环磷酰胺诱导的尼罗罗非鱼体内外肝损伤模型的构建

以环磷酰胺(CTX)为诱导物，建立罗非鱼体内外急性肝损伤模型。体外，0、5、10、15、20和25 mmol·L^-1 CTX 分别作用于离体培养的罗非鱼精密肝切片（PCLS）6 h 后，测定切片培养上清中谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）和乳酸脱氢酶（LDH）水平，同时收集肝切片，用噻唑蓝（MTT）法检测肝切片增殖活性，测定切片内总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、过氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）水平。体内，采用胸腔注射法造模，每千克鱼体重分别注射0、10、25、75和100 mg环磷酰胺（下文以mg·kg^-1表示），每隔3 d给药1次，连续3次。末次给药后第4天取血，测定罗非鱼血清中GPT、 GOT 和LDH及肝组织匀浆中T-AOC 、MDA、SOD和GSH水平。结果显示： 20～25 mmol·L^-1 CTX作用体外培养精密肝切片6 h及75～100 mg·kg^-1 CTX胸腔注射罗非鱼后，均可以导致GPT、GOT和 LDH 活力显著升高；T-AOC、SOD活力及GSH含量显著下降，MDA含量显著提高。同时，20 和25 mmol·L^-1 CTX能导致肝切片增殖活性显著下降，分别为空白对照组的67.29%和55.41%，且有剂量依赖性。结果表明：CTX可引起罗非鱼肝损伤；分别采用20 mmol·L^-1 CTX 作用体外培养PCLS 6 h或者采用75～100 mg·kg^-1 CTX胸腔注射罗非鱼，每隔3 d给药1次，连续3次，均可以构建体内外急性肝损伤模型。     

油酸诱导建鲤(Cyprinus carpio var. Jian)肝细胞脂肪变性模型的建立

通过对油酸诱导时间及有效作用浓度的研究,建立油酸致建鲤肝细胞脂肪变性模型.本研究以胰蛋白酶消化法获得的原代肝细胞作为实验材料,加入不同浓度油酸(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L)与肝细胞共培养24-48 h,诱导肝细胞脂肪变性,分别收集不同时段的肝细胞及上清液,采用试剂盒测定肝细胞中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)的含量,同时测定上清培养液中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,MTT法测定肝细胞的存活情况,确定油酸最佳诱导浓度,油红O染色法观察细胞内脂肪滴的形成情况.研究结果显示,0.4 mmol/L油酸与肝细胞共培养48 h,可以显著提高肝细胞内TG、TC含量(P＜ 0.05或P＜ 0.01),极显著提高上清培养液中GOT、GPT、LDH、γ-GT的活性,显著降低上清培养液中SOD的活性,但与24 h相比有升高趋势,0.4 mmol/L油酸与肝细胞共培养24 h,光镜下可见细胞内有脂肪滴形成,以48 h最明显.综上所述,油酸浓度0.4 mmol/L、诱导时间48 h成功构建了肝细胞脂肪变性模型,为研究鱼类脂肪肝类疾病奠定了基础.