基于FDA-PI双荧光复染法的茄病镰刀菌孢子活性检测

【目的】茄病镰刀菌（Fusarium solani）孢子活性的检测是病害有效防控的基础。传统的孢子萌发法操作复杂,耗时费力,需要建立一种简便、快速的孢子活性检测方法。研究旨在建立基于荧光素二乙酸酯（fluorescein diacetate,FDA）-碘化丙啶（propidium iodide,PI）双荧光复染法和流式细胞术（flow cytometry,FCM）的茄病镰刀菌孢子活性检测技术。【方法】通过测定FDA和PI的最佳染色时间和最佳工作浓度,建立茄病镰刀菌孢子活性检测的FDA-PI复染法。为评价该方法的准确性,一方面用FDA-PI法检测已知死孢子比例（0、25%、50%、75%、100%）的茄病镰刀菌样品,分析实测死亡率和理论死亡率的相关性;另一方面,经物理、化学和杀菌剂处理后,比较FDA-PI复染法和孢子萌发法的检测结果。【结果】确定了FDA和PI的最佳染色参数,其中PI的最佳工作浓度为3 µg·mL^-1,最佳染色时间为4℃处理10 min;FDA的最佳工作浓度为100 µg·mL^-1,最佳染色时间为25℃处理20 min。用该技术检测已知死孢子比例样品,各样品实测孢子死亡率和理论死亡率之间呈极显著正相关（R²=0.99,P＜0.05）。经物理和化学处理后,FDA-PI复染法测得的孢子死亡率与孢子萌发法测得的孢子萌发率之间也呈显著负相关（R²=0.99,P＜0.05）。经杀菌剂处理后,随着药剂浓度增高,对茄病镰刀菌杀灭效果增强。其中,氰胺化钙处理后,FDA-PI复染法和孢子萌发法检测孢子死亡率结果一致;而咯菌腈和多菌灵处理后,FDA-PI复染法检测孢子死亡率略低于孢子萌发法检测结果。【结论】建立了基于FDA-PI复染法和流式细胞术的茄病镰刀菌孢子活性检测技术,该技术可以替代传统的孢子萌发方法,大幅度缩减病原菌活性检测时间,提高检测效率,对植物病原真菌活性检测平台的建立具有重要的参考价值,将其应用于杀菌剂的筛选还需要进一步的深入研究。     

水杨酸诱导烟草对TMV的抗性和PAL活性变化研究

 植物内源水杨酸(SA)可能是诱导植物产生系统抗病性(SAR)的信号物质,它在植物体内具有多种生理调节作用。     

生防菌ZF510的分离鉴定及其对白菜细菌性软腐病的防治效果研究

白菜软腐病是由巴西果胶杆菌Pectobacterium brasiliense引起的一种危害严重的细菌性病害。目前,针对蔬菜细菌性软腐病高效防治的产品较少。为了筛选对白菜细菌性软腐病具有良好拮抗效果的生防细菌,本研究从白菜根际土壤中分离到一株对细菌性软腐病菌具有显著拮抗效果的生防细菌ZF510。经过形态学特征观察、生理生化特征和多基因系统发育树分析,并通过盆栽试验验证拮抗菌株对白菜细菌性软腐病的防治效果。结果表明,菌株ZF510为东湖假单胞菌Pseudomonas donghuensis,在代谢过程中产生蛋白酶,有合成IAA能力、嗜铁能力、溶磷能力。通过抑菌谱分析,证明菌株ZF510对巴西果胶杆菌、野油菜黄单胞野油菜致病变种等7种病原细菌具有显著的拮抗效果。采用二分皿法测定其挥发性物质对立枯丝核菌、黄瓜蔓枯病菌、茄匍柄霉3种病原真菌均有抑制效果。盆栽试验结果显示,接种菌株ZF510的白菜细菌性软腐病症状明显减轻,防治效果达到44.56%。综上所述,菌株ZF510具有良好的生防潜力和应用前景。     

黄瓜多主棒孢菌致病基因CcTLS2功能探究

为探究CcTLS2基因在多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）致病过程中的作用,以强致病力菌株HG14102524为研究对象,通过克隆多主棒孢菌CcTLS2基因,构建Cc TLS2敲除株,并结合生物信息学分析、致病力测定、差异表达分析等方法,初步确定了CcTLS2对多主棒孢菌致病的影响。与野生型菌株相比,CcTLS2基因敲除菌株致病力丧失,菌落生长速度变慢,产孢量显著减少。多主棒孢菌G蛋白信号途径相关基因（A7125、A1402、A0835、A8311和A2529）在CcTLS2敲除株中的相对表达量显著下调。结果表明,CcTLS2可能通过G蛋白相关途径影响多主棒孢菌的产孢机制、菌丝生长和致病力,在多主棒孢菌致病中起重要作用。     

Erwinia persicina引起番茄细菌性叶斑病的鉴定

<正>番茄(Lycopersicon esculentum)属于茄科番茄属植物，含有丰富的营养物质，是人们喜欢的一种物美价廉的蔬菜。随着番茄种植面积不断扩大，细菌性病害的发生日趋严重，番茄细菌性叶斑病，主要为害番茄的茎、花、叶柄和果实^[1]。2021年春季，发现山东省菏泽市东明县设施番茄温室，番茄植株表现出的症状与已报道的番茄细菌性叶斑病相似。叶片症状为不规则的褐色及深褐色斑点，随着病害的发展，斑点聚集变成叶片的坏死区，     

多主棒孢SdhB-H278Y突变位点real-time PCR检测体系的建立与应用

根据Gen Bank已登录序列中黄瓜多主棒孢琥珀酸脱氢酶B亚基(Sdh B)基因序列差异，针对Sdh B-H278Y突变设计特异性引物，建立Sdh B-H278Y突变实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测体系。结果表明：供试多主棒孢携带Sdh B-H278Y、Sdh B-I280V突变；Sdh B-H278Y突变株对啶酰菌胺抗性较强，EC₅₀值为21.47μg·m L^-1或>30μg·m L^-1；建立的real-time PCR检测体系具有良好的线性关系，相关系数R²=0.992 9，可特异性检测Sdh B-H278Y突变，灵敏度为3.6×10^-4ng·μL^-1，为AS-PCR的10倍。利用携带Sdh B-H278Y突变不同比例的基因组DNA对检测体系进行验证，预期值与检测值具有很高的相关性，R²=0.999 7；利用该检测体系对山东地区黄瓜棒孢叶斑病病斑中多主棒孢Sdh B-H278Y突变株所占比例进行检测，检测...     

银川、徐州和赤峰地区番茄病毒病种类的鉴定

对2021年发生在银川、徐州、赤峰的番茄叶片出现黄绿相间的斑驳、叶片皱缩卷曲、植株矮化等疑似番茄病毒病的症状进行了鉴定。利用12种番茄病毒病的特异性引物进行RT-PCR检测，发现所检测的不同地区样品中，侵染番茄最多的病毒为黄瓜花叶病毒（CMV），检出率为60.00%，其次是番茄斑萎病毒（TSWV），检出率为46.67%。通过核苷酸序列比对发现，检测出的这2种病毒与CMV(AJ131619.1)和TSWV(MK318839.1)同源性最高，相似度分别为97%和99%。同时，基于CMV和TSWV基因序列构建系统发育树表明，宁夏银川地区番茄病毒样本为CMV和TSWV复合侵染。     

番茄褐色皱纹果病毒分子检测与鉴定

利用3对番茄褐色皱纹果病毒（Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV）特异性引物对云南红河、宁夏银川、北京顺义疑似病毒病样本进行RT-PCR检测，分别扩增出大小为812、842、1 053 bp的特异性条带。对扩增产物进行测序及系统进化分析，发现云南、宁夏、北京的ToBRFV分离物与约旦、意大利、荷兰的ToBRFV分离物聚在同一分支上，亲缘关系较近。致病性结果显示，接种后的番茄植株表现出与田间相同的症状，且在发病组织中检测到病毒ToBRFV。表明来自云南红河、宁夏银川、北京顺义的番茄植株均被ToBRFV侵染。     

解淀粉芽胞杆菌YB114对黄瓜棒孢叶斑病的生防效果及发酵条件优化

解淀粉芽胞杆菌YB114为本研究团队筛选出的一株对黄瓜棒孢叶斑病(Corynespora leaf spot)具有较高活性的生防菌株。为加快其产业化进程，本试验研究了该菌株的生物活性及发酵条件。盆栽试验结果表明，100倍发酵稀释液处理对黄瓜棒孢叶斑病的治疗及预防效果分别为85.72%和42.29%,100倍发酵上清稀释液的治疗及预防效果分别达到74.14%和33.25%,菌株发酵液和上清液对黄瓜棒孢叶斑病的治疗效果好于预防效果。YB114发酵液对黄瓜植株有促生效果，叶面喷施后黄瓜茎长、根长、叶面积及地上部生物量增加，叶片中叶绿素、生长素和玉米核苷素含量显著增加。发酵最优培养基为10 g/L果糖、17 g/L水溶性花生饼粉、1 g/L磷酸二氢钾。最佳发酵条件为：装液量40 mL/250 mL三角瓶，接种量6%(体积分数)、pH 7.0,转速180 r/min,温度32℃,发酵时间24 h。优化发酵条件后YB114对棒孢叶斑病的防效提升了22.4%。