江西省林业产权制度改革实践研究

2004下半年以来,江西省开展了一场声势浩大的林业产权制度改革,从已有的改革绩效来看,对 江西省林业长远发展产生了深远的影响。以江西省仍在进行的林业产权制度改革为例,阐述了林业产权制度改革的内容、成果以及在改革中存在的几个主要问题,并提出了相应的对策建议     

广西岩溶石山地区耕地整理的生态适宜性综合评价——以县级区域为例

广西分布有51个岩溶县（市）（岩溶面积>30%）,由于岩溶的脆弱性特点,开展土地开发整理过程中更加要保护和维护生态环境,即耕地整理需要对地域单元的生态适宜性进行系统分析。考虑到岩溶区的特点及评价指标定量化获取的程度,选择平均海拔、年均降雨、NPP等11个指标参与综合评价。利用统计分析技术中的主成分分析法,对指标进行降维处理,得到3个彼此独立的综合指标。根据综合指标得分,对广西51个岩溶县（市）耕地整理的生态适宜性潜力的相对状况进行了排序。     

LbCas12a蛋白的原核表达及活性检测

【目的】 获得具有体外切割活性的来自毛螺旋菌属(Lachnospiraceae) ND2006的LbCas12a蛋白，以期为LbCas12a的应用研究提供重要的生物学工具。【方法】 根据pMBP-LbCas12a质粒(Addgene，113431)的基因序列合成LbCas12a基因，并将其与pET-28a(+)线性化载体进行同源重组，构建重组质粒pET28a-LbCas12a，经测序和NheⅠ、SalⅠ双酶切鉴定后将阳性重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行IPTG诱导表达。通过12% SDS-PAGE凝胶电泳检测确定IPTG诱导的最佳浓度及温度，鉴定重组蛋白的表达形式，通过Ni-NTA树脂亲和层析的方法进行纯化、超滤法浓缩，BCA法检测蛋白浓度。将浓缩后的LbCas12a与猪细小病毒(PPV)靶标DNA、CRISPR RNA (crRNA)及偶联荧光基团的非特异性单链DNA(ssDNA)探针FQ共孵育，设置1个无LbCas12a蛋白的对照组、4个不同蛋白浓度(125、250、500、1 000 nmol/L)的试验组，检测不同组别ssDNA探针的荧光强度，检测测试位点PPV活性。【结果】 测序和NheⅠ、SalⅠ双酶切鉴定结果表明，重组质粒pET28a-LbCas12a构建成功且无移码突变。12% SDS-PAGE凝胶电泳检测结果表明，IPTG诱导表达的最佳浓度为0.5 mmol/L，最佳温度为37 ℃，表达形式主要为可溶性表达。蛋白浓度检测结果表明，浓缩后的蛋白浓度为485 ng/μL，质量为143 ku。活性检测结果表明，125、250、500、1 000 nmol/L LbCas12a蛋白组的荧光强度均极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】 本研究成功表达出高活性的LbCas12a蛋白，且LbCas12a蛋白具有体外切割ssDNA的反式活性，为后续基于CRISPR-LbCas12a系统的分子检测技术奠定了基础。