大白菜单拷贝序列的长片段PCR体系优化

目的序列长片段PCR产物可作为FISH技术的有效探针进行分子细胞遗传学研究。然而,传统PCR技术对于5 kb以上的长片段进行有效扩增很难。合适的反应条件及反应体系是进行长片段PCR有效扩增的必要前提。为了获得目的序列长片段PCR产物以用于FISH研究,根据大白菜A03染色体顶端无重复序列区段设计了80对长片段PCR引物,从基因组DNA模板质量、d NTPs浓度以及退火温度和延伸时间方面对PCR技术体系进行了优化。试验证明,选用幼苗嫩叶的基因组DNA和LA Taq DNA聚合酶可以提高长片段PCR引物的扩增质量和扩增效率;确定了适合5~15 kb长片段PCR的反应体系为20μL:50 ng/μL模板DNA 2μL,2.5 mmol/L d NTPs 1.6μL,10μmol/μL正反引物各1μL,10×LA PCR BufferⅡ(含Mg2+)2μL,5 U/μL LA Taq酶0.2μL;反应条件为98℃变性15 s;58~64℃退火10 s,68℃延伸5 min,35个循环;68℃延伸10 min,4℃保存。在大白菜基因组中成功获得了60对5~15 kb的扩增片段。为在大白菜粗线期染色体上开展长片段PCR-FISH技术研究及在近缘种间开展比较染色体涂染揭示进化关系奠定了理论基础。     

影响组织培养诱导四倍体小果型西瓜三种因素的研究

以二倍体小果型西瓜自交系21，90，141，149,157的授粉后20～25d的未成熟种子中的子叶为材料，进行离体组织培养诱变四倍体，研究了不同的秋水仙素浓度、处理时间对组织再生，不同的秋水仙素浓度、处理时间与再生途径对加倍率的影响。结果表明，未成熟子叶组织再生有产生单芽、芽丛、愈伤组织3种方式；不经秋水仙素诱导处理，直接进行组织再生时，直接再生不定芽能力强；经秋水仙素诱导处理后，进行组织再生时不定芽产生受到抑制，愈伤组织发生数多于单芽或芽丛数；基因型不同，处理的秋水仙素浓度与时间不同，再生的组织类型与数量不同；还发现经一定时间的适宜浓度的秋水仙素处理后，有利于产生的愈伤组织分化成苗；对再生植株鉴定可知，0．03％秋水仙素处理9d或0．05％秋水仙素处理7d可诱导出较高比例的四倍体植株，并且通过愈伤组织途经的加倍率高于通过单芽和芽丛途经。     

大白菜3号、6号染色体双三体及其初级三体的鉴定

 利用有丝分裂染色体核型分析的方法, 鉴定同源四倍体大白菜小孢子株系940521为3 号、6 号染色体双三体; 在其与冠291 杂交的F₁代中, 利用减数分裂中期Ⅰ染色体观察的方法, 鉴定出了3 号染色体三体和6号染色体三体, 并对F₁代中的两种三体及双三体的数目进行统计, 计算出双三体中的3 号、6 号额外染色体的雌配子传递率分别为28. 26 %和47. 83 %; 利用TTC 染色方法测定3 号染色体三体、6 号染色体三体及双三体的花粉生活力, 结果表明: 3 号染色体三体、6 号染色体三体及双三体的花粉生活力差异达极显著水平。     

大白菜随体染色体的附加和减少对种株光合特性的影响

 以大白菜随体单体、三体和二倍体为试材，在自然条件下，对生殖生长期的功能叶的叶绿素含量、希尔反应活性、净光合速率、光合速率日变化、Rubisco活性等生理生化指标进行了测定，以研究同源染色体的附加和减少对光合特性的影响，为开展染色体工程育种提供参考。结果表明：随体染色体的减少或附加对叶绿素含量有正效应，对叶绿素a/b的比值有负效应。随体染色体的减少或附加对大白菜的光合速率都产生不同程度的负效应。随体三体和二倍体净光合速率日变化均呈典型的双峰曲线，有明显的“午休”现象，随体单体“午休”现象不明显。随体染色体的减少或附加对希尔反应和Rubisco活性均有负效应。希尔反应活性和Rubisco活性的降低是引起随体单体、三体光合速率降低的直接原因。     

辣椒新品种‘冀星7号’

 ‘冀星7号’是鲜食牛角形辣椒一代杂种, 适合在北方辣椒产区栽培。植株长势强, 抗病性强, 在较低和较高温度下结果性均好, 连续坐果能力强, 单株载果20～30个。果实牛角形, 长17～23 cm,粗315～415 cm, 肉厚0137 cm, 单果质量50～70 g; 果实浅绿色, 顺直有光泽, 微辣。产量可达75 t/hm2。     

利用组织培养进行四倍体西瓜育种

概述西瓜离体组织培养进行四倍体育种的国内外现状,指出西瓜离体组织培养四倍体的技术要点及多种鉴定西瓜四倍体的方法;将组织培养扩繁技术与农业生产相结合;展望西瓜四倍体育种新技术的发展方向.     

植物非整倍体及其在遗传研究上的应用

植物单体、三体、缺失体等非整倍体是遗传研究和染色体工程育种的重要基础材料,在基因及分子标记的物理定位、确定连锁群与染色体的对应关系上具有不可替代的作用.随着分子标记技术的不断进步,创建和研究新的系列非整倍体工具材料对促进基因及分子标记的染色体定位,进而实现目标基因的克隆和应用具有重要意义.     

不结球白菜抗病基因同源序列的克隆及分析

【目的】利用同源序列法分离不结球白菜抗病基因同源序列。【方法】根据植物抗病基因TIR-NBS-LRR保守区设计简并引物，对不结球白菜基因组DNA及cDNA进行PCR扩增。【结果】获得了10个具有通读氨基酸序列的片段。同源性比较发现，该10个片段均属于TIR-NBS-LRR类抗病基因同源序列（RGA），与已知R基因相应区段的氨基酸序列一致性为50%～66%。与已知抗病基因聚类分析结果显示，该10个RGA序列可以分为5大类。利用RGA950作为探针进行Southern杂交，结果表明，其在基因组中存在多拷贝。【结论】本研究成功获得了不结球白菜RGA序列，为进一步克隆不结球白菜的R基因奠定了基础。     

结球甘蓝一套初级三体的选育及细胞学鉴定

【目的】创建甘蓝初级三体是其基因染色体定位等遗传研究的基础。【方法】以结球甘蓝自交系-9601为试材，采用根尖细胞、花粉母细胞的染色体计数及核型分析等方法，从其三倍体与二倍体的回交子代中分离和鉴定初级三体。【结果】从回交子代中鉴定分离出了多个2n+1和2n+2等非整倍体植株，经核型分析、染色体联会行为及植株外部形态的观察，初步获得了结球甘蓝一套初级三体（Tr-1～Tr-9），其中从2n+1植株中得到了Tr-2、Tr-3、Tr-5、Tr-6、Tr-7、Tr-8和Tr-9初级三体，从2n+2植株中得到了Tr-1和Tr-4初级三体，各初级三体在株高、株型、叶形、花蕾大小和开花期等特征特性上表现出一定差异。【结论】三倍体与二倍体回交分离结球甘蓝初级三体是方便快捷的有效途径。     

白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae）菌丝生长和毒素产生条件的研究

对白菜黑斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｂｒａｓｓｉｃａｅ）不同菌株的营养生长和产毒条件的研究结果表明，白帮菌系（ＡＢＷ）与青帮菌系（ＡＢＧ）的生物学特性有一定的差异，同一菌系菌株间差异不显著，其中ＡＢＷ菌丝生长的最佳条件是２０～２２℃、ｐＨ４、光照１２ｈ／ｄ、间歇振荡和以蔗糖（浓度为３％）为Ｃ源；而毒素产生的最佳条件是１３～１５℃、ｐＨ６、黑暗、静止和以葡萄糖（浓度为１０％）为Ｃ源。ＡＢＧ菌丝生长的最佳条件是１３～１５℃、ｐＨ４、光照１２ｈ／ｄ、全天振荡和以蔗糖（浓度为３％）为Ｃ源；而毒素产生的最佳条件是１３～１５℃、ｐＨ４、黑暗、静止和以葡萄糖（浓度为５％）为Ｃ源。研究还发现，相同条件下ＡＢＧ的菌丝生长速度均大于ＡＢＷ，而产毒量却较为复杂。青帮品种比白帮品种白菜更易感染白菜黑斑病菌。此外，白菜黑斑病菌生长后的改良Ｆｒｉｅｓ培养基ｐＨ值均有变小的趋势，而且随着菌丝生长量的增加变化幅度逐渐增大。