Construction and Partial Biological Characteristics Analysis of Listeriolysin S llsB Gene Deletion Strain

In order to analyze the effect of listeriolysin S (LLS) llsB gene deletion on the biological characteristics of Listeria monocytogenes (LM),this study used homologous recombination to construct the llsB gene deletion strain LM90-ΔllsB,and the biological characteristics of growth characteristics,median lethal dose (LD₅₀) and organ-borne bacteria were studied in healthy Kunming male mice at 8 weeks old and weighing 40 g±5 g.The llsB gene deletion strain was successfully constructed,and the deletion strain had good genetic stability through continuous passage to 20 generations in vitro.Based on its growth curve examination,we found that the growth rate of the mutant strain was slightly higher than that of the parent strain.The results of mice infection test showed that the LD₅₀ of the parent strain and the deletion strain were 10^6.17 and 10^6.50 CFU,respectively.Compared with the parent strain,the amount of bacteria load of the deletion strain in the liver and spleen of the mice was extremely significantly decreased (P<0.01),the results showed that the infection ability of the mutant strain on mice was obviously weakened.No Listeria monocytogenes was detected in the brain.The results suggested that llsB gene might have direct or indirect regulatory effect on some biological characteristics of LM90,and it would provide a theoretical basis for further understanding of the pathogenic mechanism of LLS,prevention and control of listeriosis.     

副猪嗜血杆菌临床分离菌的药物敏感性试验与ERIC-PCR基因分型

从河南、湖北等7个省份的323份疑似副猪嗜血杆菌(HPS)典型病料中分离获得HPS菌104株。对这些分离菌株进行了16s RNA鉴定,用微量肉汤稀释法观察了这些菌株对12种抗菌药物的敏感性,并用ERIC-PCR方法对分离菌进行了基因分型。结果表明:所有菌株都对痢菌净和沃尼妙林敏感,对复方磺胺-5-甲氧嘧啶钠、四环素、环丙沙星、林可霉素、卡那霉素、甲砜霉素、红霉素、氨苄西林、头孢噻呋和头孢喹肟的耐药率分别为93.3%、51.9%、51.0%、26.0%、10.6%、13.5%、37.5%、39.4%、5.8%和1.9%;大多数菌株耐2~5种抗生素,所占比例达到69.2%;在104株分离株中有99株可以进行ERIC-PCR分型,按80%的相似性可分为18个ERIC-PCR谱型;包含菌株最多的谱型为型,有25株;其次依次为Ⅵ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅶ型,分别有18、13、13、9株;除耐林可霉素的菌株较均匀地分布于12个ERIC-PCR型外,耐其它5种药物的菌株大多集中分布于2~3个ERIC-PCR型中。     

双季早稻适宜机插株距研究

该文以常规早籼稻品种浙辐203为供试材料,井关PZ80D-25型高速插秧机为供试插秧机械;试验设定25cm固定行距,株距设置为11cm、12cm、14cm、17cm4个处理水平,试图探索双季早稻毯状秧机插的适宜株行距。结果表明,不同株行距配置不影响生育期表现;不同株行距配置对有效穗数影响显著,11cm、12cm株距处理的有效穗数较14cm、17cm株距处理提高13%以上;株距为11cm、12cm的小株距处理所构建的大群体并未导致结实率和穗粒数的显著降低;11cm、12cm株距设计具有更好的群体结构和产量构成,同时表现出更优的实际产量结果。综合来看,25cm×11cm和25cm×12cm是沿江双季稻北缘地区双季早稻毯状秧机插最佳的株行距配置。     

基于共表达网络分析发掘调控玉米株高发育的关键ZmGRF基因

生长调控因子(growth-regulating factors,GRF)基因家族是一类植物特有的转录因子。在模式植物水稻、拟南芥中,部分GRF基因被证实是影响株高发育的核心调控因子。利用加权基因共表达网络分析方法(Weighted Gene Co-expression Network Analysis, WGCNA),初步构建以玉米ZmGRF基因与调控株高发育的功能基因为核心的共表达网络。结果表明,有9个ZmGRF基因与已报道的调控株高发育基因具有显著的共表达关系,并呈现出网络化的共表达模式,推测这9个ZmGRF基因是调控玉米株高发育的潜在候选基因。进一步通过微共线性分析发现,9个ZmGRF候选基因中有8个基因可以形成基因对,并且所有基因对的Ka/Ks值均显著小于1,暗示调控株高发育候选ZmGRF基因功能的保守性。     

水禽变形杆菌的分离鉴定与药物敏感性分析

本研究从临床疑似变形杆菌感染水禽病例中分离到17株细菌,对新分离菌株进行形态学、菌株生化特性、变形杆菌atpD基因特异性PCR鉴定以及菌株药物敏感性试验。结果显示:菌株镜检为革兰阴性菌,具有明显多形性;在鲜血琼脂培养基上有明显的迁徙现象;atpD基因特异性PCR扩增并测序比对确认分离株为变形杆菌;药敏试验结果表明,本研究分离的水禽变形杆菌具有多重耐药性,对常用抗生素表现低敏或耐药,仅对庆大霉素敏感。     

不同浓度NAA对变异株云烟97快速繁殖的影响

为了保存全株没有病虫害叶片、产量又极高的镇坪县云烟97这一良好的种质资源，研究采用快速繁殖技术研究不同浓度NAA对变异株云烟97形成的愈伤组织诱导芽及根分化的影响。结果表明，NAA浓度为0.2 mg·L^-1的时候，对变异株云烟97愈伤组织诱导芽的形成有一定的促进作用，但随浓度升高，分化率下降；NAA对云烟97愈伤组织诱导根的形成有抑制作用，抑制作用随着浓度升高逐渐加强。因此，诱导云烟97出芽时，可添加浓度为0.2 mg·L^-1的NAA，诱导云烟97生根时，培养基配方不加NAA会更好地促进生根，NAA可与其他调节剂配合使用。     

不同产地乌拉尔甘草及其内生细菌的抑菌活性比较

【目的】比较甘肃产地与新疆产地乌拉尔甘草及其内生细菌抑菌活性的差异性.【方法】采用组织块及平板划线法,分别对甘肃和新疆产地乌拉尔甘草内生细菌分离纯化,用打孔法分别筛选具有抑制肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌的有效菌株,进一步进行理化鉴定;用平板对峙法和二倍稀释法,以抑菌直径、最小抑菌浓度为指标,比较各有效菌株与宿主及各有效菌株之间的抑菌活性.【结果】甘肃酒泉产乌拉尔甘草共分离出内生细菌162株,与空白组比较,对肺炎链球菌有抑制作用的3株,对金黄色葡萄球菌有抑制作用的11株;与宿主比较,JQYB006、JQYB037、JQYB050、JQYB070对金黄色葡萄球菌的抑菌活性与其宿主相近,综合比较JQYB037活性显著,最小抑菌浓度为4.01×10~5CFU/mL.新疆甘草共分离出内生细菌83株,与空白组比较,对肺炎链球菌有抑制作用的3株,对金黄色葡萄球菌有抑制作用的6株;与宿主比较,XJYB023对肺炎链球菌的抑菌活性与其宿主相近,XJYB051、XJYB053对金黄色葡萄球菌的抑菌活性优于其宿主(P<0.05).宿主间比较,甘肃乌拉尔甘草对金黄色葡萄球菌的抑菌活性优于新疆甘草(P<0.05);有效菌株间比较,JQYB006、JQYB050、JQYB070对金黄色葡萄球菌的抑菌活性与XJYB051、XJYB053相近或相似.【结论】甘肃乌拉尔甘草对肺炎链球菌的抑菌活性优于新疆乌拉尔甘草,且甘肃乌拉尔甘草及其内生菌对金黄色葡萄球菌的抑菌活性均优于新疆乌拉尔甘草.     

青海云杉无性系的遗传多样性

【目的】通过对青海云杉无性系遗传多样性和亲缘关系的研究,以期为青海云杉高世代种子园的建立提供可靠的建园材料.【方法】以109个青海云杉种子园内的无性系作为研究对象,采用正交试验设计和单因素分析方法,建立并优化了青海云杉的SSR-PCR反应体系,利用筛选出的10对有效引物,分析青海云杉无性系遗传多样性.【结果】基于SSR分子标记对109个青海云杉无性系遗传多样性分析,共扩增出230条多态性条带,多态百分率(PPL)为100.00%,平均有效等位基因数(n_e)为14.76,平均观测杂合度(H_o)为0.06,平均期望杂合度(H_e)为0.92,平均Shannon′s多态性信息指数(I)为2.77.【结论】采用UPGMA聚类分析方法,将109个无性系分为5组,差异明显,此结果与种子园建园材料的地理来源广泛和个体间基因交流广泛吻合,揭示了青海云杉无性系间的遗传多样性较为丰富.     

鸡源弯曲菌的分离鉴定和耐药性检测

为了解弯曲菌在肉鸡养殖场中的流行和耐药情况,于2018年12月至2019年6月从广东省某肉鸡养殖场随机采集泄殖腔拭子140份,进行弯曲菌的分离鉴定、药敏试验和耐药基因的检测。结果共分离到75株弯曲菌,分离率为53.6%,其中结肠弯曲菌的分离率为30%,空肠弯曲菌的分离率为23.6%,结肠弯曲菌为优势弯曲菌。药敏试验显示,分离菌株对萘啶酸的耐药性最高(88.0%)。庆大霉素和红霉素作为治疗弯曲菌感染的一线药物其耐药率分别为68.0%和73.3%。75株弯曲菌对12种抗生素产生了47种耐药模式,多重耐药率达到了92.0%。耐药基因检测发现,四环素类耐药基因tet(O)检出率高达62.7%。研究表明,广东省肉鸡养殖场中弯曲菌的污染率较高,耐药情况严重,耐药谱复杂多样,多重耐药率较高,对公共卫生具有潜在威胁,需要加强监测与深入研究。