素酶基因的阳性克隆子,经酶切鉴定为同一克隆子,命名为pGJc-1.经测序分析,该片段包含一个由1 593个核苷酸组成的开放阅读框（ORF）,命名为celC.经推导,celC基因编码由一531个氨基酸残基组成的CelC蛋白.氨基酸序列分析表明,CelC蛋白的氨基酸序列与多种细菌的β-1,4-内切葡聚糖酶具有很高的同源性.粗酶液的SDSPAGE分析表明,celC基因在大肠杆菌中所表达的CelC蛋白具有纤维素酶活力,其分子质量约为58 ku.     

兰州大尾羊mtDNA D-loop和Cytb区序列分析与多态性研究

利用mtDNA序列分析技术对20只兰州大尾羊遗传多态性进行分析,兰州大尾羊mtDNA D-loop区序列长度为1 210 bp,碱基组成分析发现,A、T、G、C碱基含量分别为29.0%、32.3%、23.5%、15.2%,其中A＋T为61.3%,G＋C为38.7%,G＋C含量明显低于A＋T。通过对兰州大尾羊线粒体DNA D-loop区的碱基突变和同源性比较分析得出兰州大尾羊D-loop区核苷酸多样度（Nucleotide diversity）Pi为0.037 85,7只兰州大尾羊来自3个不同母本。兰州大尾羊mtDNA Cytb区序列长度为1 580 bp,其中A、T、G、C碱基含量分别为27.2%、33.7%、26.7%、12.4%;A＋T为60.9%,G＋C为39.1%,G＋C含量明显低于A＋T。应用计算机软件DNAsp4.10进行单倍型分析,17个兰州大尾羊个体mtDNA Cytb区序列共发现了12个单倍型（Haplotype）,其中第1号和第10号、第2号和第5号共用一种单倍型,单倍型比例在兰州大尾羊群体中较高,遗传多态性较低。     

兰州大尾羊H-FABP基因荧光定量PCR检测方法的研究

通过对兰州大尾羊尾部、大网膜、肝脏、肾周脂肪组织中的总RNA提取,反转录获得总cDNA样品,结合PCR技术,建立了SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因mRNA在不同组织中相对表达量的试验方法,并进行批内、批间重复性检验。结果表明,H-FABP和18S基因标准曲线回归方程分别为CtH-FABP=-3.24375x+38.34230和Ct18S=-3.33137x+33.4573,相关系数(r2)分别为0.9964和0.9992,扩增效率分别为103%和99%;批内、批间重复性测定的变异系数分别为小于1.8%和10%;说明该方法灵敏度高、特异性强、准确可靠、重复性好,是实时荧光定量PCR检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白基因mRNA表达量的有效方法。