边缘革蜱铁蛋白1的原核表达与理化特性分析

为探明蜱源铁蛋白1(FER1)在边缘革蜱铁代谢中的功能,本研究经PCR扩增了边缘革蜱源FER1基因编码区(CDs),测序结果显示FFER1基因CDs区为519 bp;BLAST分析其与硬蜱科常见蜱FER1的氨基酸序列同源性,利用Mega 6.0软件分析了 FER1基因与其他常见蜱该基因之间的系统进化关系;利用Swiss...     

蚯蚓纤溶酶基因番茄表达载体的构建

为研究蚯蚓纤溶酶的番茄表达,构建EFE基因的番茄表达载体pF和pEF,并导入农杆菌。采用PCR法在EFE基因DNA序列上添加了表达调控元件和酶切位点后,得到新EFE基因片段,将该片段与切去GUS基因的pBI121载体相连,以构建CaMV35S驱动的EFE组成型表达载体pF;用PCR克隆得到的E8启动子片段替换pF上的35S启动子,以构建番茄成熟果实特异性表达载体pEF;最后,采用三亲交配法用重组质粒转化根癌农杆菌EHA105;结果表明:经过酶切、PCR和测序鉴定,EFE基因、E8启动子序列已重组到表达载体上,植物表达载体构建正确,并且已经转化进农杆菌EHA105中。     

河北猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3(cz)株N基因变异分析及原核表达

为了给河北地区预防和控制猪繁殖与呼吸综合征提供理论数据。应用RT-PCR方法特异性扩增HB-3(cz)株的ORF7(N)基因片段,将扩增片段克隆入pMD-T载体后测序,应用DNAstar分析软件对序列进行分析,并与GenBank中发表的PRRSV毒株序列进行比较。结果显示:HB-3(cz)株与高热病毒株JXA1、HUB2等及传统河北分离株HB-1(sh)氨基酸同源性高达97.6%,属美洲型毒株。将目的片段克隆入原核表达载体pGEX-6P-1,重组质粒pGEX-N转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达,经Western-blot-ting分析表明:表达的融合蛋白分子量约为39.5 kDa,能与PRRSV的阳性血清发生特异性反应,为PRRSV血清学诊断方法的建立奠定了基础。     

烟夜蛾滞育激素基因在粟酒裂殖酵母中的表达

利用设计的特异性引物通过RT-PCR的方法获得了烟夜蛾滞育激素(Diapause hormone,DH)基因,构建了真核表达栽体pESP-2-DH,并在粟酒裂殖酵母SP-Q01中进行了诱导表达,对表达产物进行了SDS-PAGE电泳,获得了与谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-tranferases,GST)融合表达的蛋白,分子量约48 kDa,与预测的融合蛋白分子量大小相当.对表达的融合蛋白进行Western blotting检测,结果表明,与GST抗体产生了很强的交叉反应,表明融合蛋白得到了表达.     

单核细胞增生性李斯特菌iap基因的原核表达

该研究利用自行设计的引物通过PCR方法扩增出单核细胞增生性李斯特菌 Listeria monocytogenes C5305 株的iap基因,在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ 2 个酶切位点并将其克隆到pET-28a表达载体上,经PCR鉴定、酶切鉴定和核苷酸序列测定后获得重组质粒 pET-28a-iap,将该重组质粒转化人大肠杆菌BL21 (DE3)pLysS,经1 mmol/LIPTG诱导4～6 h后,通过SDS-PAGE及Western-blotting鉴定,证明该基因得到表达,表达产物相对分子质量约为60 000,以可溶形式存在.     

水稻逆境响应蛋白OsSGL的生物信息学分析及原核表达条件优化

水稻OsSGL(Oryza sativa stress tolerance and grain length)基因表达响应多种非生物逆境,参与调控水稻产量及耐旱性.该基因CDS全长768 bp,编码一个包含DUF1645(Domain of unknown function protein family 1645)结构...     

牛遗传图谱的研究进展

20世纪90年代以来,牛遗传图谱发展非常迅速。到目前为止,已经公布了几个版本的遗传图谱。在图谱上DNA标记不断增加,标记间隔越来越小,但是目前图谱还是存在着标记密度不均匀等问题。随着牛基因组计划的完成,基因组学和QTL定位的发展,尤其是表达序列标签（EST）在图谱构建中的应用,牛的遗传图谱将更加完善,为重要经济性状的基因定位和基因克隆奠定了基础。     

表达序列标签技术及其应用

表达序列标签(Express Sequence Tags,以下简称为EST)是指表达基因一端或两端的部分DNA序列,能代表着某个表达基因的一段序列信息,平均长度为300~500 bp。EST是大规模获取基因功能的一种最为快捷、有效的研究手段,为寻找新基因、绘制遗传图谱、研究基因差异表达和比较基因组学及DNA芯片的制备等提供了大量的序列信息。综述了EST技术的原理、方法及其应用等方面的研究进展。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒HE基因的克隆及真核表达

应用特异性引物,从猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）中扩增出HE蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体,得到重组质粒pTHE。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pTHE,回收目的基因HE片段并将其定向克隆到pPiCZαA中,构建重组质粒pPiCZαA HE。用BstXⅠ酶切pPICZαA HE使其线性化,并电击转化至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1％甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及westem blot分析。结果在酵母菌培养基上清中检测到相对分子量为43kD的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的HE蛋白片段在Pichia Pastoris中获得成功表达。     

红曲菌MpigE基因过表达质粒的构建

以福建红曲菌M-CL为出发菌株,以PSKH质粒为模板克隆PtrpC启动子及TrpC终止子。通过重叠延伸PCR技术融合PtrpC启动子、MpigE (目的)基因、TrpC终止子,获得PMT融合片段。为了验证融合片段PMT的正确性,进行琼脂糖凝胶电泳分析,在2 100bp左右出现单一且清晰的条带。通过EcoR V和SpeI酶切PMT片段,插入带有潮霉素抗性的PSKH质粒的EcoR V和Spe I位点,构建1个红曲菌过表达载体HPMT,大小为7 155bp。通过构建过表达载体,以期对红曲菌M-CL进行改造,获得高产色素低产桔霉素的菌株。