基于马梨形虫地方虫株EMA和Bc48基因蛋白抗原的间接ELISA检测方法建立及其应用

以筛选马梨形虫地方虫株EMA和Bc48基因最佳抗原蛋白建立间接ELISA检测方法及其临床应用研究为目的,对已构建保存的pGEX4T-1/EMA1、PET-28a/EMA1、PET-28a/EMA2、PET-28a/EMA3、pGEX4T-1/Bc48和PET-28a/Bc48质粒进行优化表达,经KCl方法切胶纯化后作为间接ELISA包被抗原,经表达量、特异性、敏感性、重复性、符合性试验验证,筛选最佳重组抗原蛋白,优化、建立间接ELISA检测方法,并用于临床样品(n=1 584)的抗体检测。结果显示,筛选出的最佳重组抗原蛋白为GST-EMA1和His-Bc48,其可溶性蛋白表达量相比之下较高;以GST-EMA1、His-Bc48蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA可明显区分马梨形虫标准阴性和阳性血清;阳性血清梯度效价可达1∶800;批内重复率分别为96%和94%;与商品化cELISA试剂盒检测结果的符合率为96%。所检测的血清样品中,新疆昭苏、米泉、富蕴、阿克苏及和静样品混合感染率分别为2.27%,6.90%,1.72%,0.74%和1.18%;不同年龄马匹之间感染存在显著性差异(P=0.0000.05)。试验筛选出GST-EMA1、His-Bc48为最佳抗原蛋白,经临床试验验证所建立间接ELISA检测方法的特异性强和灵敏度高,为后期马梨形虫病血清学诊断用间接ELISA商品化试剂盒研制提供实验材料和技术支持。     

新疆部分地区牧马肠道寄生虫感染情况调查

为了解新疆地区牧马肠道寄生虫感染情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法对新疆19个市/县32个牧马群的共519份新鲜马粪便样本进行检查。结果显示:304份样品呈肠道寄生虫阳性,总感染率为58.4%;检出7种肠道寄生虫,以圆线虫为主要感染种类,感染率为53.8%,副蛔虫感染率次之,为13.7%;球虫、隐孢子虫、蛲虫、裸头绦虫和双腔吸虫的感染率分别为1.0%、0.8%、0.4%、0.4%和0.2%。不同地区牧马肠道寄生虫感染率差异极显著(P0.01);不同年龄段牧马肠道寄生虫感染率差异显著(P0.05)。调查表明,新疆不同地区牧马肠道寄生虫感染普遍,应加强综合防控。     

四氢异喹啉衍生物的合成及体外 抗多子小瓜虫活性的研究

合成四氢异喹啉衍生物并进行杀多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)药效评价。以1-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉为起始原料，在2位的胺基上引入与环己甲酰氯、苯甲酰氯、噻吩甲酰氯、乙酰氯以及氯乙酰氯等不同的酰基进而合成5种四氢异喹啉衍生物(化合物1~化合物5)，研究其对小瓜虫掠食体和包囊的杀虫活性，并对杀虫活性物质进行安全性评价。结果显示，5种化合物均具有一定的杀虫活性，其中，化合物1 [(1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-苯基-甲酮]的杀虫活性最强，其对多子小瓜虫掠食体4 h的100%杀灭浓度为24.0 mg/L，对包囊6 h的100%杀灭浓度为60.0 mg/L，对掠食体的半数致死浓度(LD50)为16.4 mg/L。急性毒性实验结果显示，化合物1对翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformi)的48 h LD50为234.3 mg/L，其安全浓度为64.1 mg/L。研究表明，化合物1 [(1-甲基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-苯基-甲酮]是一种具有较好开发前景的杀小瓜虫药物。     

高纬寒地适于机械化收获的玉米品种筛选

2015-2018年对若干玉米品种进行机械化收获的筛选工作,结果表明,德美亚1号连续4年产量最高,稳产性良好。克单14由于生育后期脱水速率偏慢,不利于机械收获;瑞福尔1号虽然产量较高,但易感北方炭疽病;中农玉6号熟期过晚,以上3个品种选择时要慎重。通过筛选最终推荐早熟品种2个,分别为鑫科玉1号和克玉16,其抽丝期比德美亚早5d,与德美亚1号熟期相当的品种推荐法尔利1010和院军1号。     

四唑虫酰胺对棉田斜纹夜蛾的防治效果

【目的】研究双酰胺类杀虫剂四唑虫酰胺对斜纹夜蛾的室内生测和田间药效试验。【方法】采用人工饲料混药法测定四唑虫酰胺对斜纹夜蛾3龄幼虫毒力,采用机率值分析方法对数据进行处理,用SAS统计分析系统计算毒力回归方程和LD₅₀。用喷洒药剂悬浮液的方法进行田间试验,使用邓肯新复极差法(DMRT)对不同处理防治效果进行统计分析。【结果】四唑虫酰胺对斜纹夜蛾的LD₅₀为0.58 μg/g,氯虫苯甲酰胺对斜纹夜蛾的LD₅₀为1.12 μg/g,四唑虫酰胺的杀虫活性较高,但与氯虫苯甲酰胺的差异不显著。药后3 d,18%四唑虫酰胺悬浮剂7.5和10 mL/667m²处理对斜纹夜蛾的防效分别为85.00%和87.87%,显著高于5.0 mL/667m² 药剂处理,与5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂 45 mL/667m²处理差异不显著。药后7 d,18%四唑虫酰胺悬浮剂 3个浓度处理对斜纹夜蛾的防效与5%氯虫苯甲酰胺 45 mL/667m²处理差异不显著。药后 14 d,18%四唑虫酰胺悬浮剂10 mL/667m²处理的防效显著高于5.0和7.5 mL/667m²药剂处理,但与5%氯虫苯甲酰胺 45 mL/667m²处理差异不显著。【结论】18%四唑虫酰胺悬浮剂对斜纹夜蛾具有良好的的防治效果,且随着浓度增高其防效增大。     

建昌马mtDNA D-loop区遗传多样性及系统进化分析

试验旨在以线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)为切入点,研究建昌马的母系遗传多样性与系统进化。从建昌马(n=39)血液中提取基因组DNA,用PCR方法扩增mtDNA D-loop区并直接测序,分析其高变区247 bp序列信息,统计mtDNA D-loop区的单倍型及变异位点,计算单倍型多样性(haplotype diversity,Hd)、核苷酸多样性(nucleotide diversity,Pi)和平均核苷酸变异数(average number of nucleotide differences,K)。构建包括建昌马在内的19个品种马的NJ系统进化树,计算各品种间的遗传距离。结果显示,试验获得了清晰的PCR扩增产物,并通过直接测序方法获得了约1200 bp的序列。39匹建昌马mtDNA D-loop区247 bp序列(其中1个样品缺失1 bp)的AT碱基含量为61.45%,属AT碱基对富集区,检测到33个多态性位点,共显示26种单倍型,其中4种为共享单倍型,且Hap7和Hap1为优势单倍型,单倍型多样性为0.947,核苷酸多样性为0.02399,平均核苷酸变异数为5.901,显示丰富的母系遗传多样性;NJ系统进化树显示,建昌马分布在A、C、D、E、F、G共6个支系中,约50%的样品分布在A支系,显示出复杂的母系起源;建昌马与关中马的遗传距离最小(0.021),其次是三河马、文山马、韩国车巨马(0.024),与韩国济州岛马遗传距离最大(0.032)。本研究结果表明,建昌马的mtDNA D-loop高变区遗传多样性丰富,具有多个母系起源,且A支系占有明显优势,与关中马、文山马可能有共同的母系起源。