新型饲料添加剂喹烯酮磺酸盐特殊毒理学研究

采用Ames试验、微核试验、精子畸形试验等,考察新型饲料添加剂喹烯酮磺酸盐的特殊毒理学特征。Ames试验结果表明,喹烯酮磺酸盐对鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100两个标准菌株均产生诱变性,并且在加入S9代谢活化系统后回复突变菌落数明显减少;小鼠体内微核试验和精子畸形试验结果均为阴性。     

牛支原体pdhα和pdhβ基因的克隆、原核表达及亚细胞的定位

牛支原体(Mycoplasma bovis,M.b)是牛(Bos taurus)的一种重要致病性支原体,感染后可引起牛多种疾病.丙酮酸脱氢酶复合体E1 (pyruvate dehydrogenase E1,PDHc E1)是参与生物体糖代谢过程的一个限速酶,广泛存在于微生物、哺乳动物及高等植物中,其直接影响丙酮酸向乙酰辅酶A的转化.本研究参照GenBank中M.b PG45株的PDHc E1α亚基基因pdhα和PDHc E1β亚基基因pdhβ序列设计引物,通过PCR扩增获得M.b武威株的pdhα (GenBank登录号:KU355295)及pdhβ基因(GernBank登录号:KU355296),在序列测定的基础上应用重叠延伸PCR (Overlap PCR)技术完成基因优化并构建原核表达质粒pET-pdhα和pET-pdhβ.表达质粒分别转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)后经异丙基硫代半乳糖苷(isopropy1β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达重组PDHc E 1α亚基融合蛋白PDHA及PDHcE1β亚基蛋白PDHB.纯化表达产物并分别免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体,进而应用Western blot及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对M.b PDHcE1α亚基和PDHc E1β亚基在细胞内的分布进行了初步研究.结果表明,经IPTG的诱导,pdhα与pdhβ基因在大肠杆菌BL21(DE3)中均成功表达,重组蛋白rPDHA及rPDHB的分子量分别约为40和37kD,且均有良好的免疫原性,而Western blot及ELISA结果证实E1α和E1β在牛支原体细胞膜上和胞浆中均有分布且分布量相当.本研究结果为进一步研究M.b生物学功能提供了基础资料.     

疯草解毒复方中药制剂的药代动力学研究

本试验旨在探讨疯草解毒用复方中药制剂在大鼠体内的药代动力学特性。在确定制剂中有效成分的基础上,采用紫外分光光度法检测大鼠经口服药物制剂后体内有效成分的吸收情况,并计算相应的药代动力学参数。本试验建立了适用于检测8种成分的紫外光谱分析法;制剂经口服给药后能在胃肠道被快速吸收,1 h左右大鼠体内各组分的血药浓度达到最大,药效发挥迅速;党参皂甙、多糖和阿魏酸代谢速度快,甘草酸、柴胡皂苷、黄芪甲苷、升麻素苷的代谢产物在体内作用时间较长。复方中药制剂在试验大鼠体内的药代动力学过程基本符合二室模型(陈皮苷除外)。所选用的测定方法简便、准确度和稳定性较高,适用于该制剂的药代动力学研究。     

黄花补血草总黄酮亚急性毒性试验

试验旨在评价黄花补血草总黄酮的安全性,为今后系统研究其药理作用和作为临床安全用药提供试验依据。选取80只1日龄、体重接近的大白鼠,随机分为2大组（Ⅰ、Ⅱ组）,其中每大组分成黄花补血草总黄酮高、中、低剂量组和空白对照组,药物组按照15、10、5 g/kg的剂量灌胃给药,对照组不给药,在给药10（Ⅰ组）、21 d（Ⅱ组）后采血测定试验指标。结果显示,Ⅰ组中、低剂量组的大白鼠体增重与对照组相比差异不显著（P>0.05）,而高剂量组体增重显著低于对照组（P<0.05）。Ⅱ组低剂量组的大白鼠体增重与对照组相比差异不显著（P>0.05）,而中、高剂量组体增重显著低于对照组（P<0.05）;试验组大白鼠的各脏器系数与对照组差异不显著（P>0.05）;在病理解剖过程中发现,随着剂量组浓度的增大,黄花补血草总黄酮对主要器官有一定的病理性损伤,21 d中、高剂量组的肺部组织出现白色肿块,肝脏出现红色出血点。结果表明,黄花补血草总黄酮毒性低,可以安全用于动物,但其剂量不宜过高。     

苦马豆素抗牛病毒性腹泻病毒的研究

【目的】疯草是中国西部影响草地生态和畜牧业健康发展的毒草之一。主要有豆科棘豆属和黄芪属有毒植物等,在冬季牧草严重缺乏的时节,牛羊等牲畜被迫采食后可引起中毒和生产性能下降,甚至死亡,每年给我国草地生态和畜牧业造成的直接经济损失达几十亿元,是危害最严重的毒草。目前,我国西部天然草地动物因疯草中毒死亡所造成的经济损失仍持续剧增。苦马豆素被认为是引起动物疯草中毒的主要毒性成分。由于疯草分布广泛,资源丰富,如何改善草地生态,合理开发利用疯草成为研究的课题和方向。近几十年来, 随着对疯草研究的深入和扩展,人们发现苦马豆素不仅具有良好的抗肿瘤效果,还可作为免疫调节剂、抗HIV及扩散抑制剂、抗病毒和细胞保护剂等药物使用。目前,国内在对苦马豆素抗肿瘤、调节机体免疫方面研究较热,但是,对苦马豆素在抗病毒活性、作用机理方面的研究尚无相关报道。为了探讨茎直黄芪中生物碱苦马豆素（swainsonine,SW）抗牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）的作用机制,明确其体外抗病毒作用效果,为抗BVDV的药物筛选提供参考依据。【方法】利用细胞培养技术,采用CPE观察法和MTT比色法相结合的方法测定不同浓度SW对牛肾原代细胞(madin-darby bovine kidney cells,MDBK)的毒性作用,确定药物的安全浓度和TD50,并分别采用先加药后感染病毒、先感染病毒后加药、药毒作用2 h后加入、感染病毒同时给药后再加药四种作用方式,检测不同浓度SW对BVDV入侵的阻断作用、复制的抑制作用、直接杀伤作用和综合作用,并计算不同作用方式下的治疗指数。【结果】结果显示：SW浓度小于0.256 μg•mL-1范围内对MBDK细胞无毒性作用,在大于0.512 μg•mL-1浓度下MBDK细胞表现出一定程度的病变,TD50为2.512 μg•mL-1,按Reed-Muench 氏法计算BVDV TCID50为10-4.7/0.1mL;在体外随苦马豆素质量浓度的增加,其抗BVDV作用具有很好的量效关系,且与作用方式有关,比较四种作用方式下的治疗指数1.05、2.47、2.08和3.21,说明SW对BVDV的综合作用（65.29%,P＜0.01）和复制（65.05%,P＜0.01）的抑制作用较好,亦有一定的直接杀伤作用,但对其入侵的阻断作用不佳。【结论】SW在体外有良好抗BVDV活性作用,并推测苦马豆素（SW）抗病毒的主要效应可能是SW能进入细胞内抑制BVDV的复制增殖以及直接灭活游离BVDV而发挥作用。     

藏草乌水煎提取液体外杀灭羊虱蝇药效及皮肤毒性试验研究

试验旨在研究藏草乌的水煎提取液在体外杀灭羊虱蝇的药效作用及其皮肤毒性、刺激性、过敏性试验,为藏草乌的开发利用和临床应用提供理论依据。将1%、2%、4%、8%、10%藏草乌水煎提取液分别滴于衬有吸水纸和羊虱蝇的平皿中,在1、2、4、8h时分别观察其对羊虱蝇的杀灭情况。取相同剂量1%、2%藏草乌水煎提取液均匀涂于大白兔的完整皮肤和破损皮肤,进行皮肤毒性、刺激性和过敏性试验。结果显示,给药1h后各浓度的藏草乌水煎提取液及阳性对照组均出现了不同程度的羊虱蝇杀灭效果,4h后阳性对照组杀灭率为100%,8h时,1%、2%藏草乌水煎提取液杀灭率达到70%,而2%藏草乌水煎提取液较1%药物组杀灭羊虱蝇效果好;皮肤毒性试验显示,大白兔皮肤无红斑、水肿,体重变化正常;皮肤刺激性试验结果显示,藏草乌提取液对大白兔皮肤无刺激性;皮肤致敏反应结果表明,藏草乌提取液对大白兔不具有致敏性。综上所述,藏草乌水煎提取液具有良好的体外杀灭羊虱蝇作用,且皮肤用药安全。     

L-鼠李糖的制备及检测方法研究进展

L-鼠李糖作为一种微量糖广泛分布于植物中，是食品加工中常用的甜味剂之一，还可用于生产香精香料。研究发现，L-鼠李糖还可以诱导酵母甘露聚糖提高在动物机体中a-甘露糖苷酶的活性，显示出良好的药用价值。一方面介绍了L-鼠李糖的制备方法及应用的研究情况，另一方面根据L-鼠李糖的化学性质及测定原理，结合近年来L-鼠李糖含量检测研究领域中的最新研究成果，综述了L-鼠李糖的检测方法，并重点从薄层色谱发（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）及二硝基水杨酸法（DNS）等几方面介绍L-鼠李糖的定性、定量检测方法，并对各种检测方法的优缺点进行了比较。     

12C6+重离子诱变海迪茨氏菌及其修复柴油污染土壤的研究

应用重离子束辐射改良海迪茨氏菌(Dietzia maris)菌株在降解方面的能力,将离子辐射学与环境修复学相结合,论证该菌在以柴油为代表的污染土壤中的修复能力.利用12C6+重离子能量为80MeV、LET为35.5keV·μm-1、吸收剂量率1Gy· min-1、辐射剂量为5～120Gy辐射具有降解石油烃的代表菌株Dietzia maris,经初选、复选筛选得到了突变菌株DMYR9,并对其在构建污染土壤样品中分解柴油率及修复前后土壤系统中酶活性相关参数与化学改良修复前后污染土壤样品相关数据进行对比分析.结果表明,土壤受柴油污染不久后过氧化氢酶、脱氢酶和脂酶的活性呈现上升趋势,由突变菌体DMYR9修复后的污染土壤系统中脂酶活性呈现最低下降趋势,随着土壤中柴油被DMYR9降解,脂酶活性又不断降低,突变菌体数量及柴油降解率都具有很好的正相关性.突变菌株DMYR9进行生物修复的效果优于化学法修复,这对今后在土壤污染治理中开发利用此突变菌体具有指导意义,并具有较高的后续应用利用价值.     

猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化

为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。     

六茜素的质量标准研究

试验考察了六茜素的质量要求,试验包括澄明度测定、无菌检查、渗透压测定、溶血性试验、酸度测定、局部刺激性试验、热原检查、过敏反应试验、含量测定。结果表明,六茜素符和注射剂的一般要求(中国兽药典委员会,2005)。