利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究

为了构建敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因真核表达载体及单、共转染成纤维细胞后研究两基因表达量之间的变化,以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成c DNA参照Gen Bank中DKK1、BMP4基因序列信息分别设计1对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增获得DKK1、BMP4基因片段、利用So So试剂盒将目的片段连接到pcDNA3. 1真核表达载体上。鉴定正确后的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4单、共转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测DKK1、BMP4基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4构建成功,成纤维细胞原代、传代培养良好,转染后细胞生长良好,经实时荧光定量PCR技术和Western Blot检测DKK1基因共转染成纤维细胞较单转染的表达量极显著下降(P 0. 01),BMP4基因的共转染较单转染表达量没有发生明显变化。成功构建了敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因的真核表达载体,并且成功共转染成纤维细胞,DKK1基因的表达量明显下降,BMP4基因的表达量没发生明显变化,因而,推断BMP4基因抑制了DKK1基因的表达,DKK1基因对BMP4基因作用不明显,结果可为进一步研究其功能奠定基础。     

崂山奶山羊非发情季节同期发情效果的比较

[目的]为同期发情技术在生产中的应用提供参考。[方法]采用2种不同的短期发情方法对崂山奶山羊进行同期发情处理,探索一种有效、实用的同期发情处理方法。[结果]PG+CIDR+FSH+PG处理组48~96 h崂山奶山羊发情15头,同期发情率为75%,受胎率为80%,均高于CIDR+PMSG+PG处理组。[结论]PG+CIDR+FSH+PG方法可以诱导处于非繁殖季节崂山奶山羊同期发情并产羔,且可以获得较高的情期受胎率和产羔率。     

敖汉细毛羊毛囊FGF10、FGF18和FGFR3基因差异表达的研究

本研究旨在解析FGF家族及其受体基因在细毛羊不同部位皮肤、不同时间mRNA和蛋白的表达及与细毛羊毛囊生长发育的关系,为揭示毛囊生长发育的分子机制奠定理论基础。首先通过基因芯片技术,筛选敖汉细毛羊毛囊发育的差异表达基因,并通过qRT-PCR对基因芯片结果的准确性进行验证。之后对得到的差异表达基因作进一步分析,可知FGFs家族在颈部和腹部,羊毛毛囊的生长旺盛期和缓慢期之间的mRNA表达量存在差异的有FGF10、FGF18和FGFR3基因。最后通过二维凝胶电泳(2-DE)和质谱技术(MS),对毛囊发育的差异表达蛋白进行筛选,得出FGFs家族蛋白质在颈部和腹部、羊毛毛囊的生长期和缓慢期之间仍存在差异表达的有FGF10、FGF18和FGFR3蛋白。结果显示,FGF10mRNA在腹部表达量高于颈部,推测可能对毛囊的发育具有负调控作用;其蛋白表达量颈部均高于腹部,推测可能促进毛囊生长发育。FGF18在腹部其mRNA表达量旺盛期高于缓慢期,推测其可能维持此处毛囊的不活跃状态;其蛋白在颈部表达量均低于腹部,推测可能对毛囊的生长具有抑制作用。FGFR3mRNA和蛋白表达水平无统一趋势,可能与毛囊的生长发育存在较复杂的关系。综合以上,FGF10、FGF18和FGFR3mRNA和蛋白水平在毛囊生长发育的不同部位和不同时期存在差异表达,这提示它们可能与毛囊的生长发育具有一定的关系,并在不同水平发挥调控作用。研究结果为解析FGFs家族成员调控毛囊生长发育的分子机制奠定理论基础,为进一步加快细毛羊育种提供重要候选基因。     

饲养密度对肉鸡氧化应激和免疫指标的研究进展

为了提高家禽养殖单位面积的产出和经济利益最大化,饲养密度一直是养殖业关注的核心点之一。然而对饲养密度的过度增加,容易引起家禽应激反应,而应激会影响机体的免疫功能和相关应激指标。本文综述了关于饲养密度对肉鸡氧化应激和应激指标的研究进展,以期对肉鸡的生产给予更加科学地指导。     

一例规模猪场发酵床养殖垫料肥料化 利用典型技术模式与案例分析

畜禽养殖废弃物资源化利用,事关农村居民生产生活环境改善和生态循环畜牧业发展。践行绿色发展理念、做好畜禽养殖废弃物资源化利用以及加快成熟技术模式示范推广是当前畜牧部门工作的重中之重。推广"规模猪场发酵床养殖垫料肥料化利用模式"不仅能破解养猪业粪污治理和环境保护问题,而且能提高猪肉质量安全,促进农民增收,真正实现绿色无污染养殖。     

崂山奶山羊骨髓间充质干细胞永生化细胞系的建立

为建立崂山奶山羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)永生化细胞系,将已构建的pcDNA3.1-EGFPTERT转入崂山奶山羊BMSCs中,利用含G418的培养基筛选获得稳定转染的TERT-BMSCs;通过多次传代,测定其生长曲线;选取高代次TERT-BMSCs的分裂中期相的细胞,检测其染色体及核型的稳定性。结果表明,转入TERT基因的崂山奶山羊BMSCs能够稳定表达该基因,其生长曲线呈"S"形;在多次传代后,P40代细胞的核型正常率仍能达到88.24%。综上提示,转染得到的TERT-BMSCs具有良好的生长状态,其细胞生长稳定,符合永生化细胞特征,为间充质干细胞应用于组织修复及基因工程种子细胞的制备提供了理论基础。     

TY1522轮式拖拉机系列

<正> 本系列产品是由洛阳拖拉机研究所设计,联合10个省区13家主机厂和18家专业配套厂共同研制开发的一组水旱兼用型轮式拖拉机.是国家“八五”期间重点发展和推广的小型轮式拖拉机系列产品之一.该系列轮式拖拉机功率范围为11～16.2kw,额定牵引力范围为3700～7000N,速     

开发园艺拖拉机的看法

<正>80年代以来,随着西方发达国家城市园林事业的发展及其居民住宅庭院式结构的形成,国外园艺拖拉机得到了迅速发展,到1989年,园艺拖拉机的年销售量已达25万台,其产品技术达到了相当先进的水平.园艺拖拉机的主要生产及销售市场均在北美(美国、加拿大)、日本、西欧等发达国家,园艺拖     

皮带传动小四轮拖拉机存在的问题及其解决办法

随着我国农村经济和城乡运输业的飞速发展，农民对小型拖拉机在品种和性能方面的要求越来越高。为此，许多生产厂家按国家新产品开发指南的要求，竞相在88kw皮带传动小四轮拖拉机的基础上提高功率，大量生产11kW、13．2kW的机型，形成短系列产品。但功率提高后，原底盘能否与之相适应？为摸清这个问题我们于去年对部分厂家及用户进行了详细的调查了解，发现存在不少问题，尤其13．Zkw机型，故障最多。本文通过对两种频发性严重故障产生原因的分析，找出较佳解决办法，以期对有关厂家有所帮助。一、离合器打滑、烧片1．故障产生的原因发动…     

莱西市畜禽养殖现状和粪污处理与资源化利用情况的调研

随着社会的发展,畜牧经营方式和饲养规模发生了重大变化,畜禽养殖数量的巨大增加,畜禽粪便以及养殖生产产生的环境问题成为当前影响畜牧业发展的瓶颈。减少畜禽粪污的排放、畜禽粪污处理及综合利用,实现无害化、资源化,保证畜牧业、农业及生态环境的协调发展,是生态文明建设和新农村建设的重点。为了摸清畜牧养殖的状况和畜禽粪污无害化处理和资源化利用的现状,笔者在莱西市十个乡镇做了养殖的基本情况调研。