硝普钠诱导体外培养的海马神经元凋亡的研究

目的：观察一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）对体外培养的海马神经元凋亡的影响。方法：用终浓度分别为0、25、50、100、200、400、600μmol/L的SNP处理海马神经元24h，用MTT比色法分析细胞存活率，倒置显微镜、Hoechst 33258荧光染色观察凋亡的形态学改变，DNA琼脂糖凝胶分析凋亡的生化特征。结果：SNP可剂量依赖性的降低神经元的存活率，当SNP浓度为50μmol/L时，其存活率为56.2%；倒置显微镜观察可见神经元胞体固缩，突起断裂，网络消失；荧光显微镜可见染为高亮蓝色的典型凋亡小体，其细胞核明显固缩、凝聚和断裂，且随SNP剂量的增加，出现凋亡小体的细胞明显增多；50、100、200μmol/L SNP处理海马神经元，电泳图谱显示清晰的DNA梯度。结论：SNP可诱导培养的海马神经元凋亡。     

原花青素对Aβ25—35诱导PC12细胞氧化应激反应的保护作用

目的探讨原花青素对β-淀粉样肽25－35（Aβ25-35）诱导PCI2细胞凋亡及氧化应激反应的影响。方法3×10^8／LPCI2细胞培养24h,分别加入培养液（对照组）、10μmol／LAβ25-35（诱导组）、30mg/L原花青素＋10μmol／LAβ25－35（保护组）。24h后收集细胞,以Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡,比色分析测定MDA、H2O2含量和CAT活性。结果诱导组细胞可见凋亡特异性核固缩、核碎裂;MDA和H2O2含量与对照组比较明显增加（P〈0．01）,CAT活性明显降低（P〈0．05）。保护组与诱导组比较,凋亡特异性核固缩、核碎裂减少;MDA和H2O2含量明显降低（P〈0．01）,而CAT活性显著增强（P〈0．01）。结论原花青素可抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,可能与其抑制Aβ25-35引起的氧化应激反应有关。     

原花青素影响Aβ25-35诱导PC12细胞周期变化与细胞凋亡的可能机制

目的探讨原花青素（Proanthocyanidins,PAC）对β-淀粉样肽（25—35）[β amyloid peptide-（25—35）,Aβ25-35]诱导体外血清饥饿培养的PCI2细胞周期异常与凋亡保护作用的可能机制。方法种人培养瓶或板的PC12细胞贴壁后用常用血清饥饿培养使细胞同步于岛期,30mg／L的PAC预处理血清饥饿培养的PC12细胞,加入终浓度为25μmol／L Aβ25-35处理0～20h,通过RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测细胞周期蛋白依赖性激酶4（Cyclin—dependent kinase-4,CDK4）、磷酸化的视网膜纤维母细胞瘤蛋白（phosphorylated Retinoblastoma protein,pRb）、腺病毒E2启动子结合因子1（Adenovirus E2 factor-1,E2 F1）、B细胞淋巴瘤／白血病关联X蛋白（B-cell lymphoma／leukemia-2 Associated X protein,bax）基因表达的变化。结果与Aβ25—35诱导组比较,CDK4、E2F1、bax mRNA表达和CDK4、pR6、Bax蛋白表达降低。结论PAC可能通过下调CDK4、pRb、E2F1的表达,从而降低bax的活化,对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期异常与凋亡起保护作用的。     

丹酚酸B对Cu~(2+)介导的LDL氧化修饰的抑制作用

目的：动脉粥样硬化（Ａｓ）是心脑血管病的主要病理基础。近年的研究表明,氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）是ＬＤＬ致Ａｓ的重要因素。因此,寻找和筛选有效的抑制ＬＤＬ氧化修饰的抗氧化剂是当前防治Ａｓ的热点。丹酚酸Ｂ（Ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄ,Ｓａ１Ｂ）是从丹参中提取出的水溶性单体,具抗氧化性。本文采用无细胞氧化修饰系统（Ｃｕ２＋）对ＬＤＬ进行氧化修饰,研究Ｓａ１Ｂ对血浆ＬＤＬ氧化修饰的影响。方法：超速离心分离健康成人新鲜血中ＬＤＬ,分别与终浓度为０、１、５、１０、１５μｍｏｌ／ＬＳａ１Ｂ温育,然后加入Ｃｕ２＋（终浓度３μｍｏｌ／Ｌ）氧化修饰,于３７Ｃｏ共同温育２、４、６、８、１２ｈ。在每个时间点测定ＬＤＬ中ＴＢＡＲＳ生成量、ＬＤＬ中ＶｉｔＥ含量变化和荧光物质扫描。选择已知抗氧化剂ＶｉｔＥ、ＶｉｔＣ浓度均为５μｍｏｌ／Ｌ,与Ｓａ１Ｂ（５μｍｏｌ／Ｌ）重复上述实验操作。结果：Ｓａ１Ｂ可使ＬＤＬ中ＴＢＡＲＳ和荧光物质生成量明显减少,ＶｉｔＥ含量消失明显减缓,三项指标均与Ｓａ１Ｂ呈良好的效量关系。比较Ｓａ１Ｂ、ＶｉｔＥ和ＶｉｔＣ的抗氧化修饰的能力,当终浓度为５μｍｏｌ／Ｌ时,三者抑制氧化修饰的强度依次为：Ｓａ