昆虫细胞工程研究进展

综述了从60年代首次建立昆虫细胞系以来国内外的昆虫细胞工程的研究进展。包括昆虫细胞培养基的研究,昆虫细胞系的建立,昆虫细胞冻存的研究,昆虫细胞培养过程中污染的检测和解决,以及昆虫细胞—杆状病毒表达系统(Baeulovinas Expression Vector System,BEVS)的研究现状和展望。     

人IGF-1基因重组杆状病毒表达载体的构建及在sf9细胞中的表达

以pcDNA3．1／IGF-1为模板，采用PCR方法对IGF-1基因进行扩增，EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切回收含IGF-1基因的DNA片段，与pFastHTA连接，获得重组载体pFast／IGF-1；将其转化大肠杆菌（Escherichia coli）DH10Bac感受态细胞，经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-IGF-1，PCR鉴定得到单-／GF-1条带。将该病毒载体转染sf9细胞，进行病毒重组，Western-blot检测／GF-1表达，并用MTT法检测促内皮细胞生长活性。结果成功获得了重组病毒，Western-blot检测出现1条约13．0kD的带，MTT法检测IGF-1促细胞生长率为24．4％。     

重组杆状病毒(AcMNPV-Bm KIT-Chi)的杀虫活性和安全性初步研究

苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒作为新型生物杀虫剂已应用于农作物病虫害防治。对构建的重组杆状病毒(AcMNPV-BmKIT-Chi)进行了杀虫活性和生物安全性初步研究。结果显示,重组病毒和野生型病毒的LC50分别为7.5×102,3.3×104PIBs/mL,重组病毒比野生型病毒具有更好的杀虫活性;检测了该重组病毒和野生型病毒对小鼠的易感性,所试小鼠未见明显急性毒性反应,高剂量重组病毒灌胃小鼠的脾脏增大,小鼠胸腺、脾、肾组织切片未有异常,重组病毒对小鼠具有较高的生物安全性。     

新分离的豆天蛾核型多角体病毒sod基因的序列分析

从感病的豆天蛾幼虫中分离和纯化了一种新的豆天蛾核型多角体病毒(CbNPV).为进一步了解该病毒的分子生物学特征,提取了基因组DNA,采用Shotgun方法构建了病毒DNA的文库,对其中一些克隆分析发现一长度为465 bp的读码框,编码154个氨基酸,在GenBank中没有发现同源性极高的核苷酸序列.但该基因的编码产物与sod基因同源性较高,与NPVs及GVs的同源性分别为67%～82%和54%～59%,并且更接近于II类NPV.在CbNPVsod基因的氨基酸序列中一些与SOD活性相关的位点及维持空间构型二硫键的位点均保守.CbNPV的全基因组序列有待进一步解析.     

鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株S蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达及其免疫原性

为了对鸡传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)广西优势血清型代表株GX-YL5的S蛋白进行真核表达并研究其免疫原性,设计GX-YL5毒株S基因特异引物,扩增出目的片段后,构建重组表达载体pFastBacTM/HBM-TOPO-S,转化DH10Bac细胞获得重组杆状病毒rHBM-S;重组S蛋白鉴定正确后,大量表达、纯化并免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,应用IFA、Western blot以及间接ELISA、气管环(TOC)中和试验对该重组蛋白的反应原性及免疫原性进行分析。结果显示,成功获得重组S蛋白;制备的抗S蛋白多抗血清具有良好的特异性,ELISA效价可达1∶25600,TOC中和试验滴度为1∶512。结果表明,应用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了具有很好免疫原性的GX-YL5株的S蛋白。本试验为研究IBV S蛋白的生物学功能、研发诊断试剂和制备新型疫苗等奠定了基础,为利用昆虫杆状病毒表达系统进行IBV或其他冠状病毒结构蛋白的表达及多抗的制备提供了借鉴和参考。     

草虾感染草虾杆状病毒（MBV）后肝胰腺上皮细胞病理变化的电镜观察

本文用改良的电镜固定液和新包埋剂制备超薄切片，在电镜下观察健康和感染ＭＢＶ的肝胰腺上皮细胞的超微病理变化，结果发现感染细胞的核质中有１个或多个包涵体和大量病毒粒子。随着包涵体和ＭＢＶ粒子增多，核染色质凝聚，核膜局部扩张，部份破裂，甚至完全消失，直至整个核崩解，使得ＭＢＶ和包涵体游离出来。胞质水肿，内质网髓鞘样变性，滑面内质网增生，脂滴增多，线粒体绒团样变性和并发细菌混合感染。作者认为核内包涵体和病     

单克隆抗体酶联免疫技术检测对虾皮下及造血组织坏死病的病原及其传播途径

用单克隆抗体ＥＬＩＳＡ技术对１９９４年５月～７月自山东和辽宁采集的虾池和海区材料，包括对虾、浮游生物、小型甲壳类生物、鱼类、底泥及饲料等共１９２个样品进行了对虾暴发性流行病病原ＨＨＮＢＶ的检测。结果表明，对虾中的ＨＨＮＢＶ阳性与虾池发病情况基本相符，用单抗ＥＬＩＳＡ方法可提前２０～４０ｄ对虾池的发病可能性作出预报；桡足类浮游生物的带毒率高于对虾，且其阳性的出现早于对虾，沿岸海区的桡足类浮游生物有较高的阳性率，它可能是对虾暴发性流行病的主要病原携带者；部分地区的卤虫也带有ＨＨＮＢＶ，同时还从糠虾等小型甲壳类生物中检出了病原。     

中国对虾一种杆状病毒的ELISA检测方法

从患暴发性传染病的中国对虾的组织中分离一种病毒，经差速离心、密度梯度离心及Ｓｈｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ柱层析纯化了一种形状为杆状的病毒。提纯病毒核酸电泳为一条带，分子量为２０ｋｂ。将提纯病毒免疫新西兰获得较高抗血清并初步建立了酶联免疫中附测定检测方法。     

Detection of monodon baculovirus and white spot syndrome virus in apparently healthy Penaeus monodon postlarvae from India by polymerase chain reaction

The simultaneous presence of monodon baculovirus (MBV) and white spot syndrome virus (WSSV) in apparently healthy postlarvae of Penaeus monodon from different hatcheries in India was studied by nested polymerase chain reaction (PCR). MBV could be detected in 54% of the samples. However, only 15% of samples were positive by non-nested reaction. WSSV could be detected in 75% of samples, 19% being positive by non-nested reaction. The results show simultaneous presence of WSSV and MBV in many samples at various degrees of infection. Only 14% of the samples analysed were negative for both viruses.     

冰冻斑节对虾体内病毒侵染中国对虾的电镜观察

用市售冰冻斑节对虾中头胸甲有白斑的病虾做感染源，对中国对虾仔虾进行人工感染，通过电子显微技术，对中国对虾仔虾的肝胰腺细胞进行观察研究。结果表明；冰冻斑节对虾体内的杆状病毒能够使中国对虾致病，其发病程度与对虾养殖密度有关。从病毒基质发生到形成完整的病毒粒子及侵染大致分4个阶段；病毒基质发生期，病毒囊膜形成期，病毒粒子装配期，病毒粒子再度侵染期。同时观察中还发现了一些可能与病毒形成有关的特殊物质，如绒团物和冰晶状物等。